Genexpression und Genamplifikation des c-myc Protoonkogens im Harnblasenkarzinom:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
II
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS HAMBLASENKARZINOM 1
1.2 PROTOONKOGENE UND TUMORSUPPRESSORGENE 5
1.3 MOLEKULARE VERAENDERUNGEN IM HAMBLASENKARZINOM 6
1.4 REGULATION UND FUNKTION DES
C-MYC GENS 9
2 FRAGESTELLUNGEN 15
3 MATERIAL UND METHODEN 17
3.1 GEWEBEPROBEN UND MATERIAL 17
3.1.1 GEWEBEPROBEN UND ZELLINIEN 17
3.1.2 E.COLI-STAEMME 19
3.1.3 KULTURMEDIEN 19
3.1.4 PLASMIDE 20
3.1.5 OLIGONUKLEOTIDPRIMER 20
3.1.6 CHEMIKALIEN UND ENZYME 21
3.1.7 MATERIALIEN UND GERAETE 22
3.2 METHODEN 23
3.2.1 RNA-ISOLIERUNG AUS ZELLINIEN 23
3.2.2 RNA-ISOLIERUNG AUS GEWEBE 23
3.2.3 DNA-ISOLIERUNG AUS ZELLINIEN 23
3.2.4 DNA-ISOLIERUNG AUS GEWEBE 24
3.2.5 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA 24
3.2.6 TRANSFORMATION CA
2+-KOMPETENTER E. COLI-ZELLEN 25
3.2.7 QUANTITAETS- UND QUALITAETSKONTROLLE VON RNA 25
3.2.8 QUANTITAETS-UND QUALITAETSKONTROLLE VON DNA 26
3.2.9
VERDAU VON DNA
DURCH RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
26
3.2.10 GELELEKROPHORETISCHE TRENNUNG RESTRIKTIONSENZYM-VERDAUTER 26
DNA
3.2.11 ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN DURCH 27
ELEKTROELUTION
3.2.12 SOUTHERN BLOTTING 27
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/963651463
INHALTSVERZEICHNIS
III
27
27
28
28
28
3.2.13
PRAEPARATION DER C-MYC HYBRIDISIERUNGSSONDE
3.2.14
HYBRIDISIERUNG VON SOUTHERN BLOTS
3.2.15 AUTORADIOGRAPHIE
3.2.16 KOMPETITIVE POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR)
3.2.17 REVERSE-TRANSKRIPTASE-REAKTION(RT)
3.2.18 QUANTITATIVE POLYMERASE-KETTEN-REAKTION MIT INTERNEM STANDARD 29
3.2.19 LUMINOGRAPHISCHE DETEKTION VON DIGOXIGENIN-11 -DUTP
YY
3.2.20 TRANSFEKTION HUMANER ZELLINIEN
3.2.21 ZELLYSE UND BESTIMMUNG DER LUZIFERASE-ENZYMAKTIVITAET
3.2.22 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION
3 2.23 STATISTISCHE AUSWERTUNG
30
30
31
31
31
33
4
ERGEBNISSE
4.1 ETABLIERUNG UND VALIDIERUNG EINER KOMPETITIVEN QUANTITATIVEN PCR
4.1.1 PRINZIP
DER
KOMPETITIVEN QUANTITATIVEN PCR
4.1.2 KONSTRUKTION EINES EXOGENEN STANDARDS
4 1.3 AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE
4.2
ETABLIERUNG UND VALIDIERUNG EINER QUANTITATIVEN DIGOXIGENIN RT-PCR
4.2.1
PRINZIP DER
QUANTITATIVEN DIGOXIGENIN RT-PCR
4 2.2 AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE
' IDES
4.3
UNTERSUCHUNG DER GENKOPIENZAHL UND MRNA EXPRESSION.
C
-MYC GENS IN BLASENTUMORGEWEBE
4.3.1
UNTERSUCHUNG DER C-MYC GENKOPIENZAHL
4.3.2 UNTERSUCHUNG DER C
-MYC MRNA EXPRESSION
4.3.3 VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNG DER GENKOPIENZAHL UND DER
MRNA EXPRESSION
4.4 UNTERSUCHUNG DES C
-MYC GENS IN BLASENTUMORZELLINIEN UND
BLASENTUMORGEWEBE DURCH SOUTHEM-BLOT
ANALYSE
4.5 UNTERSUCHUNG DES PROMOTORWECHSELS IN BLASENTUMORZELLINIEN
DURCH
TRANSIENTE TRANSFEKTIONSEXPERIMENTE
4
5 1 TRANSFEKTION MIT BLASENTUMORZELLINIEN VMCUBL UNDHT1376
4.5.2 TRANSFEKTION MIT UNTERSCHIEDLICHER PLASMIDMENGE
4.5.3
TRANSFEKTION
MIT UNTERSCHIEDLICHER ZELLZAHL
33
33
35
37
38
38
39
40
42
44
47
48
50
51
52
53
INHALTSVERZEICHNIS
W
5 DISKUSSION 55
5.1 UEBEREXPRESSION VON C
-MYC MRNA 5 5
5.2 C
-MYC AMPLIFIKATION 59
5.3 PROMOTORWECHSEL ZWISCHEN DEN C
-MYC PROMOTOREN P1 UND P2 62
5.4 REGULATION DES C
-MYC GENS BEI MALIGNEN ERKRANKUNGEN 64
6 ZUSAMMENFASSUNG 67
7 LITERATUR 69
8 ABKUERZUNGEN 95
9 DANKSAGUNG 97 |
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