Entwicklung eines hämatopoetischen in vitro Modells zur Durchführung von Reihenuntersuchungen und dessen Anwendung:
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| Language: | German |
| Published: |
Kirchentellinsfurt
Knirsch
2002
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1. EINLEITUNG
1.1. Charakterisierung der neuen Tumorinhibitor-Substanzklasse der Firma
Klinge Pharma GmbH 2
1.2. Zielsetzung dieser Arbeit 3
2. MATERIAL UND METHODE
2.1. Lymphozyten 9
2.1.1. Isolation 9
2.1.1.1 murine Lymphozytenisolation (Material, Methode) 9
2.1.1.2 humane Lymphozytenisolation (Material, Methode) 10
2.1.2. Versuchsdurchführung 12
2.1.2.1 Versuchsansatz 12
2.1.2.2 Substanzinkubation 12
2.1.2.3 Lymphozytenstimulation 12
2.1.3. Testsysteme 12
2.1.3.1 PI/DIOQs Färbung: Vitalitäts-Nachweis (Material, Methode) 12
2.1.3.2 Pl Färbung: Vitalitäts-Nachweis (Material, Methode) 14
2.1.3.3 SR/DAPI Färbung: Apoptose-Nachweis (Material, Methode) 14
2.1.3.4 WST-1 Messung: Nachweis metabolischer Aktivität (Material, Methode) 16
2.2. Knochenmarkstammzellen 16
2.2.1 Gewinnung 16
2.2.1.1 Gewinnung muriner Knochenmarkzellen (Material, Methode) 16
2.2.1.2 Gewinnung humaner Knochenmarkzellen (Material, Methode) 17
2.2.2. Versuchsdurchführung 19
2.2.2.1 Agarkulturen: Koloniestammzell-Test (Material, Methode) 19
3. ERGEBNISSE
3.1. Lymphozyten 21
3.1.1. Wahl der Lymphozytenquelle 21
3.1.2. Bedingungen für Reihenversuche mit murinen Lymphozyten 22
3.1.2.1 Konzentrationsabhängiger Effekt und dessen zeitlicher Verlauf 22
3.1.2.2 Untersuchung und Beurteilung weiterer Parameter (WST-1, SR/DAPI) 23
3.1.2.3 Reproduzierbarkeit der Ergebnisse 25
3.1.2.4 Einfluß des Lymphozytenstatus 27
3.1.3. Bedingungen für Reihenversuche mit humanen Lymphozyten 29
3.1.3.1 Konzentrations-und Zeitabhängiger Effekt verschiedener Parameter 29
3.1.3.2 Reproduzierbarkeit der Ergebnisse 31
3.1.3.3 Einfluß des Lymphozytenstatus 32
3.1.4. Der Lymphozyt im Reihenversuch 33
3.1.4.1 Ergebnisse der Reihenversuche mit murinen Lymphozyten 34
3.1.4.2 Ergebnisse der Reihenversuche mit humanen Lymphozyten 37
3.1.4.3 Ergebnisse der Reihenversuche von humanen und murinen
Lymphozyten im Vergleich 40
3.2. Knochenmark 43
3.2.1. Murines Knochenmark 43
3.2.1.1 Wachstumskurve von Stammzellen unter optimalen Kulturbedingungen 43
3.2.1 2 Dosiswirkungskurve von K22.097 im Vergleich zu Adriamycin 45
3.2.1.3 Reproduzierbarkeit der Ergebnisse 47
3.2.1.4 Vergleich von frischem mit eingefrorenem Knochenmarkmaterial 47
3.2.1.5 Verwendung unterschiedlicher Mausstämme 48
3.2.1.6 Vergleich zwischen Männchen und Weibchen 50
3.2.2. Humanes Knochenmark 51
3.2.2.1. Wachstumskurve von Stammzellen unter optimalen Kulturbedingungen 51
3.2.2.2. Dosiswirkungskurve von K22.097 im Vergleich zu Adriamycin 52
3.2.2.3. Reproduzierbarkeit der Ergebnisse 54
3.2.2.4. Effekt von K22.097 auf das Stammzellenwachstum im Detail 54
3.2.2.5. Effekt von K22.097 auf im Wachstum stimulierte Stammzellen 56
3.2.2.6. Untersuchung inter-individuelle Unterschiede 57
3.2.3. Das Knochenmark im Reihenversuch 58
3.2.3.1. Ergebnisse der Reihenversuche für das murine Knochenmark 59
3.2.3.2. Ergebnisse der Reihenversuche für das humane Knochenmark 61
3.2.3.3. Ergebnisse der Reihenversuche von humanem und murinem
Knochenmark im Vergleich 62
3.3. Erstellung von Substanzprofilen 64
4. DISKUSSION 67
5. ZUSAMMENFASSUNG 80
6. VERWENDETE ABKÜRZUNGEN 81
7. ÜBERSICHT ÜBER TABELLEN UND ZEICHNUNGEN 83
8. LITERATURVERZEICHNIS 90 |
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