Struktur- und Funktionsanalyse am humanen ADP-ATP-Carrier synthetisiert in S. cerevisiae:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
12
2.1.
MATERIAL
12
2.1.1.
BAKTERIEN-UND
HEFESTAEMME
12
2.1.2.
KULTURMEDIEN
13
2.1.3.
PLASMIDE
14
2.1.4.
ENZYME,
OLIGONUKLEOTIDE,
DNA-REAKTIONSSYSTEME,
CHEMIKALIEN
14
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
2.1.5.
GERAETE
15
2.2.
METHODEN
17
2.2.1.
PCR
17
2.2.2.
REINIGUNG
DER
PCR-PRODUKTE
19
2.2.3.
RESTRIKTION
DER
PCR-PRODUKTE
UND
DER
PLASMIDE
20
2.2.4.
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
20
2.2.5.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.
CO//-ZELLEN
21
2.2.6.
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E.
CO/Z-ZELLEN
22
2.2.7.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID
DNA
AUS
ESCHERICHIA
COLI
22
2.2.8.
SEQUENZIERUNG
DER
DNA
IM
EIGENEN
LABOR
24
2.2.9.
AUSWAERTIGE
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
24
2.2.10.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
S.
CEREV/S/AE-HEFEZELLEN
UND
25
TRANSFORMATION
2.2.11.
ISOLATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
25
2.2.12.
ISOLIERUNG
DES
GESAMTPROTEINS
AUS
S.
CEREVISIAE
27
2.2.13.
PRAEPARATION
VON
MITOCHONDRIEN
AUS
S.
CEREVISIAE
28
2.2.14.
PRAEPARATION
VON
MITOCHONDRIEN
DES
MENSCHLICHEN
HERZENS
29
UND
DES
RINDERHERZENS
2.2.15.
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTES
31
2.2.16.
MESSUNG
DER
ATMUNG
AN
MITOCHONDRIEN
32
2.2.17.
BESTIMMUNG
DES
CYTOCHROMGEHALTES
VON
MITOCHONDRIEN
32
2.2.18.
BINDUNG
VON
[
3
H]CAT
AN
DEN
CARRIER
33
2.2.19.
TRENNUNG
DER
PROTEINE
AUF
SDS-POLYACRYLAMIDGELEN
UND
34
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
2.2.20.
HERSTELLUNG
POLYKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
AAC
AUS
RINDERHERZEN
35
2.2.21.
REKONSTITUTION
DES
HUMANEN
ADP/ATP-CARRIERS
IN
37
PHOSPHOLIPIDVESIKELN
2.2.22.
MESSUNG
DER
ADP/ATP-AUSTAUSCHRATEN
AN
IN
VESIKELN
39
REKONSTITUIERTEM
HAAC
2.2.23.
BINDUNG
VON
ADENINNUKLEOTIDDERIVATEN
AN
DEN
HAAC
UNTER
40
ENTSTEHUNG
VON
FLUORESZENZ
2.2.24.
GERICHTETE
MUTAGENESE
AM
HAAC
40
2.2.25.
ANAEROB
FERMENTATIVES
WACHSTUM
VON
HEFESTAEMMEN
41
3.
ERGEBNISSE
42
3.1.
DIE
KLONIERUNG
DER
ISOFORMEN
1
UND
2
DES
HUMANEN
43
ADP/ATP-CARRIERS
3.1.1.
DIE
WAHL
DER
PLASMIDE
43
3.1.2.
DER
EINBAU
DES
HAAC-GENS
IN
DIE
JEWEILIGEN
PLASMIDE
44
3.1.3.
MUTATION
DER
BASE
IN
POSITION
-3
ZUR
VERBESSERUNG
DER
48
GENEXPRESSION
3.2.
DIE
TRANSFORMATION
DER
PLASMIDE
IN
S.CEREVISIAE
49
3.3.
IDENTIFIKATION
HAAC
EXPRIMIERENDER
HEFEZELLEN
50
3.3.1.
NACHWEIS
DES
HAAC
UEBER
SEINE
FUNKTIONALITAET
50
3.3.1.1.
NACHWEIS
UEBER
DAS
WACHSTUM
DER
TRANSFORMANTEN
50
3.3.1.2.
VERGLEICH
DER
FUNKTIONALITAET
ISOLIERTER
MITOCHONDRIEN
UEBER
IHRE
57
ATMUNG
3.3.1.3.
VERGLEICH
DER
FUNKTIONALITAET
ISOLIERTER
MITOCHONDRIEN
UEBER
IHREN
60
CYTOCHROMGEHALT
3.3.1.4.
NACHWEIS
UEBER
DIE
BINDUNG
DES
SPEZIFISCHEN
INHIBITORS
61
CARBOXYATRACTYLAT
CAT
3.3.2.
IDENTIFIKATION
MITTELS
IMMUNOLOGISCHEM
NACHWEIS
63
3.4.
DIE
BINDUNG
DER
FLUORESZIERENDEN
DAN-ADENINNUKLEOTIDE
AN
DEN
66
HAAC
3.5.
ADP - ATP
AUSTAUSCHGESCHWINDIGKEITEN
DIVERSER
AAC
69
3.6.
BESTIMMUNG
DES
ANTEILS
DES
HAAC
AM
GESAMTPROTEIN
DER
71
HEFEMITOCHONDRIEN
3.7.
MUTATIONEN
AM
HAAC-1
72
4.
DISKUSSION
81
5.
ZUSAMMENFASSUNG
90
6.
LITERATURVERZEICHNIS
92
ABKUERZUNGEN
102
ANHANG
104 |
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