Differenzierung und Charakterisierung von Betriebshefekulturen mit genetischen und physiologischen Methoden:
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2001
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I. INHALTSVERZEICHNIS
I
I. INHALTSVERZEICHNIS
I. INHALTSVERZEICHNIS.I
II. ABBILDUNGSVERZEICHNIS.V
III. TABELLENVERZEICHNIS .IX
IV. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.XI
1. EINLEITUNG. 1
1.1. HEFE - EINE UEBERSICHT.1
1.2. DIE SYSTEMATIK DER HEFEN.2
1.3.
SACCHAROMYCES CEREVISIAE: DIE BIERHEFE.3
1.4. DIE PHYSIOLOGIE VON
SACCHAROMYCES CEREVISIAE.5
1.5. DIE GENETIK VON
SACCHAROMYCES CEREVISIAE.7
1.6. HEFE IN DER BRAUEREI. 8
1.7. MOEGLICHKEITEN DER STAMMDIFFERENZIERUNG.9
1.8. GENETISCHE TYPISIERUNGSMETHODEN.11
1.9. IMMUNOLOGISCHE DIFFERENZIERUNG.13
2. ZIELSETZUNG.14
3. MATERIAL UND METHODEN.15
3.1. GERAETE.15
3.1.1. WACHSTUMSVERSUCHE.15
3.1.2. HSGC-ANALYTIK.15
3.1.3. PCR .15
3.1.4. ELEKTROPHORESEN.15
3.1.5. SOUTHERN BLOTTING.16
3.1.6. IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS VON DNA.16
3.1.7. SONSTIGES.16
3.2. REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN.16
3.3. HEFESTAEMME .19
3.4. KULTURMEDIEN.22
3.4.1. WUERZEMEDIUM.22
3.4.2. YPG-MEDIUM.22
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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I. INHALTSVERZEICHNIS
II
3.4.3. STERILISATIONSMETHODEN. 22
3.5. STAMMHALTUNG.22
3.6. PHYSIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON HEFE.22
3.6.1. HELMTEST.22
3.6.2. ANALYSE DER ZUCKERVERWERTUNG.23
3.6.3. WACHSTUMSVERSUCHE.23
3.6.4. HEADSPACE-GASCHROMATOGRAPHIE.23
3.7. MOLEKULARBIOLOGISCHE UND GENETISCHE METHODEN.26
3.7.1. PRAEPARATION VON GESAMTZELL-DNA.26
3.7.1.1. DNA-EXTRAKTION.26
3.7.1.2. CHROMOSOMENPRAEPARATION FUER DIE PFGE.26
3.7.2. ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON DNA.26
3.7.2.1. AGAROSE-GELELEKTROPHORESEN.26
3.7.22.
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESEN.27
3.72.3.
