Strahleninduzierte Genexpression bei MCF-7-Zellen:
Gespeichert in:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
IV
VERZEICHNIS
DER
GENE
VI
1.
EINLEITUNG
1
2.
STAND
DES
WISSENS
4
2.1
ZELLTODESFORMEN
4
2.1.1
APOPTOSE
UND
NEKROSE
4
2.1.1.1
DEFINITION
UND
MORPHOLOGIE
4
2.1.1.2
URSACHEN
5
2.1.1.3
TELEOLOGIE
5
2.1.1.4 SIGNALTRANSDUKTION
6
2.1.1.5
APOPTOSE
VERSUS
NEKROSE
?
7
2.1.2
MIKROKEM-BILDUNG
7
2.1.2.1
DEFINITION
UND
MORPHOLOGIE
7
2.1.2.2 ENTSTEHUNG
8
2.1.2.3
SIGNALTRANSDUKTION
9
2.1.2.4 NACHWEISVERFAHREN
9
2.1.3
ABNORMALE
ZELLEN
10
2.2
UNTERSUCHUNGSMETHODEN
10
2.2.1
KLONOGENITAETS-ASSAY
10
2.2.2
MAA-ASSAY
11
2.2.3
GENEXPRESSIONSARRAY
12
2.2.3.1
HINTERGRUND
12
2.2.3.2
DAS
PRINZIP
DES
ATLASYY
HUMAN
1.2
ARRAY
(CLONTECH)
13
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
16
3.1
REAGENZIEN
UND
IHRE
BEZUGSQUELLEN
16
3.2
GERAETE
UND
LABORMATERIAL
17
3.3
VERWENDETE
LOESUNGEN
18
INHALTSVERZEICHNIS
_
_
N
3.4
ZELLEN
UND
ZELLKULTURBEDINGUNGEN
20
3.5
ROENTGENBESTRAHLUNG
20
3.6
WACHSTUMSKURVE
21
3.7
KLONOGENITAETS-ASSAY
23
3.8
MAA-ASSAY
25
3.9 GENEXPRESSIONSARRAY
28
3.9.1
VERSUCHSPLANUNG
28
3.9.2
ZELLANSATZ
30
3.9.3
RNA-ISOLATION
30
3.9.3.1
ISOLATION
DER
GESAMT-RNA
31
3.9.3.2
DNASE-VERDAU
UND
ANSCHLIESSENDE
PROBENAUFREINIGUNG
32
3.9.4
QUANTIFIZIERUNG
DER
RNA
UND
UEBERPRUEFUNG
IHRER
REINHEIT
33
3.9.4.1
MITTELS
SPEKTRALPHOTOMETRIE
33
3.9.4.2
MITTELS
NEUTRALER
GELELEKTROPHORESE
34
3.9.5
UEBERPRUEFUNG
DER
DNA-FREIHEIT
MITTELS
PCR
34
3.9.6
KONVERTIERUNG
DER
MRNA
IN
RADIOAKTIV
MARKIERTE
CDNA
36
3.9.7
HYBRIDISIERUNG
UND
AUTORADIOGRAPHIE
39
3.9.8
AUSWERTUNG
41
4
ERGEBNISSE
42
4.1
MAA-ASSAY
42
4.1.1
MN-FREQUENZ
42
4.1.2
APOPTOSE-FREQUENZ
43
4.1.3
FREQUENZ
ABNORMALER
ZELLEN
44
4.2
GENEXPRESSIONSARRAY
44
4.2.1
ISOLATION
DER
GESAMT-RNA
44
4.2.2
KONVERTIERUNG
DER
MRNA
IN
RADIOAKTIV
MARKIERTE
CDNA
46
4.2.3
HYBRIDISIERUNG
UND
AUTORADIOGRAPHIE
47
4.2.4
AUSWERTUNG
48
4.2.4.1
EINSTELLUNG
DER
SENSITIVITAET
UND
REPRODUZIERBARKEIT
DER
METHODE
48
4.2.4.2 NORMALISIERUNG
UND
QUOTIENTENBILDUNG
50
4.2.4.3
ERMITTLUNG
DER
REPRODUZIERBARKEIT
DER
DURCHGEFUEHRTEN
EXPERIMENTE
51
4.2.5
ERMITTLUNG
VON
YYGENE
TARGETS
"
ALS
POTENZIELLE
BIOLOGISCHE
PARAMETER
55
INHALTSVERZEICHNIS
HI
5
DISKUSSION
61
5.1
GENEXPRESSIONSARRAY
61
5.1.1
GENEXPRESSION
-
METHODIK
61
5.1.1.1
KONVERTIERUNG
DER
MRNA
IN
RADIOAKTIV
MARKIERTE
CDNA
61
5.1.1.2
HYBRIDISIERUNG
UND
AUTORADIOGRAPHIE
62
5.1.1.3
ATLAS
IMAGE
1.5
SOFTWARE
63
5.1.1.4
EINSTELLUNG
DER
SENSITIVITAET
UND
REPRODUZIERBARKEIT
DER
METHODE
64
5.1.1.5
NORMALISIERUNG
64
5.1.1.6
REPRODUZIERBARKEIT
DER
DURCHGEFUEHRTEN
EXPERIMENTE
65
5.1.2
GENEXPRESSION
-
ERMITTLUNG
VON
YYGENE
TARGETS
"
66
5.1.3
BESTEHT
EIN
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
DEN
FESTGELEGTEN
"
GENE
TARGETS
"
UND
DER
MN-BILDUNG
?
73
5.2 AUSBLICK
73
6.
ZUSAMMENFASSUNG
75
7.
SUMMARY
77
8.
LITERATURVERZEICHNIS
79
9.
ANHANG
90
DANKSAGUNG
111
LEBENSLAUF
112 |
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