Charakterisierung der Gensequenzen der Enhancer von T-Zellrezeptor a und T-Zellrezeptor d im Rahmen der B-Vorläufer-Zell-ALL im Kindesalter:
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2002
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Beschreibung: | Berlin, Humboldt-Univ., Diss., 2002 |
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1
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 4
1.1 T-ZELL-REZEPTOREN (TZR) 5
1.1.1 PROTEINSTRUKTUR DER TZR 5
1.1.2 FUNKTION DER T-ZELL-REZEPTOREN 6
1.1.3 GENOMISCHE ORGANISATION DER T-ZELL-REZEPTORKETTEN 8
1.1.3.1 VARIABLE)-, D(IVERSITY)-, J(OINING)- UND C(ONSTANT)-STRUKTURGENE
8
1.1.4 GENREKOMBINATION DER TZR 9
1.1.4.1 PRINZIP DER GENREKOMBINATION ANHAND DES TZR5 9
1.1.4.2 REKOMBINATION DER TZR IM VERLAUF DER LYMPHOZYTENDIFFERENZIERUNG
10
1.1.5 ENHANCER UND PROMOTOREN 11
1.1.5.1 FUNKTION DER TZR-ENHANCER . 13
1.1.5.1.1 FUNKTION DES TZRA-ENHANCERS (EA) 14
1.1.5.1.2 FUNKTION DES TZRG-ENHANCERS (EG) 14
1.2 TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 15
1.2.1 TRANSKRIPTIONSFAKTOREN DES TZRG-ENHANCERS 16
1.2.1.1 CMYB 16
1.2.1.2 CORE BINDING FACTOR (CBF)/PEBP
2
16
1.2.1.3 HGATA-3 17
1.2.1.4 TCF-L/LEF-1 17
1.2.1.5 ETS-1 _ 17
1.2.2 TRANSKRIPTIONSFAKTOREN DES TZRYY -ENHANCERS 18
1.2.2.1 CAMP RESPONSE ELEMENT-BINDENDE PROTEINE (CREB) 18
1.2.2.2 LEF-1 (LYMPHOCYTE ENHANCER-BINDING FACTOR 1) 18
1.2.2.3 ETS-1 19
1.2.2.4 HGATA-3 19
13 E-BOX 19
1.4 AKUTE LEUKAEMIEN 20
1.4.1 AKUTE LYMPHOBLASTISCHE LEUKAEMIE (ALL) 20
1.4.2 KLASSIFIKATION DER ALL 20
1.4.2.1 MORPHOLOGISCHE KLASSIFIKATION 20
1.4.2.2 IMMUNPHAENOTYPISIERUNG 21
1.5 TZR-GENREKOMBINATIONEN BEI ALL IM KINDESALTER 21
1.6 MUTATION UND POLYMORPHISMUS 22
1.6.1 MUTATIONEN 22
1.6.2 POLYMORPHISMEN 23
2 FRAGESTELLUNG 24
3 PATIENTENPROBEN, MATERIAL UND METHOEDEN 25
3.1 UNTERSUCHUNGSKOLLEKTIVE 25
3.1.1 PATIENTENKOLLEKTIV 25
3.1.2 KONTROLLKOLLEKTIV 25
3.2 MATERIALIEN 26
3.2.1 CHEMIKALIEN 26
3.2.2 NUKLEINSAEUREN 26
3.2.3 ENZYME 26
3.2.4 FILME 27
3.2.5 DNA-ISOLIERUNG 27
3.2.6 AUFREINIGUNG DER PCR-PRODUKTE 27
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.7 SEQUENZIERUNGSREAKTION 27
3.2.8 AUFREINIGUNG DER SEQUENZIERUNGSPRODUKTE 27
3.2.9 PUFFER UND LOESUNGEN 27
3.2.9.1 LOESUNGEN ZUR DNA-ISOLIERUNG 27
3.2.9.2 LOESUNGEN FUER DIE ELEKTROPHORESE 28
3.2.9.3 PCR-PUFFER 28
3.2.9.4 LOESUNGEN FUER DIE SILBERFAERBUNG 28
3.2.10 GERAETE 29
3.2.11 SOFTWARE 29
33 MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITSTECHNIKEN 30
3.3.1 DNA-ISOLIERUNG 30
3.3.1.1 DNA-ISOLIERUNG UND DNA-AUFFEINIGUNG 30
3.3.2 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 31
3.3.3 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 32
3.3.4 SSCP (SINGLE-STRAND CONFORMATION POLYMORPHISM) 33
3.3.4.1 DURCHFUEHRUNG 34
3.3.5 KLONIERUNG 35
3.3.5.1 DURCHFUEHRUNG 37
3.3.5.2 KONTROLL-PCR 38
3.3.5.3 AUFREINIGUNG DER PLASMID-DNA 38
3.3.6 SEQUENZIERUNG 38
3.3.6.1 SEQUENZIERUNG: DURCHFUEHRUNG 39
4 ERGEBNISSE 41
4.1 SSCP 41
4.1.1 ALTERATIONEN IM GENSEGMENT DES TZR^-ENHANCERS 42
4.1.1.1 PATIENTENKOLLEKTIV 42
4.1.1.2 KONTROLLKOLLEKTIV 44
4.1.2 ALTERATIONEN IM GENSEGMENT DES TZRE-ENHANCERS 45
4.1.2.1 PATIENTENKOLLEKTIV 45
4.1.2.2 KONTROLLKOLLEKTIV 47
4.2 SEQUENZIERUNG 50
4.2.1 SEQUENZIERUNG DES TZR^-ENHANCER 50
4.2.2 SEQUENZIERUNG DES TZR
A-ENHANCER 51
5 DISKUSSION 54
5.1 POLYMORPHISMUSNACHWEIS IN DEN ENHANCERSTRUKTUREN DER TZRA UND TZR*
54
5.2 MUTATIONSNACHWEIS IN DEN ENHANCERSTRUKTUREN DER TZR* UND TZR* 55
5.2.1 MUTATION UND POLYMORPHISMUS IN BINDUNGSSEQUENZEN VON
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 56
5.3 METHODISCHE ASPEKTE / 58
5.3.1 PCR ' 59
5.3.2 SSCP 60
5.3.3 KLONIERUNG 63
5.4 POLYMORPHISMEN ALS MRD-MARKER 63
5.5 ZUSAMMENFASSUNG 64
6 LITERATUR 66
7
ANHANG
73 |
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