Herstellung und präklinische Erprobung rekombinanter bispezifischer single-chain-Antikörper zur Elimination epithelialer Tumorzellen aus Stammzelltransplantaten:
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| Format: | Buch |
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2002
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| Beschreibung: | München, Univ., Med. Fak., Diss., 2002 |
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1
EINLEITUNG
_
1
1.1
P
RINZIPIEN
DER
K
REBSTHERAPIE
1
1.1.1
CHIRURGISCHE
THERAPIE
.
1
1.1.2
BESTRAHLUNG
.
1
1.1.3
CHEMOTHERAPIE
.
2
1.1.3.1
ANTIMETABOLITE
.
3
1.1.3.2
PFLANZENALKALOIDE
.
3
1.1.3.3
TOPOISOMERASEINHIBITOREN
.
3
1.1.3.4
ALKYLIERENDE
SUBSTANZEN
.
3
1.1.3.5
ANTITUMOR
ANTIBIOTIKA
.
4
1.1.3.6
HORMONE
.
4
1.1.4
IMMUNOLOGISCHE
THERAPIEANSAETZE.
4
1.1.4.1
ZYTOKINE
.
4
1.1.4.2
ZELLULAERE
THERAPIE
.
5
1.1.4.3
TUMORVACCINE
.
5
1.1.4.4
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
5
1.2
T
UMORASSOZIIERTE
A
NTIGENE
(TAA)
_
6
1.2.1
STRUKTURELLE
MUTATIONEN
IN
ONKOGENEN
ODER
SUPPRESSORGENEN
.
6
1.2.2
FEHLERHAFT
GLYKOSILIERTE
MOLEKUELE
.
6
1.2.3
UEBEREXPRESSION
VON
PHYSIOLOGISCHEN
PROTEINEN
.
7
13
H
OCH
-D
OSIS
C
HEMOTHERAPIE
(HDC)
_
8
1.3.1
DEFINITION
.
8
1.3.2
ANWENDUNG
.
8
1.3.3
PROBLEME
UND
GEFAHREN
.
8
1.4
S
TAMMZELLTRANSPLANTATION
_
9
1.4.1
CHARAKTERISTIKA
HAEMATOPOETISCHER
STAMMZELLEN
.
9
1.4.2
ALLGEMEINES
ZUR
TRANSPLANTATION
HAEMATOPOETISCHER
STAMMZELLEN
.
10
1.4.3
ALLOGENE
STAMMZELLTRANSPLANTATION
.
12
1.4.3.1
GRAFT-VERSUS-HOST
DISEASE
(GVHD)
.
12
1.4.4
AUTOLOGE
STAMMZELLTRANSPLANTATION
.
13
1.4.5
NABELSCHNURSTAMMZELLEN
.
14
1.4.6
EX-VFVO-EXPANSION
.
14
2
ELIMINATION
VON
KONTAMINIERENDEN
TUMORZELLEN
AUS
STAMMZELLTRANSPLANTATEN
(
YYPURGING
"
)
---------------------------------
16
2.1
H
INTERGRUND
16
2.2
M
ETHODEN
DES
YY
PURGING
"
--------------------------------------------------------------------------
17
2.2.1
POSITIVE
SELEKTION
.
17
2.2.1.1
MAGNETPARTIKEL
.
17
2.2.1.2
KULTUR
.
18
2.2.2
NEGATIVE
SELEKTION
.
18
2.2.2.1
MAGNETPARTIKEL
.
18
2.2.2.2
ZYTOSTATIKA
.
19
2.2.2.3
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
19
2.2.2.3.1
KOMPLEMENTAKTIVIERUNG
.
19
2.2.2.3.2
ANTIKOERPER-ABHAENGIGE
ZELLVERMITTELTE
ZYTOTOXIZITAET
(ADCC)
.
20
2.2.2.3
.3
PHAGOZYTOSE
.
20
2.2.2.3.4
ANWENDUNG
.
20
2.2.2.4
ANTIKOERPERKONJUGATE
.
21
2.2.2.5
BISPEZIFISCHE
ANTIKOERPER
.
