Stammspezifischer Nachweis und genetische Modifikation von Starterorganismen:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
2002
|
Schlagworte: | |
Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
Beschreibung: | Hohenheim, Univ., Diss., 2002 |
Beschreibung: | VI, 160 S. graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
8
2
MATERIAL UND
METHODEN
12
2.1
MIKROORGANISMEN
UND
PLASMIDE
12
2.2
KULTURMEDIEN
21
2.2.1
GEFRIERSCHUTZ-BOUILLON
FUER
FAECES-PROBEN
21
2.2.2
LAMVAB-MEDIUM
21
2.2.3
LB-MEDIUM
22
2.2.4
MRS-MEDIUM
22
2.2.5
SOC-MEDIUM
22
2.2.6
MODELLBOUILLON
ZUR
ANNAEHERUNG
AN
ROHWURSTFERMENTATIONEN
23
2.3
HAEUFIG
VERWENDETE
LOESUNGEN
UND
ZUSAETZE
23
2.3.1
PUFFER
23
2.3.2
ANTIBIOTIKA
24
2.4
KULTIVIERUNGSMETHODEN
24
2.4.1
STAMMHALTUNG
UND
ZELLZUECHTUNG
24
2.4.2
ZELLZUECHTUNG
UNTER
STRIKT
ANAEROBEN
BEDINGUNGEN
25
2.5
DNA-ISOLIERUNG
AUS
LAKTOBAZILLEN
UND
E.
COLI
25
2.5.1
GESAMT-DNA-ISOLIERUNG
AUS
LAKTOBAZILLEN
25
2.5.2
GESAMT-DNA-ISOLIERUNG
AUS
LAKTOBAZILLEN
MITTELS
SILICALGEL-SAEULCHEN
26
2.5.3
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
AUS
LAKTOBAZILLEN
26
2.5.4
SCHNELLMETHODE
ZUR
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-DNA
AUS
LAKTOBAZILLEN
27
2.5.5
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
LAKTOBAZILLEN
UND
ESCHERICHIA
COLI
MITTELS
QIAPREP-SAEULCHEN
27
2.5.6
SCHNELLMETHODE
ZUR
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
28
2.6
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
DNA
29
2.6.1
PHOTOMETNSCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
29
2.6.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DURCH
MENGENABSCHAETZUNG
IM
AGAROSEGEL
29
2.7
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
DNA-MOLEKUELEN
30
2.8
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
30
2.8.1
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSE-GELEN
30
2.8.2
REINIGUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
31
2.9
ENZYMATISCHE
MODIFIKATIONEN
VON
DNA-MOLEKUELEN
31
INHALTSVERZEICHNIS
2.9.1
HYDROLYTISCHE
SPALTUNG
VON
DNA-MOLEKUELEN
31
2.9.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
LINEAREN
DNA-MOLEKUELEN
MIT
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
31
2.9.3
VERKNUEPFUNG
VON
LINEAREN
DNA-MOLEKUELEN
MIT
T4
DNA-LIGASE
32
2.10
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
UND
LACTOBACILLUS
CURVATUS
MITTELS
ELEKTROPORATION
32
2.10.1
HERSTELLUNG
ELEKTROKOMPETENTER
ZELLEN
VON
E.COLI
33
2.10.2
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPORATION
VON
E.
COLI
33
2.10.3
HERSTELLUNG
ELEKTROKOMPETENTER
ZELLEN
VON
L.
CURVATUS
34
2.10.4
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPORATION
VON
L.
CURVATUS
35
2.11
IMMOBILISIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
AUF
NYLONMEMBRANEN
36
2.11.1
TRANSFER
VON
NUKLEINSAEUREN
AUF
NYLONMEMBRANEN
MITTELS
SOUTHERN
BLOT
36
2.12
HYBRIDISIERUNG
MIT
DIGOXIGENIN-MARKIERTEN
NUKLEINSAEURESONDEN
37
2.12.1
MARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDSONDEN
MIT
DIG-DDUTP
37
2.12.2
HYBRIDISIERUNG
MIT
DIG-MARKIERTEN
OLIGONUKLEOTIDSONDEN
37
2.12.3
CHEMILUMINESZENZNACHWEIS
38
2.12.4
DEHYBRIDISIERUNG
VON
DIG-MARKIERTEN
OLIGONUKLEOTIDSONDEN
38
2.13
IN
VITRO
AMPLIFIKATION
VON
DNA
DURCH
DIE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
38
2.13.1
CHARAKTERISTIKA
DER
FUER
DIE
SPEZIES
L.
PARACASEI,
L.
CURVATUS
UND
L.
SAKEI
SPEZIFISCHEN
PCR-REAKTIONEN
39
2.13.2
CHARAKTERISTIKA
DER
FUER
DEN
STAMM
L.
