Identifizierung und Charakterisierung des UL11-Homologs des equinen Herpesvirus Typ 1:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | München, Univ., Tierärztliche Fak., Diss., 2002 |
| Beschreibung: | IV, 101 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
2.
SCHRIFTTUM
2
2.1
INFEKTIONEN
MIT
DEN
EQUINEN
HERPESVIREN
TYP
1
UND
4
(EHV-1
UND
-4)
2
2.2
DIE
EHV
1
STAEMME
RACH
UND
RACL22
2
2.3
KLASSIFIZIERUNG
VON
EHV-1
3
2.3
REPLIKATION
DER
ALPHAHERPESVIREN
5
2.3.1
VIRALE
PROTEINE
5
2.3.2
REGULATION
DER
GENEXPRESSION
5
2.3.3
REPLIKATIONSZYKLUS
6
2.4
DAS
ULI
1-PROTEIN
BEI
HSV-1
UND
ANDEREN
ALPHAHERPESVIREN
11
2.5
MYRISTYLIERUNG
VON
PROTEINEN
13
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
15
3.1
ZELLEN
15
3.2
VERSUCHSTIERE
15
3.3
BAKTERIEN
UND
PLASMIDE
15
3.3.1
BAKTERIEN
15
3.3.2
PLASMIDE
-
15
3.4
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
15
3.4.1
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
15
3.4.2
MIT
PEROXIDASE
(POD)
KONJUGIERTE
ZIEGENANTIKOERPER
16
3.4.3
MIT
ALEXA
KONJUGIERTE
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
16
3.4.4
MIT
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
(AP)
KONJUGIERTE
ANTIKOERPER
16
3.5
PUFFER,
LOESUNGEN
UND
REAGENZIEN
16
3.6
GERAETE,
LABORHILFSMITTEL
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
26
3.7
ZELLKULTUR
UND
VIRUSANZUCHT
28
3.7.1
ZELLKULTUR
28
3.7.2
KRYOKONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
28
II
3.7.3
VERMEHRUNG
VON
VIREN
IN
ZELLKULTUR
28
3.7.4
VERWENDETE
VIRUSISOLATE
28
3.7.5
VIRUSTITRATION
29
3.8
PRAEPARATION
VON
VIRALER
DNS
29
3.9
AUFREINIGUNG
VON
VIRIONEN
30
3.10
TRENNUNG
DER
VIRIONEN
IN
HUELLEN
UND
KAPSIDE
30
3.11
HERSTELLUNG
VON
ZELLIYSATEN
FTIR
DEN
WESTERN-BLOT
30
3.12
ZELLFRAKTIONIERUNG
(IN
ANLEHNUNG
AN
BOGNER
ET
AL.,
1992)
31
3.13
TRANSFEKTION
EUKARYOTISCHER
ZELLEN
31
3.13.1
TRANSFEKTION
MIT
EFFECTENEYY
.
32
3.13.2
TRANSFEKTION
MIT
CALCIUMPHOSPHAT-PRAEZIPITATION
32
3.13.3
STABILE
TRANSFEKTION
VON
ZELLEN
32
3.14
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
VIREN
33
3.15
CHARAKTERISIERUNG
REKOMBINANTER
VIREN
IN
VITRO
34
3.15.1
PENETRATIONSKINETIK
34
3.15.2
EINSCHRITT-WACHSTUMSKURVEN
34
3.15.3
PLAQUEGROESSENBESTIMMUNG
35
3.16
DNS-ANALYSEN
35
3.16.1
DNS-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
35
3.16.2
DNS-SPALTUNG
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
35
3.16.3
DNS-DNS
HYBRIDISIERUNG
(SOUTHERN-BLOT)
36
3.17
KLONIERUNG
VIRALER
DNS
37
3.17.1
AMPLIFIZIERUNG
VON
DNS-ABSCHNITTEN
MIT
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
37
3.17.2
AUFREINIGUNG
UND
PRAEPARATION
VON
DNS
NACH
RESTRIKTIONSENZYMVERDAU
39
3.17.3
MODIFIKATIONEN
AN
DEN
FREIEN
ENDEN
DER
DNS
39
3.17.4
LIGATION
VON
DNS-FRAGMENTEN
39
3.17.5
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
MIT
PLASMID
DNS
40
3.17.6
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNS
AUS
TRANSFORMIERTEN
BAKTERIEN
41
3.17.6.1
SCHNELLPRAEPARATION
BAKTERIELLER
PLASMID-DNS
41
3.17.6.2
PRAEPARATION
GROESSERER
MENGEN
PLASMID-DNS
41
3.18
PROTEINANALYSEN
MIT
ELEKTROPHORESE
41
3.18.1
NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
41
3.18.2
FAERBUNG
VON
POLYACRYLAMIDGELEN
MIT
COOMASSIE
BRILLIANT
BLAU
42
3.18.3
ELEKTROTRANSFER
UND
IMMUNODETEKTION
VON
PROTEINEN
(WESTERN-BLOT)
44
III
3.19
EXPRESSION
UND
AUFREINIGUNG
DES
UL
11
-PROTEINS
VON
EHV
-1
IN
BAKTERIEN
44
3.19.1
EXPRESSION
44
3.19.2
AUFREINIGUNG
45
3.20
IMMUNISIERUNG
VON
KANINCHEN
ZUR
ANTIKOERPERGEWINNUNG
47
3.21
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
47
3.22
HEMMUNG
DER
DNS-SYNTHESE
IN
VIRUSINFIZIERTEN
ZELLEN
MIT
PHOSPHONOESSIGSAEURE
(PAA)
48
3.23
DEPHOSPHORYLIERUNG
48
3.24
VERWENDETE
PLASMIDE
48
4.
