Einfluß des Knochenmorphogenesefaktors-2 (BMP-2) auf die Genexpression der Mammakarzinom-Zelline MCF-7:
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2001
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| Beschreibung: | Jena, Univ., Diss., 2001 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 3
1.1 KNOCHENMORPHOGENESEFAKTOREN 4
1.1.1 BIOLOGISCHE BEDEUTUNG DER KNOCHENMORPHOGENESEFAKTOREN 4
1.1.2 STRUKTUR DER KNOCHENMORPHOGENESEFAKTOREN 6
1.1.3 SIGNALTRANSDUKTION DER KNOCHENMORPHOGENESEFAKTOREN 6
1.2 IDS - INHIBITOREN DER DIFFERENZIERUNG 9
1.3 ZIEL DER ARBEIT 11
2 MATERIAL UND METHODEN 13
2.1 ZELLKULTUR 13
2.2 MAMMAKARZINOM-GEWEBEPROBEN 13
2.3 ISOLIERUNG DER MRNA 13
2.3.1 HERSTELLUNG DER OLIGO-(DT)
3
O MARKIERTEN MAGNETBEADS 13
2.3.2 ZELLYSE 14
2.3.3 BESEITIGUNG VON DNA-KONTAMINATIONEN UND AUFREINIGUNG DER MRNA 14
2.4 CDNA-SYNTHESE 15
2.5 DER HUMAN ATLAS
YY
ARRAY FILTER 15
2.5.1 HYBRIDISIERUNG DER CDNA PROBEN MIT DEM HUMAN ATLAS
YY
ARRAY FILTER 17
2.5.2 WASCHEN DES HUMAN ATLAS
YY
ARRAY FILTERS 17
2.6 REVERSE TRANSKRIPTION UND PCR ANALYSEN 17
2.6.1 RNA-ISOLIERUNG UND REVERSE TRANSKRIPTION YY 17
2.6.2 PCR-PROTOKOLLE UND EINGESETZTE PRIMER 18
2.7 RIBONUKLEASE PROTECTION ASSAY 19
2.7.1 SYNTHESE DER RADIOAKTIV MARKIERTEN SONDE 20
2.7.2 RNA PRAEPARATION UND HYBRIDISIERUNG VON SONDE UND ZIEL-RNA 21
2.7.3 EINZELSTRANGSPEZIFISCHER RNASE-VERDAU 21
2.7.4 GELELEKTROPHORESE 22
2.8 ZELLZYKLUS-ANALYSEN 22
2.8.1 ZELLSUSPENSION 23
2.8.2 ISOLIERUNG UND MARKIERUNG DER ZELLKERNE 23
2.9 BIOAKTIVITAETSBESTIMMUNG VON RHBMP-2 24
2.10 CHEMOTAKTISCHE WIRKUNG VON RHBMP-2 24
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.11 INVASIONSVERSUCHE AM MODELL DER BOYDEN CHAMBER 25
2.11.1 VORBEREITUNG DER BOYDEN CHAMBER 26
2.11.2 VORBEREITUNG DER MCF-7 ZELLEN 26
2.11.3 AUSWERTUNG DER MEMBRANEN 27
2.12 STATISTISCHE AUSWERTUNG 27
3 ERGEBNISSE 28
3.1 EXPRESSION VON BMP-2 28
3.2 BMP-2 ABHAENGIGE GENEXPRESSION 32
3.2.1 BMP-2 REGULIERTE GENE 34
3.3 EXPRESSION VON ID-1, ID-2, ID-3 UND SKY IST NACH BMP-2 INKUBATION
ERHOEHT 37
3.3.1 SEMIQUANTITATIVE PCR ZUR BESTIMMUNG DER EXPRESSION VON ID-1, ID-2,
ID-3
UND SKY 39
3.4 ZELLBIOLOGISCHE EFFEKTE VON BMP-2 42
3.4.1 BMP-2 HAELT DEN ZELLZYKLUS AUFRECHT 42
3.4.2 BMP-2 UND APOPTOSE 45
3.4.3 BMP-2 WIRKT CHEMOTAKTISCH AUF MCF-7 49
3.4.4 BMP-2 ERHOEHT DIE INVASIVITAET VON MCF-7 50
4 DISKUSSION 56
5 ZUSAMMENFASSUNG 69
6 LITERATURVERZEICHNIS 71
ANHANG
2 |
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