Die Rolle definierter Subpopulationen humaner peripherer Blutzellen für die Masernvirus-induzierte Immunsuppression und Immunaktivierung:
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2002
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I
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG
_1
1.1 MASERN_1
1.1.1 DAS VIRUS_1
1.1.1.1 MV TROPISMUS UND REZEPTORBENUTZUNG_3
1.1.2 DIE PATHOGENESE DER AKUTEN MASEMINFEKTION_4
1.1.3 DIE IMMUNANTWORT NACH AKUTEN MASERN UND IMPFUNG_5
1.1.4 DIE MV-ASSOZIIERTE IMMUNSUPPRESSION _ 6
1.2 DIE BEDEUTUNG DER UNSPEZIFISCHEN IMMUNITAET FUER DIE INFEKTABWEHR_8
1.2.1 Y6 T ZELLEN UND IHRE ROLLE IN DER IMMUNANTWORT_9
12.1.1 DIE YYANTIGENEIKENNUNG" VON Y8 T ZELLEN_10
1.2.1.2 DIE ROLLE VON Y8 T ZELLEN BEI ERKRANKUNGEN_12
1.2.2 DIE TOLL-AEHNLICHEN REZEPTOREN_12
1.2.2.1 TLR-AGONISTEN_13
1.2.2.2 DIE SIGNALWEGE_ 15
1.3 ZIELSETZUNG DER ARBEIT_ 17
2 MATERIAL_18
2.1 ZELLKULTUR_ 18
2.1.1 ZELLINIEN_ 18
2.1.2 PRIMAERE ZELLEN_ 20
2.1.3 MEDIEN UND ZUSAETZE_ 20
2.2 MAUSSTAEMME_ 21
2.3 VIREN_ 21
2.4 ANTIKOERPER_ 22
2.5 REAGENZIEN, PUFFER_ 23
2.5.1 STIMULANTIEN_ 23
2.5.2 CHEMIKALIEN_ 23
2.5.3 PUFFER UND LOESUNGEN_ 23
2.6 RADIOAKTIVITAET_ 24
2.7 KITS_ 24
2.8 VERBRAUCHSMATERIAL_ 24
2.9 GERAETE_25
3 METHODEN
_
2
6
3.1 ZELLKULTUR_ 26
3.1.1 ZELLINIEN_ 26
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/967114187
II
3.1.2 PRIMAERE ZELLEN_26
3.1.2.1 ISOLIERUNG PRIMAERER HUMANER MONONUKLEAERER ZELLEN UND WEITERE
AUFREINIGUNG DER
ZELLPOPULATIONEN AUS PERIPHEREM BLUT_26
3.1.2.2 IN
F 'HRA-GCNERATION HUMANER MODC _27
3.1.2.3 ISOLIERUNG VON MAKROPHAGEN AUS DEM PERITONEUM VON MAEUSEN_27
3.1.3 ZELLZAHLBESTIMMUNG_28
3.1.4 EINFRIEREN/AUFTAUEN VON ZELLEN_28
3.1.5 MYKOPLASMENTESTUNG UND LIMULUS LYSAT TEST_28
3.2 VIREN_ 28
3.2.1 ZUCHT UND AUFREINIGUNG_28
3.2.2 TITERBESTIMMUNG DER VIRUSSTOCKS_29
3.2.3 EINSTELLUNG DES MV-GLYKOPROTEINGEHALTS MITTELS YYWESTERN
BLOT-ANALYSE"_30
3.3 T ZELL-PROLIFERATIONSTESTE_32
.3.3.1 PRESENTERZELLEN (PC)_32
.3.3.1.1 PERSISTIEREND INFIZIERTE ZELLINIEN_32
3.3.1.2 INFEKTION VON MODC_32
3.3.2 PHA PROLIFERATIONSTEST_32
3.3.3 IPP/IL-2-VERMITTELTE Y5 T ZELL-EXPANSION_34
3.3.4 GEMISCHTE LEUKOZYTENREAKTION_34
3.4 STIMULATION VON ZELLEN_ 35
3.4.1 STIMULATION DER CHO ZELLEN_3 5
3.4.2 STIMULATION VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN_35
