Entwicklung eines molekularbiologischen Verfahrens zur Diagnostik der Porzellankrankheit der Flusskrebse:
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
UND
PROBLEMSTELLUNG
1
II.
LITERATURUEBERSICHT
3
1.
MIKROSPORIDLEN
3
1.1
ALLGEMEINES
ZU
MIKROSPORIDIEN-INFEKTIONEN
3
1.2
SPORENMORPHOLOGIE
UND
ENTWICKLUNGSZYKLUS
6
1.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISTIKA,
PHYLOGENIE
UND
TAXONOMIE
9
1.4
DIAGNOSTIK
VON
MIKRODPORIDIOSEN
12
2.
DIE
PORZELLAMKRANKHELT
DER
FLUSSKREBSE,
VERURSACHT
DURCH
THELOHANIA
CONTEJEANI
15
2.1.
DEFINITION/TAXONOMIE
15
2.2.
EPIDEMIOLOGIE
UND
ENTWICKLUNGSZYKLUS
16
2.3.
UEBERTRAGUNGSMODUS
21
2.4.
PATHOGENESE,
IMMUNREAKTION
UND
KLINISCHE
MANIFESTATION
23
2.5.
DIAGNOSTIK,
PROPHYLAXE
UND
THERAPIE
25
III.
EIGENE
UNTERSUCHUNGEN
27
A.
MATERIAL
27
B.
METHODEN
29
1.
HERKUNFT
DER
PROBEN
29
2.
SPORENGEWINNUNG
30
3.
NATIV-MIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
30
4.
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
(REM)
UNTERSUCHUNG
30
5.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
MIKROSPORIDIEN
31
INHALTSVERZEICHNIS
5.1
DNA-ISOLATION
31
5.2
SEQUENZANALYSE
UND
AUSWAHL
DER
PRIMER
31
5.3
BESTIMMUNG
DER
ANALYTISCHEN
SENSITIVITAET
UND
SPEZIFITAET
DER
PRIMER
32
5.4
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
33
5.5
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
36
5.6
ISOLIERUNG
UND
DNA-SEQUENZANALYSE
DER
PCR-PRODUKTE
36
5.7
RESTRIKTIONSFRAGMENTLAENGEN-POLYMORPHISMUS
(RFLP)
37
5.8
VALIDIERUND
DER
ANGEWENDETEN
METHODEN
38
C.
ERGEBNISSE
40
1.
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
ISOLATE
41
2.
MOLEKULARBIOLOGISCHER
NACHWEIS
UND
GENOTYPISIERUNG
VON
MIKROSPORIDIEN
IN
DECAPODA
(ZEHNFUSSKREBSE)
44
2.1
OPTIMIERUNG
DER
PCR-PARAMETER
DER
VERWENDETEN
PRIMER
45
2.2
SPEZIFITAETS
UND
SENSITIVITAETSBESTIMMUNG
48
2.3
GENOTYPISIERUNG
DER
UNTERSUCHTEN
MIKROSPORIDIENISOLATE
AUS
UNTERSCHIEDLICHEN
GEOGRAPHISCHEN
REGIONEN
56
2.4
DIFFERENZIERUNG
DER
GENOTYPEN
MITTELS
RFLP
58
3.
GEBLINDETE,
INTERNE
VALIDIERUNG
DER
METHODEN
60
4.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
66
D.
DISKUSSION
68
1.
MORPHOLOGISCHE
ASPEKTE
68
2.
ENTWICKLUNG
EINES
MOLEKULARBIOLOGISCHEN
NACHWEISVERFAHRENS
ZUR
DIAGNOSTIK
DER
PORZELLANKRANKHEIT
DER
FLUSSKREBSE
68
2.1
GRUNDSAETZLICHE
ERWAEGUNGEN
ZUR
PRIMERKONSTRUKTION
71
2.2
STRATEGIE
DER
KONSTRUKTION
DER
EINZELNEN
PRIMERPAARE
72
A)
DIE
PRIMER
MSP-10,
MSP-11,
MSP-12,
MSP-13
UND
MSP-15
75
B)
DIE
PRIMER
MSP-16,
MSP-17
UND
MSP-18
84
C)
DIE
PRIMER
MIC
5-1
UND
MIC
3-4
93
INHALTSVERZEICHNIS
2.3
AUSWAHL
DER
PRIMER
ZUM
NACHWEIS
VON
MIKROSPORIDIEN
IN
DECAPODA,
INSBESONDERE
VON
THELOHANIA
CONTEJEANI
AUS
ASTACUS
ASTACUS
96
2.4
BESTAETIGUNG
DER
PCR-PRODUKTE
UND
GENOTYPISIERUNG
DER
ISOLATE
AUS
UNTERSCHIEDLICHEN
GEOGRAPHISCHEN
REGIONEN
101
3.
GEBLINDETE,
INTERN
KONTROLLIERTE
VALIDIERUNG
DES
ENTWICKELTEN
NACHWEISVERFAHRENS
114
IV.
ZUSAMMENFASSUNG
117
V.
SUMMARY
119
VI. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
121
VII.
LITERATURVERZEICHNIS
122 |
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