Nachweis genetischer Veränderungen im histologisch normalen Urothel von Tumorpatienten mittels Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
3
1.1
ANATOMIE
DER
HARNBLASE
.
3
1.1.1
MAKROSKOPISCHE
ANATOMIE
.
3
1.1.2
MIKROSKOPISCHE
ANATOMIE
.
4
1.2
DAS
HARNBLASENKARZINOM
.
5
1.2.1
EPIDEMIOLOGIE
UND
INZIDENZ
.
5
1.2.2
AETIOLOGIE
UND
PATHOGENESE
.
6
1.2.3
LOKALISATION
.
9
1.2.4
MORPHOLOGIE
UND
HISTOPATHOLOGIE
.
9
1.2.5
TNM-KLASSIFIKATION
.
12
1.3
EPITHELIALE
LAESIONEN,
PRAENEOPLASIEN
UND
INTRAUROTHELIALE
NEOPLASIEN
.
14
1.3.1
EPITHELIALE
HYPERPLASIE
.
15
1.3.2
PLATTENEPITHELMETAPLASIE
.
15
1.3.3
DYSPLASIE
UND
CIS
.
16
1.4
PATHOGENESE
UND
MOLEKULARGENETIK
DES
HARNBLASENKARZINOMS
.
16
1.4.1
CHROMOSOMALE
ABERRATIONEN
.
16
1.4.2
TUMORSUPPRESSORGENE
.
17
1.4.3
MOLEKULARGENETISCHES
MODELL
DER
UROTHELIALEN
KARZINOGENESE
.
22
1.4.4
KLONALITAET
MULTIFOKALER
HAMBLASENKARZINOME
.
24
1.5
5-AMINOLAEVULINSAEURE-INDUZIERTE-FLUORESZENZZYSTOSKOPIE
(AFE)
ZUR
FRUEHERKENNUNG
UROTHELIALER
NEOPLASIEN
.
25
1.6
FRAGESTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
.
28
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
29
2.1
UNTERSUCHUNGSGUT
.
29
2.1.1
HISTOMORPHOLOGIE
DER
AUSGEWAEHLTEN
NORMALUROTHELPRAEPARATE
.
29
2.1.1.1
HERDFOERMIGE
UROTHELZELLPROLIFERATIONEN
.
29
2.1.1.2
UNSPEZIFISCHE
ENTZUENDUNGEN
.
29
2.1.1.3
BESONDERE
ENTZUENDUNGSFORMEN
.
30
2.2
METHODIK
.
30
2.2.1
DEFINITION
DER
FLUORESZENZ-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG
.
30
2.2.2
AUFBEREITUNG
DES
NORMALUROTHELS
FUER
DIE
FLUORESZENZ-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG
.
32
2.2.2.1
HERSTELLUNG
VON
HE-KONTROLLSCHNITTEN
.
32
2.2.2.2
HERSTELLUNG
DER
GEFRIERSCHNITTE
.
32
2.2.2.3
MIKRODISSEKTION
DES
NORMALUROTHELS
.
32
2.2.2.4
HERSTELLUNG
DER
CYTOSPINS
.
34
2.2.3
VORBEREITUNG
DES
KONTROLL
UND
VERGLEICHSMATERIALS
FUER
DIE
FISH
.
34
2.2.3.1
ANFERTIGEN
VON
METAPHASENPRAEPARATEN
.
34
2.2.3.2
HERSTELLUNG
VON
UROTSA-PRAEPARATEN
.
34
2.2.3.3
HERSTELLUNG
VON
YYNICHT-NORMALUROTHELPRAEPARATEN
"
AUS
TUMOR-,
HYPER
UND
METAPLASIEAREALEN
.
35
2.2.4
VORBEREITUNG
DER
DNA-PROBEN
FUER
DIE
FISH
.
35
2.2.5
EXPERIMENTELLE
DURCHFUEHRUNG
DER
FISH:
TAG
1
.
36
2.2.5.1
BESCHRIFTUNG
DER
OBJEKTTRAEGER
.
36
2.2.5.2
CAMOY-FIXIERUNG
DER
CYTOSPINS
.
36
2.2.S.3
HERSTELLUNG
DER
DNA-PROBEN-GEMISCHE
.
36
2.2.5.4
DENATURIERUNG
DER
NORMALUROTHELZELL-DNA
.
38
2.2.5.5
DEHYDRIERUNG
DER
CYTOSPINS
IN
AUFSTEIGENDER
ALKOHOLREIHE
.
38
2.2.5.6
BEHANDLUNG
DER
UROTHELZELLKEME
MIT
PROTEINASE
K
.
38
2.2.5.7
DEHYDRIERUNG
DER
CYTOSPINS
IN
AUFSTEIGENDER
ALKOHOLREIHE
.