3.5 DURCHFLUSSZYTOMETRIE_ 36
3.6 MRNA NACHWEIS MITTELS YYRNASE PROTECTION ASSAY"_37
3.6.1 RNA-ISOLATION_ 37
3.6.2 SYNTHESE DER RADIOAKTIVEN PROBE_ 37
3.6.3 PRAEPARATION DER RNA UND HYBRIDISIERUNG_ 38
3.6.4 RNASE-BEHANDLUNG_ 38
3.6.5 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG DER YYGESCHUETZTEN" PROBEN_39
3.7 ZYTOKINNACHWEIS MITTELS YYELISA" UND BIOASSAY_39
3.8 STATISTIK_ 40
4 ERGEBNISSE_41
4.1 DIE INTERAKTION ZWISCHEN MASERNVIRUS UND Y5 T ZELLEN_41
4.1.1 DIE EXPANSION VON Y8 T ZELLEN
IN VITRO_. 41
4.1.2 MASEMVIRUS-INFIZIERTE PROBANDEN_ 43
4.1.3 DIE Y5 T ZELL-PROLIFERATION IST NACH KONTAKT MIT UV-INAKTIVIERTEM
VIRUS INHIBIERT_47
4.1.4 PERSISTIEREND-INFIZIERTE T-ZELL UND MONOZYTEN-AEHNLICHE ZELLINIEN
HEMMEN DIE Y5 T ZELL
PROLIFERATION, NICHT ABER PERSISTIEREND INFIZIERTE B-ZELLINIEN_48
4.1.5 LYTISCH INFIZIERTE DENDRITISCHE ZELLEN HEMMMEN ZWAR CXSS T ZELLEN,
NICHT ABER Y5 T ZELLEN
LPS_ 52
III
4.1.6 MONOZYTEN WERDEN BENOETIGT, UM EINE AUFHEBUNG DES INHIBITORISCHEN
EINFLUSSES DES
MASEMVIRUS AUF DIE Y8 T ZELL-PROLIFERATION ZU BEWIRKEN _53
4.1.6.1 DIESER EINFLUSS BERUHT AUF DER SEKRETION VON ZYTOKINEN, BZW DER
EXPRESSION VON
OBERFLAECHENMOLEKUELEN _56
4.2 DIE INTERAKTION ZWISCHEN MASERNVIRUS UND DEN TOLL-AEHNLICHEN
REZEPTOREN_60
4.2.1 MASEMVIRUS- WILDTYP, NICHT ABER VAKZINE-STAEMME, AKTIVIEREN ZELLEN
VIA TLR2_60
4.2.2 DIE AKTIVIERUNG VON ZELLEN UEBER TLR2 ERFORDERT WEDER DEN
VIRUSEINTRIT NOCH REPLIKATION,
ABER KONTAKT ZWISCHEN ZELLE UND VIMS_66
4.2.3 DIE FAEHIGKEIT DES WILDTYPEN, ZELLEN UEBER TLR2 ZU AKTIVIEREN, IST
NICHT SPEZIES-SPEZIFISCH UND
WIRD DURCH CD 14 VERSTAERKT_68
4.2.4 DAS HAEMAGGLUTININPROTEIN DER WILDTYP-MASEMSTAEMME INDUZIERT DIE
TLR2-ABHAENGIGE
ZELLAKTIVIERUNG. DIESE FAEHIGKEIT GEHT DURCH DEN AUSTAUSCH EINER EINZIGEN
AMINOSAEURE
VERLOREN_70
4.2.5 MONOZYTEN WERDEN DURCH WILDTYP-MASEM AKTIVIERT_73
4.2.6 DER AKTIVIERENDE EFFEKT DER WILDTYP MASEMVIREN AUF DIE MONOZYTEN
IST
ABHAENGIG VON TLR2 _ 80
5 DISKUSSION_84
5.1 DIE INTERAKTION ZWISCHEN MV UND Y5 T ZELLEN_84
5.2 DIE INTERAKTION VON MV MIT DEN TOLL-AEHNLICHEN REZEPTOREN_94
6 ZUSAMMENFASSUNG
_ 103
7 SUMMARY
_105
8 LITERATUR
_ 107
9 ABKUERZUNGEN
_IM
10 LEBENSLAUF
_ 138
11 VEROEFFENTLICHUNGEN
_ 139
11.1 PUBLIKATIONEN_ 139
11.2 VORTRAEGE_ 139
11.3 POSTERPRAESENTATIONEN_ 140 |
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