Charakterisierung des inseminationsbedingten Influx von Leukozyten in den Uterus: Etablierung eines In-vivo-Modells
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| Format: | Buch |
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2001
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| adam_text | Titel: Charakterisierung des inseminationsbedingten Influx von Leukozyten in den Uterus von Jungsauen
Autor: Zemmrich, Jana
Jahr: 2001
Inhaltsverzeichnis
einleitung..........................................•...............................................................................................9
; literatur..........................................................................................................................................u
2.1 Instrumentelle Insemination beim Schwein....................................................................................11
2.1.1 Einführung und Bedeutung des Verfahrens...................................................................................//
2.1.2 Besamungsmanagement.................................................................................................................//
2.2 Der porcine Uterus als Immunorgan................................................................................................15
2.2.1 Hormonelle Regulierung der Leukozytenwanderung.....................................................................15
2.2.2 Vorkommen und Verteilung der Leukozytenpopulationen am porcinen Uterus
während des Zyklus........................................................................................................................19
2.3 UTERINE VORGÄNGE UND MECHANISMEN NACH INSEMINATION.............................................................2 I
2.3.1 Spermientransport im weiblichen Genitale....................................................................................21
2.3.2 Uterine Immunantwort nach Insemination....................................................................................22
2.3.3 Spermieneliminierung aus dem weiblichen Genitale.....................................................................25
2.3.4 Immunmodulatorisch wirksame Bestandteile des Inseminats........................................................26
MATERIAL UND METHODEN.........................................................................................................31
3.1 Geräte....................................................................................................................................................31
3.2 Materialien...........................................................................................................................................32
3.2.1 Klinikbedarf...................................................................................................................................32
3.2.2 Laborbedarf,.................................................................................................................................52
3.2.3 Medikamente und Reagenzien........................................................................................................35
3.2.4 Puffer, Lösungen, Medien und Verdünner.....................................................................................34
3.2.5 Materialien für die Separation, Differenzierung und Vitalitätsbestimmung von
Leukozyten undSpermien...............................................................................................................35
3.2.6 Materialien für die Durchßusszytometrie......................................................................................36
3.2.7 Materialien für die indirekte Membranimmunfluoreszenz.............................................................37
3.2.8 Materialien für die Bestimmung der reaktiven Sauerstoffspezies (ROS).......................................38
3.2.9 Materialien für den Transmigrationstest.......................................................................................39
3.2.10 Versuchstiere.........................................................................................................,........................41
3.3 METHODEN...............................................................................................................................................42
3.3.1 Spermagewinnung, -Untersuchung und —aufbereitung...................................................................42
3.3.2 Herstellung eines Seminalplasma-Mischpools...............................................................................42
3.3.3 Bninstkontrolle..............................................................,...............................................................43
3.3.4 Instrumentelle Insemination über die Zervix an der stehenden Sau..............................................43
3.3.5 Chirurgische Maßnahmen zur Gewinnung uteriner Leukozyten....................................................44
3.3.6 Isolierung uteriner Leukozyten aus der Spülflüssigkeit.................................................................46
3.3.7 Entnahme uteriner Gewebeproben................................................................................................46
3.3.8 Blutentnahme..................................................................................................................-¦............46
3.3.9 Isolierung von Leukozyten aus gerinnungsgehemmten Blut..........................................................47
3.3.10 Zellzahl- und Vitalitätsbestimmung mittels Acridinorange-Ethidiambromid................................47
3.3.11 Ourchflusszytometrie...............................................-.....................................................................48
3.3.12 Dzirchflusszytometrische Leukozytendifferenziening, Vitalitätsbestimmung und
Referenzzellmethode......................................................................................................................49
3.3.13 Indirekter Membranimmunfluoreszenztest..........................................,....,.....................................51
3.3.14 Untersuchungsverfahren zur Bestimmung der Bildung reaktiver Sauerstoffspezies
durch neutrophile Granulozyten....................................................................................................52
3.3.15 Transmigrationstest.......................................................................................................................53
3.3.16 Bestimmung von Progesteron und Gesamtöstrogenen im Blutplasma...........................................55
3.3.17 Bakteriologische Untersuchung von Uterusspülproben.................................................................55
3.3.18 Histologische Untersuchung uteriner Gewebeproben...................................................................55
3.3.19 Statistische Auswertung.................................................................................................................56
4 F RC E B Nl SSE ••• ...«-.-•.•••.••«-.--.—-—«•«••-- ••••••• ™ •...».«.... ™...»..™..»..»....—................ 58
4.1 Methodische Vorarbeiten zur Entwicklung eines Tiermodells zur Gewinnung von
leukozyten aus dem porcinen uterus..............................................................................................58
4.1.1 Gewinnung uteriner Leukozyten nach konventioneller Besamung................................................SS
4.1.2 Gewinnung uteriner Leukozyten nach transmuraler Applikation von Spermien oder
phosphatgepufferter Kochsablösung (PBS) am operativ vorgelagerten Uterus...........................63
4.1.3 Einfluss des Chemob ns rekombinantes humanes Interleukin-8 (rhIL-8) auf den
intrauterinen Zellgehalt.................................................................................................................68
4.1.4 Vergleich morphologischer, immunphänotypischer undfunktioneller Eigenschaften
von porcinen Leukozyten aus Blut und Uterus..............................................................................7/
4.1.5 Quantitative Beziehung zwischen luminalen und epithelialen uterinen Leukozyten.....................78
4.1.6 Einfluss der Uterusspülung auf den intrauterinen Keimgehalt......................................................80
4.2 die immunmodulatorische wirkung von bestandteilen des inseminats auf porcine
Blutleukozyten....................................................................................................................................81
4.2.1 Einfluss des Seminalplasmas auf Morphologie und Quantität von porcinen
Leukozytenpopulationen................................................................................................................81
4.2.2 Modulation der Chemotaxis poreiner neutrophiler Granulozyten durch Bestandteile
des Inseminats................................................................................................................................85
4.3 Einfluss von Spermien auf die Transmigration porciner PMN.....................................................92
4.4 intraassayvarianz...............................................................................................................................94
5 diskussion.........................................................................................................................................96
5.1 konzeptionelle überlegungen zu untersuchungen der uterinen immunreaktion nach
instrumenteller insemination...........................................................................................................96
5.2 Etablierung und Kritik des Tiermodells zur Gewinnung von Leukozyten aus dem porcinen
Uterus.....................................................................................................................................................96
5.3 Zeitliche Dynamik und Quantifizierung des uterinen Leukozyteninflux.................................98
5.4 Charakterisierung der uterinen Leukozytenpopulation...........................................................101
5.5 lMMUNMODULAtorische Komponenten des Inseminats..................................................................104
5.6 Bedeutung der uterinen inflammatorischen Reaktion nach instrumenteller Insemination
für eine erfolgreiche konzeption...................................................................................................10?
6 ZUSAMMENFASSUNG...........................................___......._________...............................~.....- 0
7 SUMMARY................................._.............._______.............................................„.......................... 3
8 LITERATURVERZEICHNIS_____________________________________________________11S
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