Die TGF-b-Sekretion humaner Megakaryozyten: ein Vergleich auf Einzelzellebene zwischen basaler Sekretion und nach Stimulation mit Interferon a-2a [Alpha-2a], Interleukin-3 und Interleukin-6
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
INTERAKTIONEN
ZWISCHEN
HAEMATOPOESE,
MICROENVIRONMENT
UND
ZYTOKINSEKRETION
1
1.1.1.
ZELLEN
DES
MICROENVIRONMENTS
1
1.1.2.
MATRIXBESTANDTEILE
2
1.1.3.
ADHAESIONSPROZESSE
ZWISCHEN
ZELLEN
UND
MATRIXBESTANDTEILEN
3
1.1.4.
ZYTOKINE
3
1.1.4.1.
ZYTOKIN-NETZWERK-THEORIE
4
1.1.4.2.
KLINISCHER
EINSATZ
DER
ZYTOKINE
6
1.1.4.3.
DAS
MEHR-FAKTOREN-MODELL
DER
ZYTOKIN-INDUZIERTEN
STEUERUNG
DER
MEGAKARYOPOESE
6
1.1.5.
LYSOZYM
8
1.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
EINGESETZTEN
ZYTOKINE
9
1.2.1.
INTERLEUKIN-3
9
1.2.1.1.
IL-3
REZEPTOR
10
1.2.1.2.
BIOLOGISCHES
WIRKUNGSSPEKTRUM
11
1.2.1.3.
SYNERGISTISCHE
EFFEKTE
INNERHALB
DES
ZYTOKINNETZWERKES
12
1.2.2.
INTERLEUKIN-6
12
1.2.2.1.
IL-6
REZEPTOR
14
1.2.2.2.
IL-6
VERMITTELTE
WIRKUNGEN
AUF
DIE
MEGAKARYOPOESE
16
1.2.3.
INTERFERON-A
17
1.2.3.1.
IFN
REZEPTOR
18
1.2.3.2.
PLEIOTROPES
WIRKPROFIL
DES
INTERFERON-A
19
1.2.3.2.1.
EINFLUSS
AUF
STROMAKOMPARTIMENT
UND
ZYTOKINNETZWERK
20
1
.2.3.2.2.
IFN
A-2A
WIRKUNG
AUF
EIN
PATHOLOGISCHES
MIKROMILIEU
21
1.2.3.2.3.
IFN
A-2A
UND
MEGAKARYOPOESE
22
1.2.3.3.
KLINISCHER
EINSATZ
VON
IFN
A-2A
BEI
INFEKTIOESEN
UND
NEOPLASTISCHEN
KRANKHEITEN
23
1.2.4.
TRANSFORMING
GROWTH
FACTOR-SS
24
1.2.4.1.
STRUKTUR
UND
GENETIK
24
1.2.4.2.
SYNTHESE
UND
FREISETZUNG
25
1.2.4.3.
AKTIVIERUNG
26
1.2.4.4.
TGFSS
REZEPTOREN
27
1.2.4.5.
BIOLOGISCHES
WIRKPROFIL
VON
TGFSS
29
1.2.4.5.1.
PROLIFERATIONSFOERDEMDES
WIRKUNGSSPEKTRUM
29
1.2.4.5.2.
INHIBIERENDE
EIGENSCHAFTEN
30
I.2.4.5.3.
TGFSS
WIRKUNG
AUF
DIE
HAEMATO
UND
MEGAKARYOPOESE
31
I.2.4.5.4.
INTERAKTIONEN
DES
TGFSS
MIT
FIBROBLASTEN
UND
EXTRAZELLULAERMATRIX
32
1.3.
CHRONISCHE
MYELOPROLIFERATIVE
ERKRANKUNGEN
34
1.3.1.
DIE
MYELOFIBROSE
ALS
PHAENOMEN
IM
RAHMEN
REAKTIVER
PROZESSE
3
5
1.3.2.
