Statische und dynamische Lichtstreuung an Lösungen von Aktinfilamenten:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 1
EINLEITUNG ' 3
AKTIN UND AKTINBINDENDE PROTEINE 4
F-AKTIN VERNETZENDE PROTEINE, DEREN FUNKTION UND RELEVANZ 6
AKTINNETZWERKE ALS MODELLE FUER DIE POLYMERPHYSIK 7
THEORIE DER LICHTSTREUUNG 10
1.0 EINLEITUNG 10
1.1 LICHTSTREUUNG IM EINTEILCHEN- UND IM KONTINUUMS-BILDU 12
1.2 WINKELABHAENGIGKEIT DER STREUSTRAHLUNG 15
1.3 STATISCHE LICHTSTREUUNG 16
1.4 DYNAMISCHE LICHTSTREUUNG 19
1.4.0 EINLEITUNG 19
1.4.1 DIE INTENSITAETSAUTOKORRELATIONSFUNKTION 20
1.4.2 DIFFUSION KLEINER PARTIKEL IN LOESUNG 23
1.5 UNTERSUCHUNG DER DIFFUSION SEMIFLEXIBLER POLYMERE MIT LICHTSTREUUNG
24
1.5.0 EINLEITUNG 24
1.5.1 THEORIE DER SEMIFLEXIBLEN POLYMERE 25
1.5.1.1 DER FLEXIBLE GRENZFALL - GAUSS'SCHE KETTE 25
1.5.1.2 DAS MODELL VON KRATKY UND POROD 26
1.5.1.3 DER STRUKTURFAKTOR FUER SEMIFLEXIBLE POLYMERE 30
GERAETE ZUM EXPERIMENT 33
2.0 EINLEITUNG , 33
2.1 DIE LICHTSTREUANLAGE 34
2.1.1 JUSTAGEPROTOKOLLE, STREUWINKELKORREKTUR UND KONTROLLE DER
INTENSITAETSSTABILITAET DES
LASERS UEBER LANGE ZEITRAEUME 37
2.1.1.1 DIE KORREKTOR DES STREUVEKTORS FUER KLEINE STREUWINKEL IN
RECHTECKIGEN KUEVETTEN 42
2.1.1.2 UEBERPRUEFUNG DER LANGZEITSTABILITAET DES INSTRUMENTS 44
2.2 DER THERMOSTAT 46
2.3 DAS VISKOSIMETER 49
2.3.0 EINLEITUNG 49
2.3.1 BESCHREIBUNG EINES MIKRO-UBBELOHDE VISKOSIMETERS 49
II
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.3.1 DURCHFUEHRUNG DER VISKOSITAETSMESSUNG AN G-PUFFER UND F-PUFFER 51
2.3.2 ERGEBNISSE 52
HERSTELLUNG DER F-AKTINPROBEN FUER DIE LICHTSTREUUNG 54
3.0 EINLEITUNG 54
3.1 NACHREINIGUNG DES AKTINS 55
3.2 HERSTELLUNG DER AKTINPROBEN FUER DIE LICHTSTREUUNG 57
ERGEBNISSE UND DISKUSSION ' 60
4.0 EINLEITUNG 60
4.1 DIE ABSOLUTEN STREUINTENSITAETEN DER VERSCHIEDENEN
AKTINKONZENTRATIONEN 61
4.1.1: DIE EINSTELLUNG DER LASERLEISTUNG - KONTROLLMESSUNGEN 61
4.1.2: DIE ABSOLUTEN STREUINTENSITAETEN FUER 0.3 MG/ML F-AKTIN 64
4.1.3 DIE ABSOLUTEN STREUINTENSITAETEN FUER 0.5 MG/ML F-AKTIN 67
4.1.4 DIE ABSOLUTEN STREUINTENSITAETEN FUER 0.7 MG/ML F-AKTBI 70
4.1.5 DIE ABSOLUTEN STREUINTENSITAETEN FUER 1.0 MG/ML F-AKDN 73
4.2 DIE INTENSITAETSKORRELATIONSFUNKTIONEN VON VERSCHIEDENEN
AKTINKONZENTRATIONEN 76
4.2.1 DIE INTENSITAETSKORRELATIONSFUNKTIONEN FUER 0.3 MG/ML F-AKTIN 76
4.2.2 DIE INTENSITAETSKORRELATIONSFUNKTIONEN FUER 0.5 MG/ML F-AKTIN 77
4.2.3 DIE INTENSITAETSKORRELATIONSFUNKTIONEN FUER 0.7 MG/ML F-AKTIN 78
4.2.4 DIE INTENSITAETSKORRELATIONSFUNKTIONEN FUER 1.0 MG/ML F-AKTIN 79
4.2.5 VERGLEICH DER NORMIERTEN INTENSITAETSKORRELATIONSFUNKTIONEN
UNTERSCHIEDLICHER F-
AKTINKONZENTRATIONEN BEI FESTEM STREUWINKEL 80
4.2.6 DIREKTER VERGLEICH VON ABSOLUTER STREUINTENSITAET UND DAZUGEHOERIGER
INTENSITAETSKORRELATIONSFUNKTION 81
4.3 DISKUSSION DER GEMESSENEN KORRELATIONSFUNKTIONEN 83
4.3.1 ANPASSUNG VON MODELLEN AN DIE EXPERIMENTELLEN DATEN 83
4.3.2 UEBERPRUEFUNG DES T
(3/4 - GESETZES FUER F-AKTIN 86
4.3.3 SCHNITTPUNKT DER ANPASSUNGSFUNKTIONEN MIT DER ORDINATE 87
4.3.4 DIE BERECHNUNG DER PERSISTENZLAENGEN FUER F-AKTIN 88
4.3.4 BESTIMMUNG DER UEBERGANGSPUNKTE VOM EXPONENTIELLEN ZERFALL ZUM
LOGARITHMISCHEN
ZERFALL DER INTENSITAETSKORRELATIONSFUNKTIONEN VON F-AKTIN 91
4.3.5 INTERPRETATION DES STATISCHEN STRUKTURFAKTORS 97
4.4 ABSCHLIESSENDE BETRACHTUNGEN 101
A1: GOLDLABELING VON F-AKTIN 103
A 1.0 EINLEITUNG 103
A 1.1 MATERIAL UND METHODEN 104
III
104
A 1.1.1 GERAETE:
A 1.1.2 REAGENZIEN UND STANDARDS: 105
A 1.1.3 PUFFER UND ANDERE LOESUNGEN: 106
A 1.1.4 V ERBRAUCHSMATERIAL: 107
A 1.1.5 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (YYSDS-PAGE"): 107
A 1.1.6 TRENNGELE KONSTANTER POLYACRYLAMID-KONZENTRADON: 108
A 1.1.8 ANFAERBUNG DES PROTEINS: ' 108
A 1.1.7.1 ANFAERBUNG MIT COOMASSIE-BLAU: 108
A 1.1.7.2 SILBERFAERBUNG: 109
A 1.1.8 TROCKNEN VON PROTEINGELEN: 110
A 1.2 MARKIERUNG VON KANINCHEN F-AKTIN MIT MONO-SULFO-NHS-NANOGOLD 111
A 1.3 BESTIMMUNG DES ANTEILS AN MARKIERTEM G-AKTIN IN DEN FRAKTIONEN 117
DER SUPERDEX 75 GELFILTRATION 117
A 1.4 ERGEBNISSE 119
A 2: ANPASSUNGSERGEBNISSE 123
LITERATURVERZEICHNIS 131
IV |
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