Entwicklung einer Methode zur mechanischen Disaggregation von Hautbiopsien und deren Validierung im Rahmen durchflusszytometrischer Untersuchungen zum Immunphänotyp läsionaler kutaner T-Zell-Subpopulationen:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
DANKSAGUNG.3
INHALTSVERZEICHNIS.4
VERZEICHNIS DER VERWENDETEN ABKUERZUNGEN.7
1. EINLEITUNG.9
1.1 T-LYMPHOZYTEN DER HAUT.9
1.2 VERFAHREN ZUR UNTERSUCHUNG VON KUTANEN LYMPHOZYTEN.12
1.3 METHODISCHE GRUNDLAGEN FUER DIE PHAENOTYPISIERUNG KUTANER
LYMPHOZYTEN MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE.13
1.3.1 DIE DISAGGREGATION VON SOLIDEN GEWEBEN
.
13
1.3.2 UEBERBLICK UEBER DIE VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG VON
EINZELZELLSUSPENSIONEN
AUS HAUTBIOPSIEN UNTER BERUECKSICHTIGUNG ULTRASTRUKTURELLER
BESONDERHEITEN DER
HAUT
.
16
2. ZIELSETZUNG.18
3. MATERIAL UND METHODEN.19
3.1 PATIENTEN.19
3.2 UNTERSUCHUNGSMATERIAL.20
3.2.1 HAUT
.
20
3.2.2 BLUT
.
20
3.2.2.1 ISOLIERUNG VON PBMC AUS PERIPHEREM BLUT.21
3.3 MATERIALIEN UND GERAETE.22
3.3
.1 CHEMIKALIEN
.22
3.3.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.22
3.3.3
MONOKLONALE ANTIKOERPER
.23
3.4 HERSTELLUNG VON EINZELZELLSUSPENSIONEN AUS HAUTBIOPSIEN.24
3.4.1 MECHANISCHE DISAGGREGATION MIT DER MEDI MACH INE
.
24
3.4.1.1 BESTANDTEILE UND PRINZIPIELLE FUNKTIONSWEISE DER MEDIMACHINE.
24
3.4.1.2 ETABLIERUNG DER MECHANISCHEN METHODE.25
3.4.2 ENZYMMETHODE
.27
3.5 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE UNTERSUCHUNGEN.28
3.5
.1 FLUORESZENZFAERBUNG UND ANTIKOERPERKOMBINATIONEN
.
29
3.5.1.1 PROTOKOLL DER FLUORESZENZFARBUNG.29
3.5.1.2 ANTIKOERPERKOMBINATIONEN.30
3.5.2
FLUORESZENZMESSUNG MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETER
.
31
A
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
3.5.3 DATENERFASSUNG, DATENANALYSE UND STATISTISCHE AUSWERTUNG
.
31
4. ERGEBNISSE.34
4.1 EVALUIERUNG OPTIMALER BEDINGUNGEN FUER DIE VERWENDETEN
DISAGGREGATIONSMETHODEN.34
4.1.1 MECHANISCHE DISAGGREGATION
.
34
4.1.1.1 AUSGANGSZUSTAND DER BIOPSIEN UND LAGERUNGSBEDINGUNGEN.34
4.1.1.2 EINFLUSS DES GRADES DER LYMPHOZELLULAEREN INFILTRATION DER
HAUTBIOPTATE
.37
4.1.1.3 EINFLUSS DER MECHANISCHEN DISAGGREGATION AUF DIE VITALITAET DER
ZELLEN
39
4.1.1.3 EINFLUSS DER MECHANISCHEN DISAGGREGATION AUF DIE VITALITAET DER
ZELLEN
40
4.1.1.4 EINFLUSS DER MECHANISCHEN DISAGGREGATION AUF DIE EXPRESSION VON
OBERFLAECHENANTIGENEN AUF KUTANEN LYMPHOZYTEN.40
4.1.1.5 AUSSCHLUSS UNSPEZIFISCHER ANTIKOERPERBINDUNGEN AN
HAUTSTRUKTUREN. 42
4.1.1.6 ZEITAUFWAND.43
4.1.2 ZUSAMMEN FASSENDES PROTOKOLL ZUR HERSTELLUNG VON EINZELZELL
SUSPENSIONEN AUS HAUTBIOPSIEN DURCH MECHANISCHE DISAGGREGATION
.
44
4.1.3 ENZYMATISCHE DISAGGREGATION
.
45
4.1.3.1 EINFLUSS DER ENZYMATISCHEN DISAGGREGATION AUF DIE EXPRESSION VON
OBERFLAECHENANTIGENEN KUTANER LYMPHOZYTEN.45
4.1.3.2 AUSGANGSZUSTAND DER BIOPSIEN UND LAGERUNGSBEDINGUNGEN.47
4.1.3.3 GRAD DER LYMPHOZELLULAEREN INFILTRATION DER HAUT.47
4.1.3.4 BEDINGUNGEN WAEHREND DER INKUBATION IN DISPASE.48
4.1.3.5 EINFLUSS DER ENZYMATISCHEN DISAGGREGATION AUF DIE VITALITAET DER
ZELLEN
.49
4.1.3.6 ZEITAUFWAND.49
4.2
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE IMMUNPHAENOTYPISIERUNGEN KUTANER
T-
LYMPHOZYTENSUBPOPULATIONEN.50
4.2.1 CD4/CD8 T-ZELL-RATIO
.
51
4.2.2 EXPRESSION VON CD45RO UND CD45RA
.52
4.2.3 EXPRESSION VON AKTIVIERUNGSANTIGENEN
.53
4.2.4 EXPRESSION VON CLA (KUTANES LYMPHOZYTEN-ANTIGEN)
.55
4.2.5 IMMUNPHAENOTYP LAESIONALER KUTANER T-ZELLEN BEI PSORIASIS UND CTCL
.
56
INHALTSVERZEICHNIS
5. DISKUSSION.58
6. ZUSAMMENFASSUNG.72
7. LITERATURVERZEICHNIS.74
6 |
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