Vitellogenin-ähnliche Proteine in Muscheln (Anodonta cygnea, Mytilus edulis): elektrophoretische und immunchemische Untersuchungen an verschiedenen Geweben
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
I INHALTSVERZEICHNIS
I INHALTSVERZEICHNIS 1
II ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 5
1 ALLGEMEINE ABKUERZUNGEN 5
2 VERWENDETE ARTEN 6
III EINLEITUNG 8
1 ENDOKRINE DISRUPTOREN 8
2 OESTROGEN-WIRKSAME SUBSTANZEN 11
3 NACHWEIS OESTROGEN WIRKSAMER SUBSTANZEN (TESTSYSTEME) 13
4 NOMENKLATUR VON DOTTERPROTEINEN 14
5 MECHANISMUS DER VITELLOGENINBILDUNG DURCH OESTROGEN WIRKSAME
SUBSTANZEN 15
6 TAXONOMISCHE ZUORDNUNG 15
7 ANATOMIE VON MUSCHELN 16
8 MUSCHELN ALS INDIKATORORGANISMEN FUER UMWELTCHEMIKALIEN 20
9 ZIELE DER ARBEIT 23
IV MATERIAL UND METHODEN 24
1 GERAETE UND SONSTIGE BEDARFSGEGENSTAENDE 24
2 CHEMIKALIEN 24
3 BESTIMMUNG DES PROTEINGEHALTES 26
4 SILBERFARBUNG 28
4.1 LOESUNGEN 28
4.2 DURCHFIIHRUNG 28
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
5 FAERBUNG MIT COOMASSIE 29
5.1 FAERBELOESUNG
29
5.2 DURCHSSHRUNG
29
6 FAERBUNG MIT SYPRO RED 29
7 PUFFER FUER ELEKTROPHORETISCHE UNTERSUCHUNGEN 30
7.
1 1,5 M TRIS-HCL PUFFER PH 8,8 30
7.2 1,0M TRIS-HCL PUFFERPH 6,8 30
7.3 2,5 M TRIS-HCL PUFFER PH 6,8 30
7.4 SDS-PROBENPUFFER (NICHT REDUZIEREND)
' 31
7.5 SDS-PROBENPUFFER (REDUZIEREND) 31
7.6 SDS-PROBENPUFFER (5X, REDUZIEREND) 31
7.7 SDS-PROBENPUFFER (IX, REDUZIEREND) 31
7.8 SDS-LAUJPUFFER (LOX) PH 8,3 31
7.9 SDS-TRENNGEL (100 ML) 32
7.10 SDS-SAMMELGEL (4,5 %, 10 ML) 32
7.11 PBS 80 MMPH 7,6 32
8 EINDIMENSIONALE ELEKTROPHORESE 33
*
9 ZWEIDIMENSIONALE ELEKTROPHORESE 33
9.1 LYSEPUFFER 33
9.2 REHYDRATIONSPUFFER 33
9.3 AEQUILIBRIERUNGSPUFFER (A+B) 34
9.4 AGAROSE-PUFFER 34
9.5 FOKUSSIERUNG (YY ERSTE DIMENSION ") 34
9.6 SDS-PAGE (YY ZWEITE DIMENSION ") 35
10 WESTERN BLOT
^5
10.1 SDS-TRANSFERPUFFER (LOX) PH 8,3 35
10.2 SDS-TRANSFERPUFFER (IX)PH 9,9 35
10.3 PBST0,05%
36
10.4 BLOCKIERLOESUNG 36
10.5 STANDARDPROTOKOL ZUM BLOTTEN 36
2
11
12
13
14
1
2
3
4
5
6
7
37
37
35
38
38
39
39
40
41
41
41
41
43
43
44
46
47
49
51
57
52
53
56
58
58
60
3
INHALTSVERZEICHNIS
UNTERSUCHUNG VON HAEMOLYMPHE
11.1 ENTNAHME VON HAEMOLYMPHE UND GEWINNUNG VON PLASMA
11.2 KONZENTRIERUNG VON HAEMOLYMPHE
UNTERSUCHUNG VON GEWEBE
12.1 PRAEPARATION VON GEWEBE
12.2 EIZELLEN UND SPERMA
12.3 PROTEINEXTRAKTION
GESCHLECHTSBESTIMMUNG
BESTIMMUNG DES ALKALI-LABILEN-PHOSPHATS (ALP)
14.1 ASCORBINSAEURE-LOESUNG
~~
14.2 MOLYBDAT-REAGENZ-LOESUNG
14.3 DURCHFTIHRUNG
ERGEBNISSE
ERMITTLUNG GEEIGNETER EXPOSITIONSBEDINGUNGEN
GESCHLECHTSVERHAELTNIS DER VERSUCHSMUSCHELN
GESAMTPROTEINGEHALT VON MUSCHELPLASMA
PHOSPHATBESTIMMUNG IN LOESUNGEN
BESTIMMUNG DES ALP VON MUSCHELPLASMA
ELEKTROPHORETISCHE UNTERSUCHUNGEN VON HAEMOLYMPHE
6.1 PLASMA VON M. EDULIS NACH EXPOSITION UEBER WASSER
6.2 PLASMA VON A. CYGNEA NACH EXPOSITION UEBER WASSER
6.3 PLASMA VON A. CYGNEA NACH EXPOSITON MIT KLAERWERKSABLAEUFEN
6.4 PLASMA VON A. CYGNEA NACH INJEKTION
ELEKTROPHORETISCHE UNTERSUCHUNG VON GEWEBE
7
.1 GONADENGEWEBE VON M. EDULIS NACH EXPOSITON UEBER WASSER
7.2 GONADENGEWEBE VON A. CYGNEA NACH INJEKTION MIT E
2
INHALTSVERZEICHNIS
8 IMMUNCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN 62
8.1 KREUZREAKTIVITAET EINES PAK GEGEN RF- VTG ZU EIZELLPROTEINEN 62
8.2 HERSTELLUNG EINES POLYKLONALEN ANTIKOERPERS GEGEN EIZELLPROTEINE 64
8.3 NACHWEIS TYPISCH WEIBLICHER PROTEINE IN MANTELGEWEBE 65
VI DISKUSSION 69
1 AUSWAHL VON MUSCHELN FUER LABOREXPERIMENTE 70
2 ARTBESTIMMUNG 70
3 GESCHLECHT UND HERMAPHRODITISMUS 71
4 GESTALTUNG DER VERSUCHSBEDINGUNGEN 73
5 UNTERSUCHUNG VON HAEMOLYMPHE 74
5.1 PROTEINGEHALT 75
5.2 SCHWERMETALL-BINDENDE PLASMAPROTEINE 76
5.3 ALKALI-LABILES PHOSPHAT (ALP) 77
6 UNTERSUCHUNG VON GONADENGEWEBE 79
VII ZUSAMMENFASSUNG 81
VIII LITERATUR 82
IX DANKSAGUNG 102
X LEBENSLAUF 104
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