PARACASEI
LTH
2579
SPEZIFISCHEN
PCR
REAKTION
41
2.13.3
CHARAKTERISTIKA
DER
RANDOM
AMPLIFIED
POLYMORPHIE
DNA
(RAPD)
REAKTIONEN
42
2.13.4
CHARAKERISTIKA
DER
FUER
DIE
AMPLIFIZIERUNG
DES
KAT
A
GENS
UND
DES
PTSHI
PROMOTORS
VERWENDETEN
PCR-REAKTIONEN
43
2.14
VERGLEICH
VON
RAPD-MUSTEM
44
2.15
DENATURING
GRADIENT
GEL
ELECTROPHORESIS
45
2.16
AUSSCHLUSSHYBRIDISIERUNG
47
2.17
SEQUENZANALYSE
VON
DNA-MOLEKUELEN
52
2.17.1
SEQUENZANALYSE
VON
DNA-MOLEKUELEN
MIT
32
S
A
DATP
52
2.17.2
SEQUENZANALYSE
VON
DNA-MOLEKUELEN
MIT
IRD
800
MARKIERTEN
PRIMERN
53
2.18
ERMITTLUNG
DER
KATALASE-AKTIVITAET
54
2.18.1
SCHNELLMETHODE
ZUR
ERMITTLUNG
DER
KATALASE-AKTIVITAET
54
N
INHALTSVERZEICHNIS
2.18.2
MESSUNG
DER
KATALASE-AKTIVITAET
54
2.19
HERSTELLUNG
VON
ROHWUERSTEN
FUER
VERZEHRSSTUDIEN
MIT
LACTOBACILLUS
PARACASEI
LTH
2579
55
2.19.1
HERSTELLUNG
VON
STARTERPRAEPARATEN
ZUR
INOKULATION
VON
ROHWUERSTEN
55
2.19.2
HERSTELLUNG
DER
ROHWUERSTE
55
2.19.3
ZUTATEN
ZUR
HERSTELLUNG
DER
ROHWUERSTE
56
2.19.4
MATERIALVORBEREITUNG,
KUTTEM
UND
ABFUELLEN
57
2.19.5
REIFUNG
57
2.19.6
MIKROBIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
ROHWURST
57
2.20
HERSTELLUNG
VON
ROHWUERSTEN
FUER
KATALASE-EXPERIMENTE
59
2.20.1
HERSTELLUNG
VON
STARTERPRAEPARATEN
ZUR
INOKULATION
VON
ROHWUERSTEN
59
2.20.2
HERSTELLUNG
DER
ROHWUERSTE
59
2.20.3
ZUTATEN
ZUR
HERSTELLUNG
DER
ROHWUERSTE
59
2.20.4
KUTTERSCHEMA
61
2.20.5
MISCHEN
UND
ABFUELLEN
61
2.20.6
ANGLEICHZEIT
UND
REIFUNG
61
2.20.7
REIFUNGSSCHEMA
62
2.20.8
MIKROBIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
ROHWURST
62
2.20.9
BESTIMMUNG
DER
SEGREGATIVEN
PLASMIDSTABILITAET
IN
VITRO
63
2.20.10
BESTIMMUNG
DER
SEGREGATIVEN
PLASMIDSTABILITAET
IN
SITU
63
2.20.11
BESTIMMUNG
DER
FARBWERTE
DER
FERMENTIERTEN
ROHWUERSTE
63
2.21
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
PERSISTENZ
VON
STAMM
LACTOBACILLUS
PARACASEI
LTH
2579
IM
MENSCHLICHEN
DARM
65
2.21.1
VERZEHRSTUDIE
MIT
BETEILIGUNG
VON
3
PROBANDEN
65
2.21.2
VERZEHRSTUDIE
MIT
BETEILIGUNG
VON
19
PROBANDEN
65
2.21.3
FAECES-PROBENNAHME
67
2.21.4
NACHWEIS
VON
STAMM
LACTOBACILLUS
PARACASEI
LTH
2579
IN
FAECES
67
3
ERGEBNISSE
69
TEIL
A
ENTWICKLUNG
UND
VERGLEICH
VON
METHODEN
FUER
DIE
IDENTIFIZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS-STAEMMEN.
69
3.1
STAMMSPEZIFISCHE
NACHWEISMETHODEN
69
3.1.1
ISOLIERUNG
UND
GROESSENANALYSE
VON
EXTRACHROMOSOMALEN
ELEMENTEN
69
3.1.2
RANDOM
AMPLIFIED
POLYMORPHIE
DNA
(RAPD)
73
3.1.2.1
RAPD
MIT
DEN
PRIMERN
OPL01
UND
OPL02
73
IN
INHALTSVERZEICHNIS
IV
3.1.2.2
RANDOM
AMPLIFIED
POLYMORPHIE
DNA
MIT
PRIMER
M13
75
3.1.3
PCR
MIT
STAMMSPEZIFISCHEN
PRIMERN
80
3.1.3.1
AUSSCHLUSSHYBRIDISIERUNG
80
3.1.3.2
IDENTIFIZIERUNG
DES
SPEZIFISCHEN
DNA-FRAGMENTS
IM
GENOM
VON
L.
