Untersuchungen zur Apoptoseregulation in glomerulären Zellen: differentielle Expression der Inhibitor of Apoptosis (IAP) Proteine durch Stickoxid (NO) und zyklisches AMP
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2001
|
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Frankfurt (Main), Univ., Diss., 2001 |
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INHALT
INHALT
1
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
_
VI
2
EINLEITUNG
1
2.1
A
POPTOSE
1
2.1.1
G
ESCHICHTLICHER
A
BRIB
UND
C
HARAKTERISTIKA
1
2.1.2
D
IE
R
OLLE
VON
A
POPTOSE
FUER
PHYSIOLOGISCHE
V
ORGAENGE
1
2.1.3
D
IE
R
OLLE
VON
A
POPTOSE
FUER
PATHOPH
YSIOLOGISCHE
V
ORGAENGE
2
2.2
E
NTZUENDUNG
2
2.2.1
A
LLGEMEINES
2
2.2.2
E
NTZUENDUNGSVORGAENGE
IN
DER
N
IERE
3
23
A
POPTOSE
WAEHREND
ENTZUENDLICHER
E
RKRANKUNGEN
DER
N
IERE
3
2.4
S
TICKOXID
(NO)
4
2.4.1
B
IOSYNTHESE
UND
PHYSIOLOGISCHE
F
UNKTIONEN
4
2.4.2
NO
UND
A
POPTOSE
5
2.4.3
NO
UND
G
LOMERULONEPHRITIS
5
2.5
S
IGNALWEGE
DER
A
POPTOSE
6
2.5.1
C
ASPASEN
7
2.5.2
D
IE
B
CL
-2-F
AMILIE
7
2.5.3
IAPS
8
2.6
Z
IELSETZUNG
DER
A
RBEIT
10
3
MATERIAL
UND
METHODEN
11
3.1
M
ATERIAL
11
3.1.1
L
ABORGERAETE
11
3.1.2
P
LASTIKWAREN
12
3.1.3
W
EITERE
V
ERBRAUCHSMATERIALIEN
12
3.1.4
C
HEMIKALIEN
13
3.1.4.1
SPEZIELLE
CHEMIKALIEN
13
3.1.4.2
REAGENZIEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
SIGNALTRANSDUKTIONSWEGE
15
3.1.4.3
PROTEASEINHIBITOREN
16
3.1.4.4
SONSTIGE
MATERIALIEN
16
INHALT
3.1.4.5
RADIOCHEMIKALIEN,
FA.
AMERSHAM
16
3.1.4.6
ANTISEREN
UND
ANTIKOERPER
16
3.1.4.7
PLASMIDE
18
3.1.4.8
ENZYME
21
3.1.4.9
LOESUNGEN
22
3.1.4.10
PUFFER
22
3.1.5
M
ATERIALIEN
FUER
DIE
Z
ELLKULTUR
31
3.1.5.1
KULTURMEDIUM
31
3.1.5.2
LOESUNGEN
UND
PUFFER
FUER
DIE
ZELLKULTUR
31
3.1.5.3
REAGENZIEN
UND
MEDIENZUSAETZE
31
3.2
M
ETHODEN
32
3.2.1
Z
ELLBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
32
3.2.1.1
ALLGEMEINE
BEDINGUNGEN
32
3.2.1.2
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
32
3.2.1.3
ZELLINIEN
32
3.2.1.4
LEBENDZELLZAHLBESTIMMUNG
33
3.2.1.5
STABILE
TRANSFEKTION
VON
RAW
264.7
MAKROPHAGEN
MIT
DER
CACH-METHODE
33
3.2.2
P
ROTEINCHEMISCHE
M
ETHODEN
34
3.2.2.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMTPROTEIN
AUS
ZELLKULTUR
34
3.2.2.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
PROTEINEN
35
3.2.2.3
SDS-PAGE
(NACH
LAEMMLI,
1970)
35
3.2.2.4
WESTEM-BLOTTING
(PROTEIN
TRANSFER,
IMMOBILISIERUNG)
37
3.2.2.5
IMMUNO-DETEKTION
MIT
ECL
38
3.2.2.6
IMMUNPRAEZIPITATION
38
3.2.2.7
KONTROLLE
DER
NEUSYNTHESE
DURCH
LANGZEIT-MARKIERUNG
MIT
35
S-METHIONIN
39
3.2.3
M
IKROBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
40
3.2.3.1
BAKTERIENSTAEMME
40
3.2.3.2
BAKTERIELLE
NAEHRMEDIEN
40
3.2.3.3
MEDIENZUSAETZE
40
3.2.3.4
KOMPETENTE
ZELLEN
FUER
DIE
TRANSFORMATION
MIT
PLASMIDEN
40
3.2.3.5
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
MIT
PLASMID-DNA
41
3.2.3.6
TRANSFORMATION
MIT
TOPO-TA-CLONING
KIT
(FA.
