Funktionale Analyse des Biosynthesewegs der Carotinoide in Tabak:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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2001
|
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| Beschreibung: | Hohenheim, Univ., Diss., 2001 |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
_
.
_
.
_
.
_
.
_
.
_
.
_
.
_
.
_
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
_
.
_
.
.
18
2.1
ABKUERZUNGEN
.
18
2.2
PFLANZENMATERIALIEN
.
18
2.3
BAKTERIENSTAEMME
.
19
2.4
NUKLEINSAEUREN
.
19
2.4.1
VEKTOREN
.
19
2.4.2
OLIGONUKLEOTIDE
.
20
2.5
CHEMIKALIEN
.
21
2.6
MEDIEN
.
22
2.7
HERSTELLUNG
TRANSGENER
TABAKPFLANZEN
.
23
2.7.1
COKULTIVIERUNG
VON
TABAKPROTOPLASTEN
MIT
A.
TUMEFACIENS
.
23
2.7.2
TRANSFORMATION
VON
TABAKBLATTSCHEIBEN
MIT
A.
TUMEFACIENS
.
23
2.7.3
REGENERATION
UND
BENENNUNG
TRANSGENER
PFLANZEN
.
24
2.8
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
.
24
2.8.1
TRANSFORMATION
VON
E.
COZI-STAEMMEN
.
24
2.8.2
KONJUGATION
VON
A.
TUMEFACIENS
.
24
2.9
NUKLEINSAEURE-PRAEPARATION
.
25
2.9.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
.
25
2.9.2
ISOLIERUNG
VON
MESSENGER-RNA
.
25
2.9.3
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
.
25
2.9.4
HERSTELLUNG
VON
CDNA
.
26
2.9.5
REINIGUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
26
2.9.6
PRAEPARATION
ZIRKULAERER
NUKLEINSAEUREN
.
27
2.9.7
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
27
2.9.8
ENZYMKATALYSIERTE
REAKTIONEN
.
28
2.9.9
GELELEKTROPHORESE
.
28
2.10
NUKLEINSAEURE-ANALYTIK
.
28
2.10.1
SEQUENZBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
28
2.10.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
29
2.10.3
NORTHEM/SLOT-BLOT
ANALYSE
.
29
2.10.4
RT-PCR
.
30
2.10.5
QUANTITATIVE
RT-PCR
MIT
DEM
"LIGHT
CYCLER
"
.
30
INHALTSVERZEICHNIS
2.11
KLONIERUNGEN
UND
PLASMIDKONSTRUKTIONEN.
32
2.11.1
KLONIERUNG
DER
GENE
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
.
32
2.11.2
HERSTELLUNG
DER
BINAEREN
VEKTOREN
FUER
DIE
TRANSFORMATION
VON
N.
TABACUM
.
34
2.11.3
HERSTELLUNG
DER
KONSTRUKTE
FUER
DIE
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
.
35
2.12
HOCHLEISTUNGS-FLUESSIGPHASENCHROMATOGRAPHIE
(HPLC)
.
36
2.13
PROBENNAHME
BEI
TRANSGENEN
UND
KONTROLLPFLANZEN
.
37
2.14
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
VON
MESSDATEN
.
37
2.14.1
ALLGEMEINE
STATISTISCHE
FUNKTIONEN
.
37
2.14.2
BERECHNUNG
VON
RELATIVEN
TRANSKRIPTMENGEN
UND
DEREN
FEHLERBREITEN
BEI
DER
QUANTITATIVEN
RT-PCR
.
38
3
ERGEBNISSE
.
3.1
SCHWANKUNGSBREITE
DER
KONZENTRATIONEN
VON
METABOLITEN
IN
KONTROLLPFLANZEN
.
40
3.2
SCHWANKUNGSBREITE
DER
TRANSKRIPTMENGEN
DER
GENE
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
IN
KONTROLLPFLANZEN
.
43
3.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
PHYTOENSYNTHASE
AUS
TABAK
.
46
3.3.1
KLONIERUNG
DES
PHYTOENSYNTHASEGENE
AUS
N.
TABACUM
.
46
3.3.2
RELEVANZ
VON
ZWEI
PHYTOENSYNTHASEGENEN
IN
TABAK
.
47
3.3.3
KONSTITUTIVE
UEBEREXPRESSION
DER
PHYTOENSYNTHASEGENE
IN
TRANSGENEM
TABAK
.