21
3
HERSTELLUNG
DER BISPEZIFISCHEN
SINGLE-CHAIN
ANTIKOERPER
M79
ACD3,
ALEY-ACD3
(LY19-3)
UND
AERBB2-ACD3
(E5-3)
UND
PURGING
VON
STAMMZELLPRAEPARATIONEN
_
23
3.1
M
ATERIAL
UND
M
ETHODEN
_
23
3.1.1
MATERIAL
.
23
3.1.1.1
LABORGERAETE
UND
HILFSMITTEL
.
23
3.1.1.2
CHEMIKALIEN,
SEREN
UND
KULTURMEDIEN
.
24
3.1.1.3
LOESUNGEN
UND
PUFFER
.
25
3.1.1.4
VEKTOREN
UND
DNA-FRAGMENTE
.
26
3.1.1.5
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
.
27
3.1.1.6
ENZYME
.
27
3.1.1.7
BAKTERIENSTAEMME
.
27
3.1.1.8
TUMORZELLEN
.
27
3.1.1.9
AUSGANGSPRODUKTE
ZUR
GEWINNUNG
VON
EFFEKTORZELLEN
.
28
3.1.1.10
ANTIKOERPER
.
28
3.1.1.10.1
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
UND
KONJUGATE
FUER
IMMUNOLOGISCHE
FAERBUNGEN
.
28
3.1.1.10.2
ANTIKOERPER
FUER
DIE
ZERSTOERUNG
VON
TUMORZELLEN
.
28
3.1.2
METHODEN
.
29
3.1.2.1
HERSTELLUNG
VON
MEDIUM
FUER
BAKTERIENKULTUREN
.
29
3.1.2.2
HERSTELLUNG
VON
LB-AMPICILLIN-PLATTEN
.
29
3.1.2.3
HERSTELLUNG
VON
MEDIUM
FUER
TUMORZELLINIEN
.
29
3.1.2.4
BESTIMMUNG VON
ZELLKONZENTRATIONEN
MIT
DER
NEUBAUER-ZAEHLKAMMER
.
30
3.1.2.5
KOMPETENZINDUKTION
VON
E.
COLI
FUER
DIE
TRANSFORMATION
VON
DNA-PLASMIDEN
.
30
3.1.2.6
HITZESCHOCKTRANSFORMATION
VON
DNA-PLASMIDEN
IN
KOMPETENTE
E.
COLI
.
31
3.1.2.7
GEWINNUNG
VON
PLASMIDEN
AUS
BAKTERIEN
.
31
3.1.2.7.1
MINIPRAEPARATION
.
R.31
3.1.2.7.2
MIDIPRAEPARATION
.
31
3.1.2.7.3
MEGAPRAEPARATION
.
31
3.1.2.8
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
32
3.1.2.9
RUECKGEWINNUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN.
32
3.1.2.10
REINIGUNG
VON
DNA
MITTELS
PHENOLISIERUNG
.
32
3.1.2.11
KONZENTRIERUNG
VON
DNA
MITTELS
PRAEZIPITATION
.
32
3.1.2.12
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
VON
DNA-LOESUNGEN
.
33
3.1.2.13
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
33
3.1.2.13.1
SCREENING
VON
BAKTERIENKLONEN
.
34
3.1.2.13.2
AMPLIFIKATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
FUER
LEICHTE
UND
SCHWERE
KETTEN
.
34
3.1.2.13.3
FUSION
VON
DNA-FRAGMENTEN
FUER
LEICHTE
UND
SCHWERE
KETTEN
.
35
3.1.2.14
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
.
36
3.1.2.15
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
IN
PRAEPARIERTE
VEKTOREN
.
36
3.1.2.16
TRANSFEKTION
VON
CHO-ZELLEN
MITTELS
ELEKTROPORATION
.
36
3.1.2.17
EXPRESSION
VON
BISPEZIFISCHEN
SINGLE-CHAIN-ANTIKOERPEM
IN
CHO-ZELLEN
.
37
3.1.2.18
NACHWEIS
VON
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
IM
KULTURUEBERSTAND
VON
CHO-ZELLEN
.
38
3.1.2.19
REINIGUNG
VON
BISPEZIFISCHEN
SINGLE-CHAIN-ANTIKOERPEM
AUS
KULTURUEBERSTAND
.
38
3.1.2.20
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
VON
BISPEZIFISCHEN
SINGLE-CHAIN-ANTIKOERPEM
.
39
3.