MEGAKARYOZYTEN
36
1.3.2.1.
INTEGRINE
37
1.3.2.2.
DYSPLASTISCHE
MEGAKARYOPOESE
BEI
CMPE
38
1.3.3.
DIE
ROLLE
DER
WACHSTUMSFAKTOREN
BEI
DER
INTERAKTION
ZWISCHEN
MEGAKARYOZYTEN
UND
FIBROBLASTEN
BEI
CMPE
39
1.3.3.1.
PHYSIOLOGISCHE
ZYTOKINFREISETZUNG
39
1.3.3.2.
PATHOLOGISCHE
ZYTOKINSEKRETION
39
1.3.3.3.
DYSFUNKTIONELLE
REAKTIVITAET
DER
KNOCHENMARKZELLEN
41
1.3.4.
KLINISCHER
EINSATZ
DES
IFN
A-2A
BEI
DER
BEHANDLUNG
VON
CMPE
41
1.3.5.
BEEINFLUSSUNG
DER
KNOCHENMARKMORPHOLOGIE
DURCH
INTERFERON
A-2A
42
1.4.
FRAGESTELLUNG
44
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
46
2.1.
HERKUNFT
DER
KNOCHENMARKPROBEN
46
2.2.
AUFARBEITUNG
DER
KNOCHENMARKPROBEN
46
2.2.1.
ARBEITSBEDINGUNGEN
46
2.2.2.
PRAEPARATION
DER
MEGAKARYOZYTEN
AUS
DEM
KNOCHENMARK
47
2.2.3.
ANREICHERUNG
DER
MEGAKARYOZYTENFRAKTION
47
2.2.3.1.
PERCOLLDICHTEZENTRIFUGATION
47
2.3.
STIMULATION
DER
MEGAKARYOZYTEN
48
2.4.
DER
REVERSE
HAEMOLYTISCHE
PLAQUE
ASSAY
(RHPA)
49
2.4.1.
VORBEREITENDE
SCHRITTE
FTLR
DEN
RHPA
50
2.4.1.1.
PRAEPARATION
DER
CUNNINGHAM-KAMMERN
50
2.4.1.2.
BESCHICHTUNG
DER
CUNNINGHAM-KAMMERN
MIT
POLY-L-LYSIN
51
2.4.1.3.
KOPPLUNG
DER
SCHAFERYTHROZYTEN
MIT
STAPHYLOKOKKEN
PROTEIN A
52
2.4.1.3.1.
PRINZIP
52
2.4.1.3.2.
DURCHFUEHRUNG
52
2.4.2.
THEORETISCHE
ANORDNUNG
DES
RHPA
53
2.4.2.1.
DURCHFUEHRUNG
56
2.4.2.2.
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
56
2.4.2.3.
ZUGABE
VON
KOMPLEMENTFAKTOREN
57
2.5.
IMMUNFAERBUNG
NACH
DER
STREPTAVIDIN-BIOTIN-METHODE
58
2.5.1.
VERFAHREN
58
2.5.2.
DURCHFUEHRUNG
DER
IMMUNMARKIERUNG
59
2.5.3.
ANSETZEN
DER
ENTWICKLERLOESUNG
60
2.6.
KONTROLLEN
60
2.6.1.
ZYTOZENTRIFUGENPRAEPARATE
60
2.6.2.
VITALITAETSTESTS
61
2.6.2.1.
FLUORESCEIN-DIACETATTEST
61
2.6.2.1.1.
PRINZIP
61
2.6.2.1.2.
VERFAHREN
61
2.6.2.2.
FACSCAN-ANALYSE
62
2.6.2.3.
PROTEIN
A
DOT-BLOT
62
2.6.3.
AUSSCHLUSS
UNSPEZIFISCHER
HAEMOLYSEHOEFE
62
2.6.4.
POSITIVKONTROLLEN
63
2.6.5.
NEGATIVKONTROLLEN
63
2.7.
