Autoantikörper gegen die 65K-Glutamatdecarboxylase in der Diagnostik des Typ-1-Diabetes: ein Vergleich unterschiedlicher Nachweismethoden
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2001
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1
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG.1
1.1 DIABETES MELLITUS.1
1.1.1 DEFINITION UND KLASSIFIKATION DES DIABETES MELLITUS.1
1.1.2 TYP 1-DIABETES.3
1.1.2.1 EPIDEMIOLOGIE. 3
1.1.2.2 AETIOLOGIE UND PATHOGENESE.3
1.1.2.2.1 GENETIK UND UMWELTEINFLUESSE.4
1.1.2.2.2 PATHOGENESE - MOLEKULARE MECHANISMEN DER DIABETESENTSTEHUNG.5
1.1.2.2.3 ZELLULAERE IMMUNANTWORT.7
1.1.2.2.4 HUMORALE IMMUNANTWORT - AUTOANTIKOERPER.8
1.1.2.3 KLINIK - SYMPTOME UND BEFUNDE.10
1.1.2.4 DIAGNOSTIK.13
1.1.2.5 THERAPIE.14
1.1.3 TYP 2-DIABETES.15
1.1.4 FRAGESTELLUNG DER VORLIEGENDEN ARBEIT.16
2 UNTERSUCHUNGSGUT, MATERIAL UND METHODEN.19
2.1 UNTERSUCHUNGSGUT FIIR ALLE DIAGNOSTISCHEN ASSAYS.19
2.1.1 AUSWAHLPRINZIPIEN.19
2.1.2 KONTROLLE.19
2.2 ASSAYA: ELISA.20
2.2.1 KOLLEKTIV.,,.20
2.2.2 MATERIAL.20
2.2.3 METHODE.22
2.2.3.1 TESTPRINZIP.22
2
.
23.2 PROBENVORBEREITUNG.22
2.2.3.3 TESTDURCHFUHRUNG.23
2.2.3.4 AUSWERTUNG.24
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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11
2.3 ASSAY B: DOPPEL-ANTIKOERPER-RADIOIMMUNOASSAY MIT KOMPETITIONSPRINZIP
25
2.3.1 KOLLEKTIV.25
2.3.2 MATERIAL.25
2.3.3 METHODE.25
2.3.3.1 TESTPRINZIP.25
2.3.3.2 TESTDURCHFIIHRUNG.27
2.3.3.3 AUSWERTUNG.27
2.4 ASSAY C: RADIOIMMUNOASSAY MIT
12SJOD-MARKIERTER REKOMBINANTER GAD. 28
2.4.1 KOLLEKTIV.28
2.4.2 MATERIAL.28
2.4.3 METHODE.29
2.4.3.1 TESTPRINZIP.29
2.4.3.2 TESTDURCHFIIHRUNG.29
2.4.3.3 AUSWERTUNG.30
2.5 ASSAY D: IN-VITRO-TRANSLATIONSASSAY.30
2.5.1 KOLLEKTIV.30
2.5.2 MATERIAL.31
2.5.3 METHODE.33
2.5.3.1 TESTPRINZIP.3S
2.5.32 HERSTELLUNG EINER REKOMBINANTEN HUMANEN
35S-GAD6S DURCH GEKOPPELTE
IN VITRO DNA-TRANSKRIPTION/-TRANSLATION MIT HILFE DES TNT
YY
SP6 COUPLED
RETICULOCYTE LYSATE SYSTEM VON PROMEGA.34
2.5.3.3 KALKULATION DES BEDARFS AN RADIOAKTIVEM TRANSLATIONSPRODUKT.35
2.5.3.4 VORBEREITUNG DER MULTIWELL FILTERPLATTEN.36
2.5.3.5 TESTDURCHFIIHRUNG.36
2.5.3.6 AUSWERTUNG.37
2.6 ASSAY E: ICA-BESTIMMUNG MITTELS INDIREKTER IMMUNFLUORESZENZ.38
2.6.1 KOLLEKTIV.38
2.6.2 METHODE.38
2.6.2.1 TESTPRINZIP.38
UL
2.7 STATISTISCHE VERFAHREN. 38
2.7.1 ALLGEMEINES.38
2.7.2 MITTELWERT, MEDIAN UND STANDARDABWEICHUNG.39
2.7.3 BEDINGTE WAHRSCHEINLICHKEITEN.39
2.7.4 ROC-PLOT.40
2.7.5 KORRELATIONEN.40
3 RESULTATE_41
3.1 RESULTATE DER EINZELNEN ASSAYS.41
3.1 1 ASSAY A (ELISA).41
3.12 ASSAY B (DOPPEL-AK-RIA MIT KOMPETITIONSPRAIZIP).43
3.1.3 ASSAY C (RIA MIT
125 JOD-MARKIERTER REKOMBINANTER GAD).45
3.1.4 ASSAY D (IN-VITRO-TRANSLATIONSASSAY).47
3.1.5 ASSAY E.48
3.2 VERGLEICH DER ASSAYS.49
3.2.1 VERGLEICH ZWISCHEN ICA- UND GADA-POSITIVITAET.49
3.2.2 ZUSAMMENFASSUNG DER BEDINGTEN WAHRSCHEINLICHKEITEN.50
3.2.3 ROC-PLOT-ANALYSE.51
3.2.4 KORRELATIONEN ZWISCHEN DEN ASSAYS.52
4 DISKUSSION.57
4.1 SCREENING AUF GADA ZUR DIAGNOSTIK DES TYP 1-DIABETES.- 57
4.1.1 BEURTEILUNG DER GETESTETEN ASSAYS IN HINBLICK AUF EINE EIGNUNG ALS
SCREENING-METHODE.57
4.1.2 KORRELATION DER MESSDATEN.58
4.1.3 VERGLEICH MIT ERGEBNISSEN AUS DER LITERATUR.58
4.1.4 GADA-BESTIMMUNG ZUR DIAGNOSESICHERUNG BEI SPAETMANIFESTEM TYP 1-
DIABETES .60
4.1.5 REICHT DIE BESTIMMUNG VON GADA ZUR ABSCHAETZUNG DES ERKRANKUNGS
RISIKOS AN TYP 1-DIABETES AUS? - VERBESSERUNG DER AUSSAGEKRAFT DURCH
KOMBINIERTES
SCREENING AUF MEHRERE ANTIKOERPER.61
IV
4.2 AUSBLICKE: INTERVENTION UND PRAEVENTION DES TYP 1-DIABETES DURCH
MODULATION DER
IMMUNANTWORT-.-.-.-63
4.2.1 PRAE- UND INTERVENTION MITTELS CHEMISCHER SUBSTANZEN.63
4.2.2 DIABETESPRAEVENTION DURCH VERZICHT AUF KUHMILCH IN DER
SAEUGLINGSEMAEHRUNG 64
4.2.3 INSULINGABE ALS PRAEVENTIVE MASSNAHME.64
4.2.4 IMMUNMODULATION.65
5 SCHLUSSFOLGERUNG. 67
6 ZUSAMMENFASSUNG.69
7 LITERATURVERZEICHNIS.71 |
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