49
3.3.4
KONSTITUTIVE
ANTISENSE-EXPRESSION
DER
PHYTOENSYNTHASEGENE
IN
TRANSGENEM
TABAK
.
59
3.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
PHYTOENDESATURASE
AUS
TABAK
.
63
3.4.1
KLONIERUNG
DES
PHYTOENDESATURASEGENS
AUS
N.
TABACUM
.
63
3.4.2
KONSTITUTIVE
UEBEREXPRESSION
DES
PHYTOENDESATURASEGENS
IN
TRANSGENEM
TABAK
.
64
3.4.3
KONSTITUTIVE
ANTISENSE-EXPRESSION
DES
PHYTOENDESATURASEGENS
IN
TRANSGENEM
TABAK
.
65
3.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
^-CAROTINDESATURASE
AUS
TABAK
.
70
3.5.1
KLONIERUNG
DER
^-CAROTINDESATURASE AUS
N.
TABACUM
.
70
3.5.2
KONSTITUTIVE
UEBEREXPRESSION
DER
^-CAROTINDESATURASE
IN
TRANSGENEM
TABAK
.
71
3.5.3
KONSTITUTIVE
ANTISENSE-EXPRESSION
DES
GENS
DER
^-CAROTINDESATURASE
IN
TRANSGENEM
TABAK
.
72
3.6
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
LYCOPIN-SS-ZYKLASE
AUS
TABAK
.
73
3.6.1
KONSTITUTIVE
UEBEREXPRESSION
DER
LYCOPIN-SS-ZYKLASE
IN
TRANSGENEM
TABAK
.
73
INHALTSVERZEICHNIS
3.6.2
KONSTITUTIVE
ANTISENSE-EXPRESSION
DER
LYCOPIN-SS-ZYKLASE
IN
TRANSGENEM
TABAK
.
76
3.7
EINFLUSS
DER
ANTISENSE-EXPRESSION
EINZELNER
GENE
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
AUF
DIE
TRANSKRIPTMENGEN
DER
UEBRIGEN
GENE
.
81
4
DISKUSSION
.
83
4.1
KLONIERUNG
DER
GENE
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
AUS
TABAK
.
83
4.2
AUSWIRKUNGEN
DES
EINGRIFFS
IN
DIE
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
AN
VERSCHIEDENEN
STELLEN
DES
STOFFWECHSELWEGES
.
86
4.3
REGULATION
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
IN
TABAKBLAETTERN
.
99
4.4
VERWENDUNG
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESEGENE
ALS
AUSGANGSPUNKT
FUER
DIE
SUCHE
NACH
NEUEN
HERBIZIDEN
WIRKSTOFFEN
.
101
4.5
GEZIELTE
EINGRIFFE
IN
DIE
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
.
104
5
ZUSAMMENFASSUNG
.106
6
LITERATUR
.109
7
ANHANG
.128
7.1
SEQUENZEN
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESEGENE
.
128
7.1.1
SEQUENZ
DES
GENS
DER
PHYTOENSYNTHASE
1
AUS
N.
TABACUM
.
128
7.1.2
SEQUENZ
DES
GENS
DER
PHYTOENSYNTHASE
2
AUS
N.
TABACUM
.
131
7.1.3
SEQUENZ
DES
GENS
DER
PHYTOENDESATURASE
AUS
N.
TABACUM
.
134
7.1.4
SEQUENZ
DES
GENS
DER
^-CAROTINDESATURASE
AUS
N.
TABACUM.
137
7.2
KALIBRIERUNGEN
DER
QUANTITATIVEN
RT-PCR
.
142
7.2.1
KALIBRIERUNG
DER
TRANSKRIPTMENGE DES GENS
DER
PHYTOENSYNTHASE
1
.
142
7.2.2
KALIBRIERUNG
DER
TRANSKRIPTMENGE DES
GENS
DER
PHYTOENSYNTHASE
2
.
143
7.2.3
KALIBRIERUNG
DER
TRANSKRIPTMENGE
DES
PHYTOENDESATURASEGENS
.
143
7.2.4
KALIBRIERUNG
DER
TRANSKRIPTMENGE DES
^-CAROTINDESATURASEGENS
.
144
7.2.5
KALIBRIERUNG
DER
TRANSKRIPTMENGE
DES
LYCOPIN-SS-ZYKLASEGENS
.
145
7.3
ROHDATEN
DER
BESTIMMUNGEN
DER
PIGMENTKONZENTRATIONEN
UND
DER
RELATIVEN
TRANSKRIPTMENGEN
.
146
III |
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