INVITROGEN)
41
3.2.3.7
BAKTERIELLE
FLUESSIGKULTUR
42
3.2.3.8
VEREINZELUNGSAUSSTRICH
42
N
INHALT
3.2.3.9
KRYOKONSERVIERUNG
VON
BAKTERIENKLONE
42
3.2.4
N
UKLEINSAEURETECHNIKEN
43
3.2.4.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
AUS
ZELLKULTUR
43
3.2.4.2
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
AUS
GESAMTORGAN
DER
RATTE
44
3.2.4.3
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
BAKTERIELLER
KULTUR
DURCH
ALKALISCHE
LYSE
(BIMBOIM
&
DOLY,
1979;
VERAENDERT
NACH
SAMBROOK
ET
AL.,
1989)
44
3.2.4.4
MAXIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
BAKTERIELLER
KULTUR
MITTELS
ANIONENAUSTAUSCHER-SAEULEN
(QIAGEN
PLASMID
MAXI)
45
3.2.4.5
ANALYTISCHE,
NATIVE
DNA-AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
46
3.2.4.6
PRAEPARATIVE,
NATIVE
DNA-AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
46
3.2.4.7
RIBONUKLEASE-PROTEKTIONSASSAY
(RPA)
ZUR
QUANTITATIVEN
BESTIMMUNG
DER
RNA
TRANSKRIPTE
DES
ZU
UNTERSUCHENDEN
GENS
47
3.2.4.8
FAELLUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
AUS
WAESSRIGER
LOESUNG
51
3.2.4.9
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
52
3.2.5
E
NZYMATISCHE
N
UKLEINSAEURETECHNIKEN
52
3.2.5.1
DNA-RESTRIKTIONSVERDAU
52
3.2.5.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
MIT
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
(SAP)
53
3.2.5.3
LIGATION
53
3.2.5.4
IN-VITRO-TRANSKRIPTION
54
3.2.5.5
SEQUENZIERUNG
MIT
DEM
DYE
TERMINATOR
CYCLE
SEQUENCING
KIT
VON
APPLIED
BIOSYSTEMS
(ABI)
54
3.2.5.6
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
55
3.2.5.7
PRIMER-SEQUENZEN
UND
SCHMELZPUNKTE
57
3.2.5.8
UMSCHREIBEN
VON
GESAMT-RNA
IN
CDNA
(REVERSE
TRANSKRIPTION)
58
3.2.6
A
POPTOSE
-D
ETEKTIONSTECHNIKEN
59
3.2.6.1
QUANTIFIZIERUNG
DER
DNA-FRAGMENTIERUNG
MITTELS
DIPHENYLAMIN-ASSAY
59
3.2.6.2
APOPTOSE
NACHWEIS
MITTELS
DNA-LEITER
(NACH
HERRMANN,
1994)
60
3.2.6.3
APOPTOSE
NACHWEIS
MITTELS
CELL
DEATH
ELISA
PLUS
-KIT
61
3.2.6.4
APOPTOSE
NACHWEIS
MITTELS
HOECHST-FAERBUNG
61
3.2.7
SONSTIGE
M
ETHODEN
62
3.2.7.1
SILANBESCHICHTUNG
VON
OBJEKTTRAEGERN
62
3.2.7.2
NITRITMESSUNG
(GRIESS-REAKTION)
62
3.2.7.3
SYNTHESE
VON
GSNO
63
3.2.7.4
IMMUN-FLUORESZENZ
63
M
INHALT
3.2.7.5
STATISTIK
63
4
ERGEBNISSE
_
64
4.1
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
R
EGULATION
DER
A
POPTOSEINDUKTION
IN
M
ESANGIUMZELLEN
64
4.1.1
NO-D
ONOREN
INDUZIEREN
A
POPTOSE
IN
M
ESANGIUMZELLEN
DER
R
ATTE
64
4.1.2
D
ER
E
INFLUB
PROINFLAMMATORISCHER
Z
YTOKINE
AUF
DIE
A
POPTOSEINDUKTION
IN
M
ESANGIUMZELLEN
DER
R
ATTE
67
4.1.3
U
NTERSUCHUNGEN
ZU
MOEGLICHEN
S
CHUTZMECHANISMEN
VOR
A
POPTOSEINDUKTION
IN
M
ESANGIUMZELLEN
68
4.1.3.1
MNSOD
ALS
POTENTIELLER
SCHUTZFAKTOR
VOR
APOPTOSE
IN
MESANGIUMZELLEN
69
4.1.4
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