PARACASEI
LTH
2579
82
3.1.3.3
SPEZIFITAET
DES
ISOLIERTEN
DNA-FRAGMENTS
84
3.1.3.4
IDENTIFIZIERUNG
DES
SPEZIFISCHEN
DNA-FRAGMENTS
85
3.1.3.5
ENTWICKLUNG
EINES
PCR-SYSTEMS
MIT
FUER
L.
PARACASEI
LTH
2579
SPEZIFISCHEN
PRIMERN
87
3.2
SPEZIES-SPEZIFISCHE
NACHWEISMETHODEN
89
3.2.1
SEQUENZIERUNG
DER
16S
RDNA
89
3.2.2
PCR
MIT
SPEZIES-SPEZIFISCHEN
PRIMERN
FUER
L.
PARACASEI
90
3.2.3
PCR
MIT
SPEZIES-SPEZIFISCHEN
PRIMERN
FUER
L.
CURVATUS
UND
L.
SAKEI
94
3.2.4
DENATURING
GRADIENT
GEL
ELEKTROPHORESIS
96
3.2.4.1
ENTWICKLUNG
DER
SPEZIFISCHEN
PRIMER
FUER
DIE
L.
CASEI-GRUPPE
97
3.2.4.2
BERECHNUNG
DES
POTENTIELLEN
SCHMELZVERHALTENS
DER
PCR-PRODUKTE
97
3.2.4.3
DGGE-ANALYSE
DER
PCR-PRODUKTE
101
3.2.4.4
VALIDIERUNG
DES
PRIMERPAARS
LCAS45FGC/LCASL83R
102
TEILB
ANWENDUNG
DER
ENTWICKELTEN
NACHWEISSYSTEME
FUER
DEN
STAMM
SPEZIFISCHEN
NACHWEIS
VON
STARTERORGANISMEN
IN
DER
UMWELT
105
3.3
WACHSTUM
VON
L.
PARACASEI
LTH
2579
UND
L.
SAKEI
LTH
681
IN
ROHWURST
105
3.4
NACHWEIS
DES
STAMMES
L.
PARACASEI
LTH
2579
IN
FAECES
106
3.4.1
VORVERSUCH
ZUR
UEBERLEBENSFAEHIGKEIT
VON
L.
PARACASEI
LTH
2579
IM
MENSCHLICHEN
DARM
106
3.4.2
VERSUCH
ZUR
UEBERLEBENSFAEHIGKEIT
VON
L.
PARACASEI LTH
2579
IM
MENSCHLICHEN
DARM
107
3.4.2.1
NACHWEIS
VON
LAKTOBAZILLEN
WAEHREND
DER
PERIODE
I
107
3.4.2.2
DETEKTION
VON
STAMM
L.
PARACASEI
LTH
2579
IN
FAECES-PROBEN
108
3.4.2.3
PERSISTENZ
VON
STAMM
LTH
2579
IM
MENSCHLICHEN
DARM
108
TEILC
UNTERSUCHUNG
ZUR
KATALASE-ABHAENGIGKEIT
DER
UMROETUNG
VON
FERMENTIERTEN
ROHWUERSTEN
111
3.5
EXPRESSION
DES
GENS
KATA
MIT
DEM
PROMOTOR
DES
HPR-OPERONS
AUS
L.
SAKEI
LTH
677
IN
L.
CURVATUS
LTH
683
111
INHALTSVERZEICHNIS
3.5.1
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
SURE
MIT
VEKTOR
PLPV
11
IC
3.5.2
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
UM
2
MIT
VEKTOR
PLPV
11
1PC
3.5.3
TRANSFORMATION
VON
L.
CURVATUS
LTH
4002
MIT
VEKTOR
PLPV
11
1PC
3.5.4
SEGREGATIVE
PLASMIDSTABILITAET
IN
VITRO
VON
PLPVL
11
IN
L.
CURVATUS
LTH
5292
3.5.5
KATALASE-AKTIVITAET
3.5.6
WACHSTUM
DER
STARTERORGANISMEN
IN
ROHWURST
3.5.7
SEGREGATIVE
PLASMIDSTABILITAET
IN
SITU
VON
PLPV
111
IN
L.
CURVATUS
LTH
5292
UND
VON
PLSC
300
IN
LTH
4002
3.5.8
MESSUNG
DER
FARBE
DER
ROHWUERSTE
4
DISKUSSION
4.1
VERGLEICH
VON
METHODEN
FUER
DIE
IDENTIFIZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS-STAEMMEN
4.2
VERGEICH
VON
METHODEN
FUER
DIE
IDENTIFIZIERUNG
VON
LACTOBACILLUS-SPEZIES
4.3
ANWENDUNG
DER
ENTWICKELTEN
METHODEN
FUER
DEN
NACHWEIS
VON
STAEMMEN
UND
SPEZIES
DER
GATTUNG
LACTOBACILLUS
4.4
KATALASE-ABHAENGIGKEIT
DER
UMFAERBUNG
VON
ROHWUERSTEN
5
ZUSAMMENFASSUNG
6
LITERATUR
112
112
115
115
115
117
119
119
125
125
131
135
140
146
150
V |
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