Der partikel-vermittelte Gentransfer einer Kombination der Gene für Interleukin 12, Interleukin 2 und Interferon g und B7-1 (CD80) zur Therapie solider maligner Tumore am Modell des murinen B16-Melanoms:
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS:
A. ZUSAMMENFASSUNG DER ARBEIT 4
B. EINLEITUNG 6
1. THERAPIE MALIGNER ERKRANKUNGEN 6
2. DIE GENTHERAPIE 6
2.1 ANGRIFFSPUNKTE UND ZIELE DER GENTHERAPIE 6
3. VEKTOREN UND TRANSFEKTIONSMECHANISMEN 8
3.1 VIRALE VEKTOREN 8
3.2 NICHTVIRALE VEKTOREN 8
3.3 TRANSFEKTIONSMECHANISMEN FUER NICHTVIRALE VEKTOREN 9
3.4 IN VITRO
UND IN VIVO VAKZINATIONSVERFAHREN 10
4. AUSSICHTEN FUER DIE GENTHERAPIE 11
5. HINTERGRUENDE UND ANSATZPUNKTE ZUM EIGENEN VORGEHEN 12
5.1 ONKOGENESE UND TUMORIMMUNITAET 12
5.2 VERBESSERUNG DER ANTIGENPRAESENTATION 12
5.3 LOKALE STIMULATION UND MODULATION DER IMMUNABWEHR 13
5.4 ZIELSTELLUNGEN IN DER EIGENEN ARBEIT 14
C. MATERIAL 15
1. BIOLOGISCHES MATERIAL 15
2. OLIGONUKLEOTIDE 15
3. VEKTOREN / PLASMIDE 16
4. ENZYME 16
5. MEDIEN (BAKTERIEN-UND ZELLKULTUR) 17
6. PUFFERLOESUNGEN 17
7. MATERIAL ZUR NUKLEINSAEUREANALYSE 18
8. REAGENZSYSTEME ZUR NUKLEINSAEUREISOLIERUNG / AUFARBEITUNG 18
9. REAGENZIEN 18
10. MATERIAL ZUR HELIOS GENE GUN [BIO RAD] 19
11. MATERIAL ZUM TIERVERSUCH 20
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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D. METHODEN 21
1. ZELLKULTURVERFAHREN 21
1.1 ALLGEMEINES ZUR ZELLKULTUR 21
1.2 TRANSFEKTIONSANSAETZE 21
2. ARBEITEN MIT NUKLEINSAEUREN 22
2.1 ISOLIERUNG UND ANALYSE VON DNA 22
2.2 RESTRIKTIONSANALYSE UND GELELEKTROPHORESE 23
2.3 KLONIERUNGSSTRATEGIEN, AMPLIFIKATIONS-PCR UND LIGATION 24
2.4 REVERSE TRANSKRIPTION VON RNA UND AMPLIFIKATION IN DER RT-PCR 25
2.5 SEQUENZIERUNG 26
3. ARBEITEN MIT DER GENKANONE 27
3.2 DNA-PRAEZIPITATIONSVERFAHREN UND PATRONENHERSTELLUNG 28
3.3 METHODE DER TRANSFEKTION IN DER ZELLKULTUR 31
4. IN VIVO
-TRANSFEKTION AM TIER-MODELL 32
4.1 IMPLANTATION DER TUMORZELLEN 32
4.2 VERSUCHSABLAUF 33
4.3 AUSWERTUNG UND HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNG 35
E. ERGEBNISSE 37
1. KLONIERUNGSPROTOKOLLE 37
1.1 KLONIERUNG VON PRSC-MLL 12P40 37
1.2 KLONIERUNG VON PRSC-MI112P40/35 39
1.3 KLONIERUNG VON PRSC-B7-L 42
1.4 KLONIERUNG VON PRSC-B7-1 / IFNY 43
2. IN VITRO
TRANSFEKTIONSVERSUCHE 46
2.1 ERMITTLUNG DER TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ IN DER ZELLKULTUR 46
2.2 UNTERSUCHUNG DER MONIERTEN PLASMIDE IN DER ZELLKULTUR 50
3. IN VIVO
TRANSFEKTION AM TIER-MODELL 54
3.1 HISTOLOGISCHE UND IMMUNHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN 5 5
3.2 UNTERSUCHUNG DER UEBERLEBENSZEIT 57
3.3 MESSUNG VON GEWICHT UND TUMORGROESSE 59
F. DISKUSSION 61
G. LITERATURVERZEICHNIS 69 |
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