1
.2.20.1
POLYACRYLAMIDGELELKTROPHORESE
(PAGE)
.
39
3.1.2.21
KULTIVIERUNG
VON
TUMORZELLINEN
.
39
3.1.2.22
EINFRIEREN
VON
EUKARYONTISCHEN
ZELLEN
.
40
3.1.2.23
GEWINNUNG
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
AUS
PERIPHEREM
BLUT
(PBMC)
.
40
3.1.2.24
GEWINNUNG
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
AUS
KNOCHENMARK
(BMMC)
.
40
3.1.2.25
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
MESSUNG
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
.
40
3.1.2.26
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
MESSUNG
VON
TUMORZELLEN
.
41
II
3.1.2.27
LYSE
VON
TUMORZELLEN
MIT
HILFE
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
.
41
3.1.2.27.1
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
5L
CR
RELEASE
ASSAY
.
41
3.1.2.27.2
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
KULTUR
UND
ANSCHLIESSENDER
APAAP
ODER
ELISA-FAERBUNG
.
42
3.1.2.28
QUANTIFIZIERUNG
KOLONIENBILDENDER
EINHEITEN
(CFUS)
ZUR
BESTIMMUNG
DER
STAMMZELLVITALITAET
.
43
3.2
E
RGEBNISSE
_
44
3.2.1
HERSTELLUNG
DER
GENE
FUER
DIE
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPER
LY19-3
(ALEY-ACD3)
UND
E5-3
(AERBB2-ACD3)
.
44
3.2.2
PRODUKTION
DER
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPER
LY19-3
UND
E5-3
.
47
3.2.3
LYSE
VON
TUMORZELLEN
DURCH
ANTIKOERPERVERMITTELTE
REKRUTIERUNG
VON
CD3
+
BZW.
FC-
REZEPTOR
TRAGENDEN
ZELLEN
.
48
3.2.3.1
VERGLEICH
VON
RCC
UND
ADCC
MIT
PBMC
.
48
3.2.3.2
MONONUKLEAERE
KNOCHENMARKSZELLEN
(BMMCS)
ALS
EFFEKTORZELLEN
ZUR
ELIMINATION
KONTAMINIERENDER
TUMORZELLEN
.
49
3.2.3.3
ABHAENGIGKEIT
DER
LYSERATE
VOM
ANTEIL
DER
CD3
+
ZELLEN
IM
VERSUCHSANSATZ
UNTER
VERWENDUNG
VON
M79-ACD3
UND
KNOCHENMARKSZELLEN
ALS
EFFEKTORZELLEN
.
50
3.2.3.4
EINFLUSS
DER
INKUBATIONSZEIT
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
LYSE
.
51
3.2.3.5
ELIMINATION
VON
HUMANEN
MAGENKARZINOMZELLEN
AUS
BMMCS
MIT
3
VERSCHIEDENEN
BISPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
.
52
3.2.3.6
ELIMINATION
VON
HUMANEN
BRUSTKREBSZELLEN
AUS
DER
MONONUKLEAEREN
ZELLFFAKTION
EINES
LEUKAPHERESEPRODUKTES
(PSMC)
DURCH
DREI
VERSCHIEDENE
BISPEZIFISCHE
ANTIKOERPER
.
53
3.23.7
EINFLUSS
DER
T-ZELL-VERMITTELTEN
TUMORZELLZERSTOERUNG
AUF
DIE
VITALITAET
DER
STAMMZELLEN
IM
VERSUCHSANSATZ
.
54
4
DISKUSSION
_
56
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
59
6
LITERATURVERZEICHNIS
_
61 |
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| title_full | Herstellung und präklinische Erprobung rekombinanter bispezifischer single-chain-Antikörper zur Elimination epithelialer Tumorzellen aus Stammzelltransplantaten von Konstantin Maletz |
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| title_short | Herstellung und präklinische Erprobung rekombinanter bispezifischer single-chain-Antikörper zur Elimination epithelialer Tumorzellen aus Stammzelltransplantaten |
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| topic | Bispecific single-chain antibodies Epithelial tumors Immunotherapy Molecular genetics Oncology Stem cell transplantation |
| topic_facet | Bispecific single-chain antibodies Epithelial tumors Immunotherapy Molecular genetics Oncology Stem cell transplantation Hochschulschrift |
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