Funktionelle Analyse von Fettsäurebindungsproteinen in Zellkulturmodellen:
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| Sprache: | German |
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2001
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1
1
ABKUERZUNGEN
.
3
2
ZUSAMMENFASSUNG
.
4
3
EINLEITUNG.
.
7
3.1
FFETISAUREHINDNNGSPRNTEINE
3.2
PEROXISOMEN
PROLIFERATOR
AKTIVIERTE
REZEPTOREN
(PPARS)
.YY.YY.YYYY.YY.YY.YY.YY.YY.YY.YY.8
33
FABPS
IN
DER
PPAR-VERMITTELTEN
SIGNALTRANSDUKTION
.YY.YY.YYYY.YY.YY.YY.YY.YY.10
34
GENE
DES
LIPIDSTOFFWECHSELS
IN
DER
SURFACTANT-SYNTHESEYY.YYYYYYYY.YY.YYYY.YYYYYYYY.YY.YY.YYYY13
33
REGULIERUNG
DER
GENE
FUER
E
UND
H-FABP
IN
MYOGENEN
CJCN-ZELLEN
.18
4
EXPERIMENTELLER
TEIL
.
22
4.1
CREROTE
UND
^MATERIALIEN
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY*YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY*YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY22
42
ALLGEMEINE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN.
.24
4.2.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
.
24
4.2.2
ISOLIERUNG
DER
PLASMID-DNA
.
25
4.2.3
REVERSE
TRANSKRIPTASE
(RT)
ERSTSTRANG-SYNTHESE
.
25
4.2.4
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
26
4.2.5
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
27
4.2.6
AUFREINIGUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
28
4.2.7
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
28
4.2.8
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E.
COLI
ZELLEN
.
28
4.2.9
DNA-VERDAU
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
29
4.2.10
SDS-POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
.
29
4.2.11
WESTERN
BLOT
ANALYSEN
.
29
43
BLOT
'TECHNIKEN
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY30
4.3.1
PUFFER
.YY
.
30
4.3.2
DARSTELLUNG
NICHTRADIOAKTIVER
RNA-SONDEN
.
31
4.3.3
DOT
BLOT
TRANSFER
.
31
4.3.4
SLOT
BLOT
TRANSFER
.
32
4.3.5
DENATURIERENDE
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
UND
KAPILLARTRANSFER
.
32
4.3.6
MEMBRANFAERBUNG
MIT
METHYLENBLAU
.
32
4.3.7
HYBRIDISIERUNG
MIT
RNA-SONDEN
.
33
4.3.8
DETEKTION
DER
DIG-MARKIERTEN
SONDEN
.
33
4.3.9
REHYBRIDISIERUNG/ZWEITHYBRIDISIERUNG
.
34
44
'TAQ^MAN
ECHTZEIT
(QUANTITATIVE
P(Z^T*** ************34
44.1
GENERIERUNG
VON
TO^AFRWI-PRIMERPAAREN
.
35
2
4.4.2
TAQMAN
SYBR-GREEN
PCR-PROTOKOLL
.
36
4.4.3
AUSWERTUNG
NACH
DER
VERGLEICHENDEN
CI-METHODE
.
38
43
DAS
MATCHMAKER
MAMMALIAN
TWO-HYBRID
SYSTEM
41
4.6
ZELLBIOLOGISCHE
ARBEITSMETHODEN
YYYYYYYYYYYYYY
YYYYYYYYYYYY
YYYYYYYY
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
42
4.6.1
ALLGEMEINE
ARBEITSMETHODEN
.
42
4.6.2
LOESUNGEN
UND
MEDIEN
.
42
4.6.3
MEDIENWECHSEL
UND
PASSAGE
ADHAERENTER
ZELLEN
.
44
4.6.4
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
.
44
4.6.5
TRANSFEKTION
MIT
FUGENEOE
.
44
4.6.6
HISTOCHEMISCHE
SS-GALAKTOSIDASE
FAERBUNG
.
YY
.
45
5
ERGEBNISSE
.
46
5.1
FABP-PPAR
INTERAKTIONEN
YYYYYY.YYYYYYYYYYYYYY.YYYYYYYY.YYYYYYYYYYYYYYYY.YY.YYYY.YY.YYYYYY.YYYY.YYYYYYYYYY46
5.1.1
SPEZIFITAET
DER
INTERAKTION
VON
FABP-TYPEN
MIT
PPAR-SUBTYPEN
.
46
5.1.2
LIGANDABHAENGIGKEIT
DER
FABP-PPAR
INTERAKTIONEN
.
50
5.2
EXPRESSION
VON
GENEN
DES
LIPIDSTOFFWECHSELS
IN
KULTUREN
AUS
IMMORTALISIERTEN
LUNGENZELLEN
.
.
-------
.
-
.
-
YY53
5.2.1
EXPRESSION
VON
E
UND
H-FABP
IN
MLE15
UND
MLG-ZELLKULTUREN
.
53
5.2.2
REGULIERUNG
DER
ZIELGENE
.
54
53
PROMOTORANALYSE
IM
DIFFERENZIERENDEN
MUSKELZELLKULTURMODELL
YYYYYYYYYYYYYY**YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY*YY65
5.3.1
THEORETISCHE
UEBERLEGUNGEN
ZUM
PROTEIN-BASIERTEN
ASSAY
UND
PROBLEMLOESUNGEN
.
65
5.3.2
ANALYSE
POTENTIELLER
PPRES
IN
DEN
PROMOTOREN
VON
FABPE
UND
FABPH
.
72
5.3.3
REGULIERUNG
DER
AKTIVITAET
DER
FABPE
UND
FAIP/I-PROMOTORKONSTRUKTE
WAEHREND
DER
MYOGENEN
DIFFERENZIERUNG
.
75
6
DISKUSSION
.
79
6.1
INTERAKTION
DER
FABP-TYPEN
MIT
PPAR-SUBTYPEN
.79
64
REGULIERUNG
DER
GENE
DES
LIPIDSTOFFWECHSELS
IN
IMMORTALISIERTEN
ZELLKULTUREN
AUS
LUNGE.YY.YYYYYYYYYYYYYYYYYY.YYYYYYYY.YY.YYYYYYYYYY.YYYY.YYYYYY.YY.YYYYYYYY.YYYY.YYYY.YY.YY.YY.YY.YY.YYYYYYYYYYYY86
63
REGULIERUNG
DER
E
UND
H-FABP
GENE
IN
DIFFERENZIERENDEN
C
2
CI2-ZELLEN.YY
_
YY.91
7
LITERATUR
.
95 |
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