Ein Ionenkanal-bildendes Protein aus Herpetosiphon aurantiacus HP A2:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2001
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INHALTSVERZEICHNIS
IV
1 ZUSAMMENFASSUNG.1
2 ABKUERZUNGEN UND EINHEITEN.3
3 EINLEITUNG.5
3.1
HERPETOSIPHON AURANTIACUS.5
3.1.1 CHARAKTERISIERUNG.5
3.1.2 ZELLHULLE VON
HERPETOSIPHON AURANTIACUS.8
3.2 PORINE: STRUKTUR UND FUNKTION.11
3.2.1 PORINE BEI GRAM-NEGATIVEN BAKTERIEN.12
3.2.2 PORINE BEI GRAM-POSITIVEN BAKTERIEN.15
3.3 ZIELSETZUNG.17
4 MATERIAL UND METHODEN.-.18
4.1 HERKUNFT VON
HERPETOSIPHON AURANTIACUS.18
4.1.1 ANZUCHT VON
HERPETOSIPHON AURANTIACUS HP A2.18
4.2 ISOLIERUNG UND REINIGUNG VON PORIN.18
4.2.1 REINIGUNG NACH RAU (1989).18
4.2.2 REINIGUNG NACH KREUSCH (1990).19
4.2.3 MODIFIZIERTE METHODE(N) NACH KREUSCH (1990).24
4.2.4 ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE MITTELS HITRAP Q.25
4.3 PROTEINBESTIMMUNG.26
4.4 PROTEINVERDAU.27
4.5 ELEKTORPHORETISCHE METHODEN.27
4.5.1 SDS-PAGE.27
4.5.2 PRAEPARATIVE SDS PAGE.29
4.5.3 NATIVE GELELEKTROPHORESE.30
4.5.4 BLUE NATIVE ELEKTROPHORESE.31
4.5.5 FAELLUNG VON PROTEIN.31
4.5.6 FAERBUNGEN VON SDS-PAGES UND CN-PAGES.32
4.5.7 ELUTION VON PROTEIN AUS POLYACRYLAMIDGELEN.34
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/963565443
INHALTSVERZEICHNIS
V
4.5.8 ELEKTROELUTION VON PROTEINBANDEN.34
4.6 BIOPHYSIKALISCHE METHODEN.35
4.6.1 PRINZIP DER PORINAKTIVITAETSMESSUNG.35
4.6.2 ABLAUF DER PORINAKTIVITAETSMESSUNG.35
4.6.3 EINZELKANALMESSUNGEN.37
4.6.4 ABSCHAETZEN DES KANALDURCHMESSERS UNTER 'VERWENDUNG DES RENKIN-
KORREKTUR-FAKTORS.41
4.6.5 VEREINFACHTE BESTIMMUNG DES KANALDURCHMESSERS.42
4.6.6 SELEKTIVITAETSMESSUNGEN.43
4.6.7 SPANNUNGSABHAENGIGKEIT.44
5 ERGEBNISSE.1.46
5.1 ANPASSEN DER METHODIK.46
5.2 EXTRAKTION.51
5.3 REINIGUNG.54
5.4 PROBLEMATIK DER PROTEINMENGE.58
5.5 TRYPTISCHER VERDAU.60
5.6 PRAEPARATIVE GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE.61
5.7 REINIGUNG MITTELS ANIQNENAUSTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE.62
5.8 ELUTIONSVERSUCHE ZUM 45 KDA-PROTEIN.65
5.9 LOKALISATION DES PROTEINS MIT PORINAKTIVITAET.67
5.9.1 ZELLAUFSCHLUSS UND GRADIENTENREINIGUNG.67
5.9.2 EXTRAKTION UND ISOLIERUNG DER PORINAKTIVITAET AUS DER GRADIENTEN
GEREINIGTEN ZELLWANDFRAKTION.69
5.9.3 MESSUNGEN ZUR PORINAKTIVITAET IN DER GRADIENTENGEREINIGTEN
ZELLWAND
FRAKTION.72
5.10 BIOPHYSIKALISCHE CHARAKTERISIERUNG DER PORINAKTIVITAET.73
5.10.1 EINZELKANALMESSUNGEN.73
5.10.2 SELEKTIVITAET
75
INHALTSVERZEICHNIS
VI
5.10.3 UNTERSUCHUNG ZUR WECHSELWIRKUNG VON IONEN MIT DEM IONENKANAL.75
5.10.4 ERMITTLUNG DES THEORETISCHEN PORENDURCHMESSERS.77
5.10.5 SPANNUNGSABHAENGIGKEIT DES IONENKANALS AUS
HERPETOSIPHON AURANTIACUS
HP A2 UND ASYMMETRIE DER LEITFAEHIGKEIT BEI WECHSELNDER POLARITAET DER
ANGELEGTEN SPANNUNG.77
6 DISKUSSION.80
6.1 ZUR METHODIK DER ISOLIERUNG UND REINIGUNG.80
6.2 ZUORDNUNG DES 45 KDA-PROTEINS ZUR PORIN-FUNKTION.83
6.3 BIOCHEMISCHE EIGENSCHAFTEN.84
6.4 MONOMER.84
6.5 ZUR LOKALISATION DES IONENKANALS AUS
HERPETOSIPHON AURMTTIACUS HP A2.86
6.6 WECHSELWIRKUNGEN MIT DEM IONENKANAL UND LEITFAEHIGKEIT.88
6.7 GROESSE DER PORE.90
6.8 IONENSELEKTIVITAET.90
6.9 YYVOLTAGE GATING".91
6.10 AUSBLICK.93
94
7 LITERATUR. |
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