AUSWERTUNG
63
2.8.
STATISTISCHE
BEARBEITUNG
DER
ERMITTELTEN
DATEN
64
2.9.
MATERIALLISTE
65
3.
ERGEBNISSE
71
3.1.
MEGAKARYOZYTENANREICHERUNG
AUS
DEM
KNOCHENMARK
71
3.2.
PHAENOTYPISIERUNG
DER
MEGAKARYOZYTAEREN
ZELLEN
72
3.2.1.
ZYTOZENTRIFUGENPRAEPARATE
72
3.2.2.
FACSCANANALYSE
72
3.3.
KONTROLLEN
73
3.3.1.
VITALITAETSTESTS
73
3.3.2.
AUSSCHLUSS
EINER
UNSPEZIFISCHEN
LYSE
DER
SCHAFERYTHROZYTEN
73
3.3.3.
POSITIVKONTROLLEN
73
3.3.4.
NEGATIVKONTROLLEN
74
3.3.5.
PROTEIN
A
DOT-BLOT
74
3.4.
ZYTOKINSEKRETION
74
3.4.1.
SEKRETION
VON
TRANSFORMING
GROWTH
FACTOR-SS
74
3.4.2.
SEKRETION
VON
INTERLEUKIN-6
76
3.4.3.
SEKRETION
VON
LYSOZYM
77
3.4.4.
ZYTOKINFREISETZUNG
DURCH
CD61-NEGATIVE
ZELLEN
78
3.4.4.1.
SEKRETION
VON
TGFSS
DURCH
CD61-NEGATIVE
ZELLEN
78
3.4.4.2.
SEKRETION
VON
LYSOZYM
DURCH
CD61-NEGATIVE
ZELLEN
80
4.
DISKUSSION
82
4.1.
FRAGESTELLUNG
DER
UNTERSUCHUNG
82
4.2.
DIE
STIMULATION
DER
MEGAKARYOZYTEN
DURCH
INTERFERON
A-2A
82
4.2.1.
DER
EINFLUSS
VON
IFN
A-2A
AUF
DIE
SEKRETION
VON
TGFSS
84
4.2.2.
DIE
BEEINFLUSSUNG
DER
IL-6
SEKRETION
DURCH
INTERFERON
A-2A
86
4.3.
DIE
STIMULATION
DER
TGFSS
SEKRETION
DURCH
INTERLEUKIN-3
UND
INTERLEUKIN-6
EINZELN
UND
IN
KOMBINATION
87
4.3.1.
SYNERGISTISCHE
WECHSELWIRKUNG
VON
IL-3
UND
IL-6
87
4.4.
ZYTOKINFREISETZUNG
DURCH
CD61-NEGATIVE
ZELLEN
89
4.4.1.
TGFSS
SEKRETION
89
4.4.2.
LYSOZYM
SEKRETION
90
4.5.
ANMERKUNGEN
ZUR
METHODIK
90
4.5.1.
AUFARBEITUNG
DER
KNOCHENMARKPROBEN
UND
MEGAKARYOZYTENANREICHERUNG
90
4.5.2.
STIMULATION
DER
CD61-POSITIVEN
ZELLEN
92
4.5.3.
EINSATZ
POLYKLONALER
ANTIKOERPER
93
4.5.4.
VALIDIERUNG
DES
TESTVERFAHRENS
DURCH
KONTROLLEN
93
4.6.
SCHLUSSWORT
95
5.
ZUSAMMENFASSUNG
96
6.
LITERATURVERZEICHNIS
98
7.
ANHANG
188
7.1.
VORABVEROEFFENTLICHUNGEN
188
7.2.
TABELLARISCHER
ANHANG
189
7.2.1.
SEKRETIONCDOEL-POSITIVER
ZELLEN
189
7.2.2.
SEKRETION
CDOEL-NEGATIVER
ZELLEN
189
7.3.
LEBENSLAUF
195 |
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