PULSFELD-GELELEKTROPHORESEN.27
3.7.3. RESTRIKTIONSANALYSEN.28
3.7.4. PCR.28
3.7.4.1. ALLGEMEINES.28
3.7.4.2. OLIGONUKLEOTID-PRIMER FUER DIE PCR.30
3.7.4.3. PRIMER FUER DIE SEQUENZIERUNG.30
3.7.4.4. PRIMER FUER DIE MIKROSATELLITEN-TYPISIERUNG.30
3.7.5. SEQUENZIERUNG.31
3.7.6. MIKROSATQLLITEN-TYPISIERUNG.32
3.7.7. AFLP-ANALYTIK.32
3.8. BIOCHEMISCHE UND SONSTIGE METHODEN.33
3.8.1. SOUTHEM-BLOTTING.
/.33
3.8.2. HYBRIDISIERUNG VON MEMBRANFIXIERTER DNA MIT DNA-SONDEN.33
3.8.3. IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS VON DNA.34
4. ERGEBNISSE.35
4.1. PHYSIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON BETRIEBSHEFE-ISOLATEN UND
REFERENZSTAEMMEN.35
4.1.1. WACHSTUMSEIGENSCHAFTEN DER ISOLATE VBH9810 UND VBH9812
IN WUERZEMEDIUM.35
I. INHALTSVERZEICHNIS
III
4.1.1.1. LEBENDZELLZAHL.35
4.1.1.2. LEBENDZELLANTEIL.36
4.1.1.3. MITTLERES ZELLVOLUMEN.37
4.1.1.4. GROESSENVERTEILUNG DER HEFEZELLEN.37
4.1.2. BILDUNG VON GAERUNGSNEBENPRODUKTEN BEI VBH9810 UND VBH9812
SOWIE DEN REFERENZSTAEMMEN W34/70 UND W66.40
4.1.2.1. 1-PROPANOL.42
4.1.2.2. 2-METHYL-L-PROPANOL.42
4.1.2.3. 2-METHYL-L-BUTANOL.43
4.1.2.4. 3-METHYL-L-BUTANOL.43
4.1.2.5. ETHYLACETAT.44
4.1.2.6. ETHYLPROPIONAT.45
4.1.2.7. ETHYLBUTYRAT. 46
4.1.2.8. ETHYLHEXANOAT.47
4.1.2.9. ISOAMYLACETAT.48
4.1.2.10. ISOBUTYLACETAT.49
4.1.2.11. 2,3-BUTANDION.;.49
4.1.2.12. 2,3-PENTANDION.50
4.1.2.13. ACETALDEHYD.51
4.1.3. ENTWICKLUNG DES PH-WERTES.52
4.1.4. BRUCHBILDUNGSVERMOEGEN.53
4.1.5. ZUCKERVERWERTUNG.55
4.2. GENETISCHE TYPISIERUNG DER HEFESTAEMME.58
4.2.1. PULSFELD-GELELEKTROPHORESE (PFGE).59
4.2.2. RESTRIKTIONSFRAGMENT-LAENGENPOLYMORPHISMEN.60
4.2.2.1. AUSWAHL DER GEEIGNETEN RESTRIKTIONSENZYME.61
4.2.2.2. RESTRIKTIONSPOLYMORPHISMEN MIT
SMAL UND SFLDL.65
4.2.2.3. DOPPELVERDAUE MIT ZWEI RESTRIKTIONSENZYMEN.68
4.2.3. HYBRIDISIERUNG VON RESTRIKTIONSFRAGMENTEN MIT DIG- MARKIERTEN
DNA-SONDEN.69
4.2.4. MIKROSATELLITENTYPISIERUNG.72
4.2.4.I. MIKROSATELLITEN-MUSTER BEI AUSGEWAEHLTEN BETRIEBSHEFE-
I. INHALTSVERZEICHNIS
IV
ISOLATEN UND REFERENZSTAEMMEN.76
4.2.4.2. ANALYSE VON STAEMMEN DER HEFEBANK WEIHENSTEPHAN.82
4.2.4.3. ANALYSE VON WEITEREN BETRIEBSHEFE-ISOLATEN.84
4.2.5. SEQUENZANALYSEN.85
4.2.6. HEFEDIFFERENZIERUNG MIT DER AFLP.90
4.2.6.1. ANALYSE AUSGEWAEHLTER BETRIEBSHEFEISOLATE.90
4.2.6.2. KONTROLLE DER AFLP DURCH ANALYSE VON HEFEBANK-
STAEMMEN.91
4.2.6.3. ANALYSE VON WEITEREN BETRIEBSHEFE-ISOLATEN.93
5. DISKUSSION.97
5.1. PHYSIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG. 97
5.2. GENETISCHE DIFFERENZIERUNG VON BETRIEBSHEFE-ISOLATEN UND
REFERENZSTAEMMEN.101
5.3. EXTERNE ANALYSEN DER BETRIEBSHEFE.104
5.4. GENETISCHE ANALYSE DER HEFE MIT HOCHAUFLOESENDEN METHODEN.106
5.5. METHODEN VERGLEICH.;.110
5.6. ALLGEMEINE BETRACHTUNGEN ZUR KLASSIFIZIERUNG UND ARTDEFINITION
VON HEFEN.114
5.7. MOEGLICHKEITEN FUER WEITERFUEHRENDE ANALYSEN.116
5.8. ALTERNATIVE ANSAETZE FUER DIE HEFEDIFFERENZIERUNG.117
5.9. FOLGERUNGEN AUS DEN PHYSIOLOGISCHEN UND GENETISCHEN ANALYSEN.118
5.10. FOLGERUNGEN FUER DIE BRAUEREI.120
6. ZUSAMMENFASSUNG.122
7. LITERATURVERZEICHNIS.
:.123
8. ANHANG. 138
8.1. SEQUENZDATEN.138
8.1.1. UEBERISCHT UEBER DIE MIKROSATELLITEN.138
8.1.2. SEQUENZDATEN DER MIKROSATELLITEN.138
8.2. AFLP-BANDENMUSTER. 141 |
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