Molekulare und funktionelle Analyse der Drosophila-Mutante löchrig: Neurodegeneration durch Deregulation des Cholesterinstoffwechsels
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| Format: | Buch |
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| Veröffentlicht: |
2002
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| Beschreibung: | Zsfassung in engl. Sprache. - Würzburg, Univ., Diss., 2002 |
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INHALTSVERZEICHNIS
A. EINLEITUNG_3
B. MATERIAL UND METHODEN_14
I. MATERIAL.14
7. ORGANISMEN.14
2. VEKTOREN.75
3. YEAST TWO HYBRID-SYSTEME.76
4. PHAGENBIBLIOTHEKEN.76
5. OLIGONUKLEOTIDE.76
6. PRIMAERE ANTIKOERPER.77
7.
CDNA KLONE.77
8. CHEMIKALIEN, ENZYME UND VERBRAUCHSMATERIALIEN
.77
9. STANDARDLOESUNGEN UND AUJZUCHTMEDIEN.79
10. STATINPRAEPARAT.79
II. METHODEN.19
7.
KEIMBAHNTRANSFORMATION BEI DROSOPHILA.79
2. HISTOLOGIE.79
3. DNA-PRAEPARATIONEN.20
4. KONZENTRATIONSBESTIMMUNG DER DNA.20
5. RESTRIKTIONSANLYSE DER DNA
.27
6. ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA UND MRNA.27
7. ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON NUKLEINSAEUREN IN AGAROSEGELEN.21
8. REINIGUNG VON DNA AUS AGAROSEGELEN.;.21
9. LIGATION VON DNA
.27
10. REVERSE TRANSKRIPTION.22
11. POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR).22
12. SEQUENZIERUNGEN.22
13. PLASMID-RESCUES.23
14. TRANSFER VON NUKLEINSAEUREN AUF MEMBRANEN.23
15. SCREEN EINER PHAGEN-GENBIBLIOTHEK.25
16. KOMPETENTE ZELLEN UND TRANSFORMATION.25
17. PROTEINEXPRESSION IN E. COLI.25
18. ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON PROTEINEN IN POLYACRYLAMIDGELEN
UND WESTERNBLOT
.26
19. MEDIKAMENTBEHANDLUNGEN AN DROSOPHILA.26
20. BILDVERARBEITUNG.26
27. SEQUENZVERARBEITUNG.26
22. SEQUENZVERGLEICHE ERHALTENER SEQUENZEN MIT GEN-DATENBANKEN.26
C. ERGEBNISSE_ 28
I. ANALYSE DER STRUKTUR DES LOE GENLOCUS UND DER AMPK-UNTEREINHEITEN.28
1. GENOMISCHE KLONIERUNG UND SEQUENZIERUNG DER TRANSKRIBIERTEN BEREICHE
DES LOE GENLOCUS.28
2. NORTHERN BLOT HYBRIDISIERUNG.29
3. KLONIERUNG DER TRANSKRIPTVARIANTEN LOELL, LOELV - LOELX.30
4. KLONIERUNG DER KOMPLETTEN CDNA VON LOEL 'IN SILICO'
.32
5. DIE UNTERSCHIEDLICHEN GENPRODUKTE DER TRANSKRIPTVARIANTEN I - VII.33
6. DIE A- UND SS- UNTEREINHEITEN DES AM PK-KOMPLEXES IN DROSOPHILA.39
II. DIE VARIANTE LOEI IST FUER DIE MUTATION UND DEN PHAENOTYP
VERANTWORTLICH.44
1. NORTHEM-BLOT-EXPERIMENTE
.44
2. RESCUE DER MUTATION UND DES PHAENOTYPES UND UEBEREXPRESSION VON
LOEL.46
III. DIE EXPRESSION VON LOEI AUF PROTEINEBENE IN DROSOPHILA.49
1. GENERIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER POLYKLONALEN ANTIKOERPER.49
2. WESTEMBLOTANALYSE VON GEHIMHOMOGENISATEN.57
3. LOKALISIERUNG DER LOE-1 DISTRIBUTION AN KRYOSTATSCHNITTEN.59
IV. ERZEUGUNG WEITERER LETALER ALLELE VON LOE.61
1. CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN DELETIONS- UND
INVERSIONSREKOMBINANTEN
.61
V. CHARAKTERISIERUNG DER FUNKTION DES LOE I-N-TERMINUS.64
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
I. YEAST-TWO-HYBRID-SCREENS
.64
VI. LOEL UND DER CHOLESTERIN-STOFFWECHSEL.67
1. DIE HMG-COA-REDUKTASE HAT EINFLUSS AUF DIE LOE-MUTATION.67
2. STATINE REDUZIEREN DEN LOE-PHAENOTYP.68
3. DIE LIPIDZUSAMMENSETZUNG IST IN LOE ALTERIERT
.69
VII. DIE MUTANTEN APPL UND LOE INTERAGIEREN MITEINANDER.71
/. PHAENOTYP DER DOPPELMUTANTE.77
2.
APPL-PROZESSIERUNG IST DURCH LOEL BEEINFLUSST.72
D. DISKUSSION_79
I. DAS LOE GEN UND DER AMPK-KOMPLEX.79
II. EXPRESSIONSSTUDIEN IN VIVO.'.89
III. PROTEINLOKALISATION UND -DETEKTION.91
IV. LETALE REKOMBINANTEN.92
V. INTERAKTIONEN DES LOE I-N-TERMINUS.93
VI. LOEL UND DER CHOLESTERINSTOFFWECHSEL.95
VII. APPL - LOE-LNTERAKTION.96
VIII. LOE I, APPL UND SEKRETASEN.97
E. ZUSAMMENFASSUNG_101
F. ANHANG- 105
G. ABBILDUNGSVERZEICHNIS_109
H. VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN_110
I. BIBLIOGRAPHIE_ 112
DANKSAGUNG_119
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