ERGEBNISSE
52
4.1
HERSTELLUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
ULI
1-EXPRIMIERENDER
ZELLLINIEN
52
4.2
CHARAKTERISIERUNG
DES
UL
11
-PROTEINS
53
4.2.1
HERSTELLUNG
EINES
ULI
1
SPEZIFISCHEN
POLYKLONALEN
ANTISERUMS
53
4.2.2
NACHWEIS
DES
ULI
1
-PROTEINS
IM
WESTEMBLOT
53
4.2.2.1
ULLL-PROTEIN
EXPRESSION
IM
VERLAUF
DER
EH
V-L
INFEKTION
55
4.2.2.2
DAS
ULI
1-PROTEIN
GEHOERT
ZU
DEN
YI-PROTEINEN
57
4.2.2.3
DAS
ULI
1-PROTEIN
IST
MEMBRANASSOZIIERT
58
4.2.2.4
DAS
ULI
1-PROTEIN
IST
EIN
BESTANDTEIL
DES
TEGUMENTS
VON
VIRIONEN
59
4.2.3
DARSTELLUNG
DES
UL
11
-PROTEINS
IN
DER
INDIREKTEN
IMMUNFLUORESZENZ
61
4.2.3.1
LOKALISATION
DES
ULI
1-PROTEINS
IN
INFIZIERTEN
ZELLEN
61
4.2.3.2
DARSTELLUNG
DES
UL
11
-PROTEINS
IN
TRANSFIZIERTEN
ZELLEN
62
4.3
DELETIONSMUETANTEN
65
4.3.1
KONSTRUKTION
ULI
L-NEGATIVER
MUTANTEN
DER
EHV-1
STAEMME
RACH
UND
RACL22
(HA
11
UND
L22A
11)
65
4.3.2
KONSTRUKTION
ULI
1
POSITIVER
REVERTANTEN
(REVHAL
1
UND
REVL22AL
1)
66
4.3.3
CHARAKTERISIERUNG
DES
GENOTYPS
DER
MUTANTEN
UND
REVERTANTEN
IM
SOUTHERN-BLOT
66
4.3.4
DARSTELLUNG
DER
MUTANTEN
UND
REVERTANTEN
IM
WESTERN-BLOT
68
4.3.5
CHARAKTERISIERUNG
VON
HAI
1,
L22A1
1,
REVHAL
1
UND
REVL22AL
1
IN
VITRO
71
4.3.5.1
PLAQUEPHAENOTYP
71
4.3.5.2
EINSCHRITT-WACHSTUMSKINETIK
71
IV
4.3.5.3
PENETRATIONSEIGENSCHAFTEN
74
4.4
UNTERSUCHUNG
DES
UL
11
-PROTEINS
MIT
KOIMMUNPRAEZIPITATION
75
5.
DISKUSSION
78
5.1
DAS
ULI
1-PROTEIN
VON
EHV-1
78
5.2
FUNKTION
DES
ULI
1
FILR
DIE
VIRUSREPLIKATION
IN
VITRO
81
6.
ZUSAMMENFASSUNG
/
SUMMARY
87
7.
LITERATURVERZEICHNIS
90
8.
ANHANG
100
VERZEICHNISS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN |
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