Beiträge zur Kenntnis antioxidativer Mechanismen von Gehirnzellen: Peroxidentgiftung, Glutathiontransport und Multidrug-resistance-Proteine
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2002
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INHALT
3.2.1.1
QUALITATIVER
NACHWEIS
42
1
ABKUERZUNGEN,
STRUKTURFORMELN
UND
NOMENKLATUR
.
9
2
EINLEITUNG
.
13
2.1
DAS
GEHIRN
UND
SEINE
ZELLEN
13
2.2
NEURALE
ZELLKULTUREN
ALS
MODELLSYSTEME
17
2.3
2.3.1
2.3.2
2.3.3
METABOLISCHE
KOOPERATIONEN
IM
GEHIRN
18
DAS
KONZEPT
DER
METABOLISCHEN
KOOPERATION
18
AMINOSAEURE
UND
ENERGIESTOFFWECHSEL
19
METABOLISCHE
KOOPERATION
IM
GLUTATHIONSTOFFWECHSEL
21
2.4
ANTIOXIDATIVE
MECHANISMEN
UND
OXIDATIVER
STRESS
23
2.5
OXIDATIVER
STRESS
UND
NEURODEGENERATIVE
ERKRANKUNGEN
26
2.6
EXPORT
VON
GLUTATHION
UND
GLUTATHIONDISULFID
28
2.7
MU/TIDRUG-RES/STANCE-PROTEINE
29
2.8
AUFGABENSTELLUNG
33
3
ERGEBNISSE
.
34
3.1
3.1.1
3.1.2
3.1.3
3.1.4
PEROXIDENTGIFTUNG
DURCH
NEURALE
ZELLEN
IN
KULTUR
34
CHARAKTERISIERUNG
OLIGODENDROGLIA-REICHER
SEKUNDAERKULTUREN
34
GLUTATHIONGEHALT
UND
SPEZIFISCHE
AKTIVITAETEN
ANTIOXIDATIVER
ENZYME
36
PEROXIDENTGIFTUNG
DURCH
NEURALE
ZELLEN
38
SCHAEDIGUNG
GLIALER
ZELLEN
DURCH
CHRONISCHEN
OXIDATIVEN
STRESS
40
3.2
3.2.1
EXPRESSION
VON
AFU/T/DRUG-RESFSFANCE-PROTEINEN
IN
NEURALEN
ZELLEN
42
NACHWEIS
DES
VORKOMMENS
DER
MRNA
42
3.2.1.2
3.2.1.3
3.2.2
SEMIQUANTITATIVE
ANALYSE
42
EINZELZELLANALYSE
VON
ASTROCYTEN
IM
MAEUSEGEHIRN
44
EXPRESSION
VON
MULTIDRUG-RESISTANCE-PROTE'M
1
IN
ASTROGLIA-REICHEN
PRIMAERKULTUREN
49
3.3
FREISETZUNG
VON
GLUTATHION
UND
GLUTATHIONDISULFID
AUS
NEURALEN
ZELLKULTUREN
50
3.3.1
FREISETZUNG
VON
GLUTATHIONDISULFID
AUS
ASTROGLIAKULTUREN
UNTER
OXIDATIVEM
STRESS
51
3.3.1.1
MODULATION
DES
CHRONISCHEN
H2O2-STRESSES
51
-7
3.3.1.2
EFFEKT
VON
CHRONISCHEM
H
2
O2-STRESS
AUF
DEN
GLUTATHIONGEHALT
53
3.3.1.3
EINFLUSS
VON
CYCLOSPORIN
A
UND
MK571
AUF
DIE
FREISETZUNG
VON
GLUTATHIONDISULFID
55
3.3.2
FREISETZUNG
VON
GLUTATHION
AUS
NEURALEN
ZELLEN
58
3.3.2.1
ASTROGLIAKULTUREN
58
3.3.2.2
KULTUREN
VON
NEURONEN,
OLIGODENDROGLIAZELLEN
UND
MICROGLIAZELLEN
62
3.3.3
EINFLUSS
VON
DOPAMIN
AUF
DIE
FREISETZUNG
VON
GLUTATHION
UND
GLUTATHIONDISULFID
AUS
ASTROGLIAKULTUREN
63
3.3.4
FREISETZUNG
VON
GLUTATHIONDISULFID
ALS
SCHUTZMECHANISMUS
VON
ASTROGLIAZELLEN
GEGEN
OXIDATIVE
SCHAEDIGUNG
71
3.3.4.1
QUANTIFIZIERUNG
VON
SUB-G1-ZELLKERNEN
UND
KONDENSIERTEN
ZELLKERNEN
72
3.3.4.2
VITALITAET
DER
ZELLEN
NACH
AKUTEM
OXIDATIVEM
STRESS
UND
ERHOLUNGSPHASE
75
3.3.4.3
VITALITAET
DER
ZELLEN
WAEHREND
CHRONISCHEM
H
2
O2-STRESS
79
4
DISKUSSION
.