E
XPRESSIONSKONTROLLE
DER
IAP-P
ROTEIN
-F
AMILIE
IN
M
ESANGIUMZELLEN
70
4.1.4.1
ZYTOKINE
REGULIEREN
DIE
LAP-EXPRESSION
IN
MESANGIUMZELLEN
70
4.1.4.2
DIE
ROLLE
VON
ENDOGENEM
STICKOXID
BEI
DER
ZYTOKIN-VERMITTELTEN
LAP-EXPRESSION
IN
MESANGIUMZELLEN
71
4.1.4.3
DIE
WIRKUNG
VON
EXOGENEM
STICKOXID
(NO)
AUF
DIE
LAP-EXPRESSION
IN
MESANGIUMZELLEN
73
4.1.4.4
DIE
WIRKUNG
VON
ZYKLISCHEM
AMP
(CAMP)
AUF
DIE
LAP-EXPRESSION
IN
MESANGIUMZELLEN
75
4.1.4.5
EINFLUSS
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
AUF
DIE
LAP-EXPRESSION
IN
MESANGIUMZELLEN
83
4.1.4.6
EINFLUSS
VON
STRESSFAKTOREN
AUF
DIE
RIAPI
-EXPRESSION
IN
MESANGIUMZELLEN
84
4.1.4.7
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
STABILITAET
DER
LAPS
IN
MESANGIUMZELLEN
85
4.2
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
A
POPTOSEREGULATION
IN
DER
M
AKROPHAGEN
Z
ELLINIE
RAW
264.7
88
4.2.1
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
E
XPRESSIONSKONTROLLE
VON
C
IAPI
UND
XIAP
WAEHREND
DER
NO
INDUZIERTEN
A
POPTOSE
IN
RAW
264.7
88
4.2.2
D
IE
S
CHUTZWIRKUNG
VON
P
HORBOLESTER
AUF
DIE
S
TICKOXID
-
INDUZIERTE
A
POPTOSE
IN
RAW
264.7
90
4.2.3
D
IE
S
CHUTZWIRKUNG
VON
ZYKLISCHEM
AMP
AUF
DIE
S
TICKOXID
-
INDUZIERTE
A
POPTOSE
IN
RAW
264.7
91
4.2.4
D
ER
E
INFLUB
VON
P
53
A
NTISENSE
T
RANSFEKTION
AUF
DIE
IAP-R
EGULATION
UND
DEN
APOPTOTISCHEN
ZELLTOD
NACH
NO
IN
RAW
264.7
92
IV
INHALT
4.2.5
D
ER
E
INFLUB
VON
B
CL
-2-UE
BEREXPRESSION
AUF
DIE
IAP-R
EGULATION
UND
DEN
APOPTOTISCHEN
ZELLTOD
NACH
NO
IN
RAW
264.7
94
4.2.6
E
INFLUB
VON
IAP-UE
BEREXPRESSION
AUF
DEN
APOPTOTISCHEN
Z
ELLTOD
NACH
NO
IN
RAW
264.7
94
43
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
IAP-R
EGULATION
IN
ANDEREN
Z
ELLSYSTEMEN
96
4.3.1
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
R
EGULATION
DER
IAP-P
ROTEINE
DURCH
C
AMP
IN
DER
HUMANEN
L
UNGENEPITHELZELL
-K
ARZINOM
-L
INIE
A
549
96
4.3.2
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
R
EGULATION
DER
IAP
S
IN
DER
HUMANEN
B
RUSTKREBSZELL
-
L
INIE
MCF-7
97
4.4
U
NTERSUCHUNGEN
ZUM
E
INFLUB
VON
VERSCHIEDENEN
S
IGNALTRANSDUKTIONKASKADEN
AUF
DIE
A
POPTOSE
-I
NDUKTION
NACH
Z
YTOKINSTIMULATION
IN
M
ESANGIUMZELLEN
99
4.4.1
U
NTERSUCHUNGEN
ZUM
E
INFLUB
VON
P
ROTEINPHOSPHATASE
-H
EMMERN
AUF
DIE
A
POPTOSEINDUKTION
IN
M
ESANGIUMZELLEN
100
4.4.1.1
OKADASAEURE INDUZIERT
APOPTOSE
IN
MESANGIUMZELLEN
DER
RATTE
100
4.4.1.2
OKADASAEURE
FUHRT
ZUR
INDUKTION
DER
INOS
IN
MESANGIUM
ZELLEN
103
4.4.1.3
DIE
ROLLE
VON
STICKOXID
BEI
DER
OKADASAEURE
VERMITTELTEN
APOPTOSE
104
5
DISKUSSION
106
5.1
NO
UND
IAP-R
EGULATION
106
6
ZUSAMMENFASSUNG
112
7
LITERATURVERZEICHNIS
_
113
8
DANKSAGUNG
_
121
9
LEBENSLAUF
_
122
10
PUBLIKATIONEN
_
123
V |
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