CD4-T-Zell-vermittelte Immunpathogenese einer murinen IBD:
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1998
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| Beschreibung: | Berlin, Freie Univ., Diss., 2000 |
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| adam_text | Titel: CD4-T-Zell-vermittelte Immunpathogenese einer murinen IBD
Autor: Bonhagen, Kerstin
Jahr: 1998
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG ............................................................................... 1
1.1 Zellen des Immunsystems ............................................................. 1
1.2 Die T-Helfer Zelle .......................................................................... 3
1.3 Lymphatische Gewebe .................................................................. 6
1.3.1 GALT (Darm- assoziiertes lymphatisches Gewebe....................... 6
1.4 IBD - chronisch progrediente Darmentzündung............................ 8
1.4.1 Humane IBD .................................................................................. 8
1.4.2 IBD bei Tieren ............................................................................... 9
1.4.3 Murine IBD Modelle ..................................................................... 10
1.4.4 Das SCID-IBD Modell ................................................................. 11
1.5 Fragestellung .............................................................................. 12
Z MATERIAL UND METHODEN .................................................. 13
2.1 MATERIAL .................................................................... 13
2.1.1 Antikörper .................................................................................. 13
2.1.2 Interleukine ................................................................................ 14
2.1.3 Material für zellbiologische Arbeiten ........................................... 14
2.1.3.1 Medien und Puffer....................................................................... 15
2.1.4 Radiochemikalien ........................................................................ 15
2.1.5 Material für molekularbiotogische Arbeiten ................................. 16
2.1.5.1 Puffer, Lösungen etc. .................................................................. 16
2.2 Mause ......................................................................................... 17
2.2.1 Rekonstituöon der SCID Mause.................................................. 17
2.3 ZeMlsoSerung ............................................................................... 17
2.3.1 Isolierung von PBMNC aus Schwanzttut.................................... 18
INHALTSVERZEICHNIS_______________________________________________________________
2.4 Immunfluoreszensfärbung und Durchflußzytometrie ................... 18
2.4.1 Färbung membranständiger Proteine ......................................... 18
2.4.1.1 Markierung mit Selektin-Konstrukten .......................................... 19
2.4.2 Intrazelluläre Zytokinfärbung ...................................................... 19
2.4.3 FAC Analyse ............................................................................. 19
2.5 Northern Blot ............................................................................... 20
2.5.1 RNA-Isolierung ............................................................................ 20
2.5.2. Northern Transfer auf die Membran............................................ 20
2.5.3 Hybridisierungssonden ............................................................... 21
2.5.4 Hybridisiening ............................................................................. 21
2.6 Prinzip des ELISA ........................................................................ 22
2.6.1 Stimulation der Zelten in vitro ......................................................... 22
2.6.2 ELISA zum Zytokinnachweis........................................................ 22
2.7 ProHferationstest ......................................................................... 23
2.8 Zytotoxizitätstest ......................................................................... 23
2.9 Gelanalyse apoptotischer Zellen ................................................ 24
2.10 Spenderzellisolation .................................................................... 24
2.11 Aufreinigung der Spenderzellen .................................................. 24
2.11.1 Anreicherung nicht-adhärenter Zellen durch Nylon-Woll-Säulen 24
2.112 Aufreinigung der Spenderzellen mit dem MiniMACS-System..... 25
2.113 Zellisolierung mit dem FACS ....................................................... 25
2.12 Kultivierung und Polarisierung von Zellpopulationen ................. 26
2.12.1 Komplementlyse .......................................................................... 26
2.12.2 Kultur der CD8a depteöerten Zellen........................................... 26
2.13 Zellkultur ..................................................................................... 27
2.131 Zelllinien ...................................................................................... 27
INHALTSVERZEICHNIS
2.13.2 Zellkultur ..................................................................................... 28
2.14 Darstellung der Versuchsergebnisse .......................................... 28
3. ERGEBNISSE ............................................................................. 29
3.1 Parameter während des Krankheitsverlaufes ............................. 29
3.2 Die kranke Maus ......................................................................... 29
3.3 Pnanotypische Charakterisierung der Lymphozyten ................... 32
3.4 Inteiieukinproduktion diverser Zellpopulationen
kranker SCID Mäuse ................................................................... 39
3.5 Das funktioneile Verhalten der Zeilen
aus kranken SCID Mäusen......................................................... 43
3.5.1 Proliferation bei Supplementierung von IL-2 und IL-7 ................. 43
3.5.2 Suppression der Proliferation bei o-CD3 Ligation....................... 43
3.5.3 Einfluß von IL-12 und IL-18 auf das Prolifarationverhalten.......... 48
3.5.4 Das zytolytische Verhalten der Zellen aus
kranken SCID Mäusen ................................................................ 52
3.6. EINSATZ VERSCHIEDENER SPENDERZELLFRAKTIONEN 59
3.6.1 CD45RB l*1 und CD4* Spenderzellen.................................... 59
3.6.2 Extrathymische CD4* Spenderzellen .......................................... 67
3.7 IBD in keimfreien SCID Mäusen.................................................. 76
3.8 Der Einsatz von kranken SCID Mäusen in Therapieversuchen .. 76
4. DISKUSSION .............................................................................. 79
4.1 Körpergewicht ............................................................................. 79
INHALTSVERZEICHNIS
4.2 Histologische Untersuchung der entzündeten Darmabschnitte .. 79
4.3 Phänotypische Charakterisierung der Lymphozyten ................... 80
4.4 Interieukinproduktion der isolierten Lymphozyten....................... 84
4.5 Das fuktionelle Verhalten der Zellen aus kranken SCID Mäusen 86
4.6 Einsatz verschiedener Spenderzellfraktionen ............................. 92
4.6.1 CD4* CD45RBW9h und CD4* CD45RB1™ Spenderzellen ............. 92
4.6.2 Spenderzellen aus Nacktmausen ............................................... 94
4.7 IBD in keimfreien Mausen ........................................................... 95
4.8 Der Einsatz von kranken Mausen in Therapieversuchen............ 97
5. ZUSAMMENFASSUNG ............................................................. 100
6. SUMMARY ................................................................................ 102
7. LITERATURVERZEICHNIS ...................................................... 104
8. ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS ................................................. 123
9. ANHANG: CD Übersicht ............................................................ 126
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