80
4.1
ANTIOXIDATIVE
KAPAZITAETEN
NEURALER
ZELLEN
80
4.2
EXPRESSION
UND
FUNKTION
VON
MULTIDRUG-RESISTANCE-PROTEINEN
IM
GEHIRN
83
4.3
EXPORT
VON
GLUTATHIONDISULFID
UNTER
OXIDATIVEM
STRESS
89
4.4
FREISETZUNG
VON
GLUTATHION
AUS
NEURALEN
ZELLEN
96
4.4.1
ASTROGLIAKULTUREN
96
4.4.2
KULTUREN
VON
NEURONEN,
OLIGODENDROGLIAZELLEN
UND
MICROGLIAZELLEN
100
4.5
EINFLUSS
VON
DOPAMIN
AUF
DEN
GLUTATHIONSTOFFWECHSEL
VON
ASTROGLIAZELLEN
102
4.6
RELEVANZ
DER
ERGEBNISSE
FUER
DIE
PARKINSONSCHE
ERKRANKUNG
106
4.7
AUSBLICK
108
5
EXPERIMENTELLER
TEIL
.
110
5.1
MATERIAL
110
5.2
GERAETE
110
5.3
REAGENZIEN
UND
CHEMIKALIEN
111
5.4
METHODEN
112
5.4.1
ZELLKULTUREN
112
5.4.1.1
ALLGEMEINE
TECHNIKEN
112
5.4.1.2
ASTROGLIA-REICHE
PRIMAERKULTUREN
113
5.4.1.3
OLIGODENDROGLIA-REICHE
SEKUNDAERKULTUREN
113
5.4.1.4
MICROGLIA-REICHE
SEKUNDAERKULTUREN
114
5.4.1.5
NEURONENKULTUREN
114
5.4.2
IMMUNCYTOCHEMISCHE
ANFAERBUNGEN
115
5.4.2.1
STANDARDPROTOKOLL
115
5.4.2.2
ANFAERBUNG
VON
MULTIDRUG-RESISTANCE-PROTE'M
1
116
5.4.2.3
CHROMATINANFAERBUNGEN
116
5.4.3
EXPERIMENTELLE
INKUBATION
VON
ZELLKULTUREN
116
5.4.3.1
PEROXIDENTGIFTUNG
116
5.4.3.2
DAUERSTRESSMODELL
117
5.4.3.3
EXPERIMENTE
ZUR
FREISETZUNG
VON
GLUTATHION
UND
GLUTATHIONDISULFID
119
5.4.4
QUANTIFIZIERUNG
VON
SUB-G1-ZELLKERNEN
120
5.4.5
BESTIMMUNGSMETHODEN
120
5.4.5.1
GLUTATHION
UND
GLUTATHIONDISULFID
120
5.4.5.2
ZELLVITALITAET
121
5.4.5.3
PROTEIN
122
5.4.5.4
WASSERSTOFFPEROXID
122
5.4.5.5
ENZYMAKTIVITAETEN
123
5.4.6
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
124
5.4.6.1
SEQUENZANALYSE
UND
PRIMERDESIGN
124
5.4.6.2
RNA-ISOLIERUNG
125
5.4.6.3
REVERSE
TRANSKRIPTION
125
5.4.6.4
POLYMERASEKETTENREAKTIONEN
126
5.4.6.5
KLONIERUNGEN
UND
SEQUENZIERUNGEN
130
6
LITERATUR
.
.
131
7
ZUSAMMENFASSUNG
.
.
157
-8 |
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