Die Rolle inhibitorischer Rezeptoren für MHC-Klasse-I-Moleküle bei der Erkennung von Tumorzellen durch humane gd-T-Zellen und natürliche Killerzellen:
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS.1
EINLEITUNG.5
MHC MOLEKUELE DER KLASSE I: REPRAESENTATION VON "SELBST" UND PRAESENTATION
VON "NICHT-
SELBST".6
GENORGANISATION DES MENSCHLICHEN MHC KOMPLEXES.6
DIE STRUKTUR VON MHC I MOLEKUELEN.7
FUNKTION DER MHC I MOLEKUELE.9
LYMPHOZYTEN ALS EFFEKTOREN DER ZELLULAEREN IMMUNITAET.11
NATUERLICHE KILLERZELLEN (NK-ZELLEN).11
DIE "MISSING SEIF' THEORIE. 12
REZEPTOREN FUER MHC I AUF NK-ZELLEN.13
T-LYMPHOZYTEN.17
ASS T-ZELLEN.18
Y8 T-ZELLEN.18
EFFEKTORMECHANISMEN.19
AUFBAU DES Y5 REZEPTORS UND Y5 SUBPOPULATIONEN.20
FUNKTION UND SPEZIFITAET.21
FRAGESTELLUNG UND ZIEL DER ARBEIT.23
MATERIAL UND METHODEN
25
CHEMIKALIEN UND GERAETE.25
GERAETE.25
CHEMIKALIEN, REAGENZIEN UND VERBRAUCHSMATERIAL.25
RADIOAKTIVE CHEMIKALIEN. 26
ENZYME. 26
REAGENZIENSAETZE. 26
MATERIALIEN FUER DIE ZELLKULTUR.27
ZYTOKINE UND WACHSTUMSSTIMULATOREN.27
HAEUFIG VERWENDETE PUFFER, LOESUNGEN UND MEDIEN.27
ANTIKOERPER.29
OLIGONUKLEOTIDE.30
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
WIRTSORGANISMEN, VEKTOREN UND ZELLINIEN.32
BAKTERIENSTAEMME.32
ZELLINIEN.32
VEKTOREN.33
ZELLULAER - IMMUNOLOGISCHE METHODEN.35
ZELLKULTUREN.35
KONZENTRIERUNG UND KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON ANTIKOERPERN AUS
HYBRIDOM-UEBERSTAENDEN
. 37
DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS-ANALYSE) UND ZELLSORTIERUNG
(FACS-SORTIERUNG).38
PROLIFERATIONSTEST MIT DEM
3H-THYMIDIN - ASSAY.39
BESTIMMUNG DER SPEZIFISCHEN PROLIFERATION VON Y5 T-ZELLEN MIT
FACS-ANALYSE.39
ZELLVERMITTELTER ZYTOTOXIZITAETSTEST (
51CHROM-LYSE-TEST).40
TRANSFEKTION VON ZELLEN DURCH ELEKTROPORATION.41
MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN. 42
EXTRAKTION ZYTOPLASMATISCHER RNA.42
GELELEKTROPHORESEN.42
ISOLIERUNG VON DNS-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN.43
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON DNA, RNA UND OLIGONUKLEOTIDEN.43
REVERSE TRANSKRIPTION.44
POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR).44
AUFREINIGUNG VON DNA DURCH SAEULEN-AUSSCHLUSSCHROMATOGRAPHIE MIT SEPHADEX
G-50.45
VERDAU (HYDROLYSE) VON DNA MIT RESTRIKTIONSENZYMEN.46
DEPHOSPHORILIERUNG VON VEKTOR-ENDEN.46
LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN.46
PHENOL/CHLOROFORM - EXTRAKTION VON DNA.47
HERSTELLUNG KOMPETENTER E. COLI FUER DIE ELEKTROPORATION.47
TRANSFORMATION VON E. COLI MIT ELEKTROPORATION.47
TURBOLIFTS. 48
