Untersuchungen zur Charakterisierung der allergischen Komponenten des Katzenflohs Ctenocephalides felis felis (Bouchè 1837):
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Autor: Nadler, Andreas
Jahr: 2001
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
Tabellenverzeichnis 4
Abbildungsverzeichnis 5
Abkürzungsverzeichnis 7
1. Einleitung
2. Literaturfibersicht 11
2.1. Flöhe 11
2.1.1. Allgemeines, Epidemiologie 11
2.1.2. Morphologie und Entwicklung 12
2.1.2.1. Eier 13
2.1.2.2. Larven 14
2.1.2.3. Puppen 15
2.1.2.4. Imagines 16
2.1.3. Vorkommen und Verbreitung 18
2.2. Schadwirkung von Flöhen 20
2.2.1. Wirt-Parasit-Beziehungen 20
2.2.2. Vektorrolle und Zoonoseproblematik 22
2.2.3. Klinik und Diagnostik der Flohallergie 24
2.3. Allergologie 28
2.3.1. Arthropoden und ihre Toxine als Ursachen allergischer
Reaktionen 28
2.3.1.1. Allergene und Toxine als Antigene 29
2.3.1.2. Humorale Immunreaktionen - Bedeutung der
Immunglobuline bei allergischen Reaktionen 30
2.3.1.3. Zellvermittelte Immunreaktionen 35
2.3.2. Das Antigen des Katzenflohs Ctenocephalides felis 36
INHALTSVERZEICHNIS
3. Material und Methodik 38
3.1. Aufbereitung des Flohantigens 40
3.2. Serumgewinnung 44
3.3. Proteinanalytik mittels SDS-PAGE 44
3.3.1. Allgemeiner Überblick 44
3.3.2. Eindimensionale Elektrophorese 46
3.3.3. Zweidimensionale Elektrophorese 47
3.3.3.1. Durchfuhrung der ersten Dimension der
2D-Elektrophorese 49
3.3.3.2. Durchfuhrung der zweiten Dimension der
2D-Elektrophorese 51
3.3.4. Färbetechnik der 2D- Gele 53
3.3.5. Durchführung des Immunoblotting 54
3.3.5.1. Proteintransfer auf eine PVDF-Membran 54
3.3.5.2. Beschichtung der PVDF-Membran mit dem primären
Antikörper 55
3.3.5.3. Beschichtung der PVDF-Membran mit dem sekundären
Antikörper (RAC) 56
3.3.5.4. Färbung, Konservierung und Auswertung 57
4. Ergebnisse 58
4.1. Proteincharakterisierung bei der eindimensionalen
Elektrophorese 58
4.1.1. Floh - Ganzkörperextrakt 58
4.1.2. Extrakt des Flohkopfes 60
4.2. Proteincharakterisierung bei der zweidimensionalen
Elektrophorese 61
4.2.1. Floh - Ganzkörperextrakt 2 61
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.2. Immunoblotting nach der 2D-Elektrophorese 62
4.2.3. Speicheldrüsenextrakt 64
4.2.4. Immunoblotting 65
5. Diskussion 68
6. Zusammenfassung 72
7. Summary 74
8. Anhang 76
9. Literaturverzeichnis 105
10. Danksagung 115
11. Lebenslauf 116
TABELLENVERZEICHNIS
Tabellenverzeichnis
Tabelle 1 Klassifizierung der Immunglobuline 31
Tabelle 2 Sofortreaktionstypen 33
Tabelle 3 Reproduzierbare Proteinbanden bei der SDS-PAGE 58
Tabelle 4 Parameter der Proteine des Speicheldrüsenextraktes 64
Tabelle 5 Parameter der Proteine nach der doppelten Antigen-
Antikörper-Reaktion 66
Tabelle 6 Koordinaten und Parameter der Proteine des gesamten
Flohkörpers in der Kleingeltechnik (s. Abbildung 13) 81
Tabelle 7 Koordinaten und Parameter der Proteine des gesamten
Flohkörpers auf dem Immunoblot nach der Antigen-
Antikörper-Reaktion (s. Abbildung 14) 91
Tabelle 8 Koordinaten und Parameter der Proteine der Speichel-
drüsen von ungefütterten Flöhen in der 2D-
Elektrophorese in der Kleingeltechnik (s. Abbildung 15) 93
Tabelle 9 Koordinaten und Parameter der Proteine der
Flohspeicheldrüse, die nach dem Immunoblotting mit dem
Serum der allergischen Katze und mit dem RAC-Konjugat
eine doppelte Antigen-Antikörper-Reaktion ausgeführt haben
(s. Abbildung 16) 103
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1 Prozentuale Verteilung der einzelnen Entwicklungs-
stadien an der Gesamtpopulation des Flohs 13
Abbildung 2 Schematische Darstellung des Flohzyklus
16
Abbildung 3 Flohallergie bei einer Katze; Alopezie und abgebrochene
Haare 24
Abbildung 4 Flohdermatitis bei einer Katze; Erythem und
aufgekratzte Pusteln
Abbildung 5 Schema des Immunglobulin G
Abbildung 6 Innere Organe, dorsale Ansicht von X. cheopis
Abbildung 8 Prinzip der zweidimensionalen Elektrophorese
Abbildung 9 2D-SDS-PAGE Protein-Marker
Abbildung 10 Schema der 2D-Elektrophorese
27
32
41
Abbildung 7 Abdomen mit Verdauungsorganen, laterale Ansicht
von X. cheopis 43
48
50
52
Abbildung 11 Eindimensionale Elektrophorese des gesamten Flohs 59
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
Abbildung 12 Eindimensionale Elektrophorese des Flohkopfextraktes 60
Abbildung 13 Proteine des gesamten Flohkörpers von nüchternen
Flöhen in der 2D-Elektrophorese in der Kleingeltechnik 62
Abbildung 14 Proteine des gesamten Flohkörpers von nüchternen
Flöhen nach dem Immunoblot mit dem primären und
sekundären Antikörper 63
Abbildung 15 Proteine der Speicheldrüsen von ungefütterten Flöhen
in der 2D-Elektrophorese in der Kleingeltechnik 65
Abbildung 16 Proteine der Speicheldrüsen ungefütterter Flöhe nach
dem Immunoblot mit dem primären und dem
sekundären Antikörper 67
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