39
2.2.S.8
DENATURIERUNG
UND
INKUBATION
DER
DNA-PROBEN
.
39
2.2.5.9
PIPETTIEREN
DER
DNA-PROBEN
AUF
DIE
CYTOSPINS
UND
HYBRIDISIERUNG
.
39
2.2.6
EXPERIMENTELLE
DURCHFUEHRUNG
DER
FISH:
TAG
II
.
40
2.2.6.1
BENUETZTE
FARBSTOFFE
UND
FARBSTOFFVERDUENNUNGEN
.
40
2.2.6.2
WASCHVORGANG
1
.
41
2.2.6.3
ABBLOCKEN
UNSPEZIFISCHER
BASENPAARE
.
41
2.2.6.4
ERSTE
FARBSTOFF-INKUBATION
MIT
ANTI-DIGOXIGENIN-FLUORESCEIN
.
41
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.6.5
WASCHVORGANG
II
.
42
2.2.6.6
ABBLOCKEN
UNSPEZIFISCHER
BASENPAARE
.
43
2.2.6.7
ZWEITE
FARBSTOFF-INKUBATION
MIT
ANTI-SCHAF-FITC
.
43
2.2.6.8
WASCHVORGANG
111
.
43
2.2.6.9
ABBLOCKEN
UNSPEZIFISCHER
BASENPAARE
.
43
2.2.6.10
DRITTE
FARBSTOFF-INKUBATION
MIT
TEXAS
RED
AVIDIN
.
43
2.2.6.
1
1
WASCHVORGANG
IV
.
43
2.2.6.12
DAPI-ANTIFADE-SCHUTZ
DES
HYBRIDISIERUNGSPRODUKTS
.
44
2.3
AUSWERTUNG
DER
PRAEPARATE
.
44
2.3.1
GERAETE
UND
EINSTELLUNGEN
.
44
2.3.2
BEWERTUNGSKRITERIEN
DER
FISH-SIGNALE
.
45
2.3.3
AUSZAEHLEN
DER
OBJEKTTRAEGER
.
46
2.3.4
DATENAUSWERTUNG
.
46
2.3.5
FOTODOKUMENTATION
.
47
2.4
BILDMATERIAL
.
48
3
ERGEBNISSE
.
SO
3.1
METHODISCHE
ERFAHRUNGEN
.
SO
3.2
ERGEBNISSE
DER
FISH
AN
KONTROLLPRAEPARATEN
.
51
3.2.1
METAPHASENPRAEPARATE
.
51
3.2.2
UROTSA-PRAEPARATE
.
52
3.2.3
BESTIMMUNG
DES
SCHWELLENWERTES
ZUR
DEFINITION
GENETISCHER
ABERRATIONEN
IN
DEN
UNTERSUCHTEN
NONNALUROTHEL-PRAEPARATEN
.
52
3.3
ERGEBNISSE
DER
FISH
AN
NORMALUROTHELBIOPSIEN
VON
TUMORPATIENTEN.53
3.3.1
EFFEKTIVITAET
DER
FISH
IM
UNTERSUCHUNGSGUT
.
53
3.3.2
GENETISCHE
ALTERATIONEN
DER
CHROMOSOMEN
9
UND
17
.
54
3.3.3
GRAPHISCHE
DARSTELLUNG
DER
ERGEBNISSE
.
.
62
4
DISKUSSION
.
64
4.1
ANGEWANDTE
METHODIK
_
64
4.2
GENETISCHE
VERAENDERUNGEN
IM
NORMALUROTHEL
VON
HARNBLASENKARZINOMPATIENTEN
.65
4.2.1
CHROMOSOM
9
ALTERATIONEN
.
65
4.2.2
CHROMOSOM
17P-ALTERATIONEN
.
68
4.2.3
WEITERE
CHROMOSOMALE
UND
MOLEKULARE
VERAENDERUNGEN
.
73
4.3
RELEVANZ
DER
FLUORESZENZDIAGNOSTIK
FUER
DIE
FRUEHERKENNUNG
PRAENEOPLASTISCHER
LAESIONEN
_
74
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
77
6
ANHANG
.
79
6.1
LITERATURVERZEICHNIS.
.
79
6.2
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.
.
89
6.3
VERWENDETE
REAGENZIEN
UND
CHEMIKALIEN
.
91
6.4
VEROEFFENTLICHUNGEN
UND
VORTRAEGE.
.
92
6.5
ROHDATEN
UND
ERGEBNISSE
DER
AUSWERTUNG
.
93
6.6
DANKSAGUNG
.
-
-----
.96
6.7
LEBENSLAUF.
.
97 |
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