RADIOAKTIVE SONDENMARKIERUNG MIT RANDOM PRIMING.48
HYBRIDISIERUNG.48
ANALYTISCHE PLASMIDPRAEPARATION (MINI-PLASMIDPRAEPARATION).49
PRAEPARATIVE PLASMIDPRAEPARATIONEN (MIDI/MAXI-PLASMIDPRAEPARATIONEN).49
GEWINNUNG EINSTRAENGIGER DNA MIT HILFE VON M13 PHAGEN (SINGLE-STRANDED
RESCUE).50
ZYKLISCHE SEQUENZIERUNG MIT FLUORESZENZMARKIERTEN DIDESOXYNUKLEOTIDEN.50
SEQUENZIERUNG NACH DER DIDESOXYKETTENABBRUCH-METHODE.51
TRANSFER VON RNA AUS AGAROSEGELEN AUF NYLONMEMBRANEN (NORTHERN BLOT).52
2
INHALTSVERZEICHNIS
TRANSFER VON DNA AUS AGAROSEGELEN AUF NYLON-MEMBRANEN (SOUTHEM-BLOT).52
ERGEBNISSE
.53
TEIL I: ENTWICKLUNG UND CHARAKTERISIERUNG HLA I POSITIVER VARIANTEN HLA
I NEGATIVER
ZELLINIEN.53
HERSTELLUNG EINER HLA I
+ DAUDI-ZELLINIE DURCH TRANSFEKTION MIT EINER HUMANEN SS2-
MIKROGLOBULIN CDNA.54
CHARAKTERISIERUNG DER DAUDI-TRANSFEKTANTEN, DAUDI-HYBRIDE UND ANDERER
TUMORLINIEN IN IHRER
EXPRESSION VON HLA 1.55
HERSTELLUNG VON ZELLINIEN, DIE EINZELNE HLA KLASSE I ALLELE
EXPRIMIEREN.61
TEIL II: UNTERSUCHUNGEN ZUR REAKTION VON YOE ZELLEN AUF DIE EXPRESSION
VON HLA I AN DER
OBERFLAECHE VON TARGETZELLEN UND ZUR BETEILIGUNG VON INMRS IN DIESEM
PROZESS.69
PROLIFERATION UND ZYTOLYSE VON Y5 ZELLEN SIND NEGATIV KORRELIERT MIT DER
EXPRESSION VON HLA I
AUF TARGETZELLEN. .69
ANTIKOERPER GEGEN MHC I MOLEKUELE REKONSTITUIEREN DIE LYSIERBARKEIT HLA T
TARGETZELLEN. 71
INHIBITORISCHE REZEPTOREN FUER MHC I (INMRS) WERDEN AUF ZYTOTOXISCHEN YOE
ZELLEN DES
PERIPHEREN BLUTS IN VIVO UND KLONIERTEN ZELLEN IN VITRO EXPRIMIERT.73
INMRS AUF YOE ZELLEN SIND WIE AUF NK-ZELLEN FUNKTIONELL AKTIV.75
INDIVIDUELLE Y5 ZELLKLONE ERKENNEN UNTERSCHIEDLICHE HLA I ALLELE
ABHAENGIG VON DEN INMRS,
DIE SIE EXPRIMIEREN.76
DISKUSSION.78
EXPRESSION UND FUNKTIONSFAEHIGKEIT VON INMRS AUF YOE ZELLEN.78
HYPOTHETISCHES MODELL DER ERKENNUNG VON TUMORZELLEN DURCH INMR
+ UND IN MR
VY9/V82 T-ZELLEN.83
WAS ERKENNEN YOE ZELLEN AUF DAUDI-ZELLEN UND ANDEREN TARGETZELLEN UND WIE
WERDEN SIE
AKTIVIERT?.85
WAS IST DIE ROLLE VON INMRS AUF T-ZELLEN UND NK-ZELLEN?.91
DIE ROLLE VON VY9/VOE2 T-ZELLEN IM IMMUNSYSTEM: RUECKSCHLUESSE AUS DER
SPEZIFITAET,
ERKENNUNGSWEISE UND DER EXPRESSION VON INMRS.
97
ZUSAM MENFASSUNG.101
LITERATURVERZEICHNIS.102
ANHANG.119
DIE HUMANE SS2M SEQUENZ.
119
3
INHALTSVERZEICHNIS
DIE MURINE SS
2
M SEQUENZ.119
VERGLEICH DER SS
2
M PROTEINE VON MENSCH, MAUS UND RIND.120
DIE SEQUENZEN DER HLAI ALLELE VON DAUDI UND RAJI.121
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.127
DANKSAGUNG.129
LEBENSLAUF
.130
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