Die Bedeutung der Zellproliferation und des Redoxstatus für die Regulation der P-Glykoprotein-Expression in multizellulären DU-145-Prostata-Tumor-Sphäroiden:
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INHALT
I
I INHALT
V ABKUERZUNGEN
1. EINLEITUNG
_1
LI. PROLIFERATION VON TUMORZELLEN
1
1. 2. ZELLULAERE HETEROGENITAET IM TUMOR
2
1. 3. YYVIELFACH TRANSPORTER" UND RESISTENZ VON TUMORZELLEN
3
1.3. 1.P- GLYKOPROTEIN
4
1.3.2. ANDERE MULTI- DRUG- TRANSPORTER
8
1. 4. RESISTENZ IM DREIDIMENSIONALEN GEWEBE
9
1. 5. PROLIFERATION VON TUMORZELLEN UND RESISTENZ
10
1. 6. DAS MODELLSVSTEM DER MULTIZELLULAEREN SPHAEROIDE
11
1. 7. PRODUKTION REAKTIVER SAUERSTOFF INTERMEDIATE IN TUMORZELLEN
14
1. 8. ENTSTEHUNG VON ROI
15
1.9. ENTSTEHUNGSORTE VON ROI IN DER ZELLE
15
1.10. ZELLULAERER SCHUTZ VOR ROI
16
1. 11. ANGRIFTSOITE VON ROI IN DER ZELLE
17
1. 12. ZIELSETZUNG DER ARBEIT
18
2, MATERIAL & METHODEN
_19
2. 1. PUFFER. LOESUNGEN UND ZELLKULTURMEDIEN
19
2. 2. ZELLKULTUR
20
2, 2. 1. ZELLINIEN
20
2. 2. 2. ADHAESIVE KULTUR DER ZELLEN ALS MONOLAVER
20
2. 2. 3. NICHT- ADHAESIVE KULTUR DER ZELLEN ALS MULTIZELLULAERE
TUMORSPHAEROIDE
21
2. 2. 4. ENZYMATISCHE DISSOZIATION MIT TRYPSIN/ EDTA 21
2. 3. ZELLZAHLBESTIMMUNG
21
2. 4. MDR- REVERTIERENDE SUBSTANZEN
22
2. 5. ROI- GENERIERENDE SUBSTANZEN
23
2. 6. RADIKAL FAENGER
24
2. 7. ZELLZYKLUS INHIBITOREN
24
2. 8. STIMULATION UND INHIBITION DES EGF- R
26
2. 9. STIMULATOREN UND INHIBITOREN DER PKA
27
2. 10, MESSUNG VON ZCLLPROLIFERATION UND WACHSTUM
28
2. 10, L WACHSTIIMSVERSUCHE
28
2. 10, 2. AUSWAEHSVERSUCHC
29
2, 10, 3. DURCHHUSSZYTOMETRIE ZUR ZCLLZYKLUSANALYSE
29
2. 11, KONFOKALE LASCIRASTERNIIKROSKOPIE
31
2. 12. ANTIKOERNEIFAEIBUNGEN
34
2. 12, 1. PRIMAERE ANTIKOERPER
35
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/963430033
INHALT
II
2. 12. 2. SEKUNDAERE ANTIKOERPER
37
2. 13. WESTERN BLOTTING
38
2. 13. 1. PROTEINBESTIMMUNG
39
2. 13. 2.
GELELEKTROPHORE.SE UNTER DENATURIERENDEN BEDINGUNGEN (SPS- PAGE) 40
2. 13. 3. PROTEIN TRANSFER (BLOTTING) 41
2. 13. 4. ANTIKOERPERFAERBUNG
42
2. 13. 5. VERSTAERKTE CHEMILUMINESZENZ (ENHANCED CHEMILUMINESCENCE)
43
2. 14. ISOLIERUNG VON GESAMT- RNA AUS DU- 145 TUMOR SPHAEROIDEN 44
2. 14. 1. QUANTIFIZIERUNG VON RNA DURCH UV SPEKTROSKOPIE
45
2. 14. 2. DENATURIERENDE RNA- GELELEKTROPHORESE
45
2. 15. SEMI- QUANTITATIVE REVERSE TRANSKRIPTASE POLYMERASE
KETTENREAKTION (RT- PCR)
46
2. 15. 1. CDNA-ERSTSTRANGSVNTHESE 46
2. 15. 2. PCR
47
2. 16. PHYSIOLOGISCHE MESSUNGEN
48
2. 16. 1. MESSUNG DER ENDOGENEN ROI- PRODUKTION
48
2. 16. 2. EFFLUXMESSUNGEN
49
2. 17. LETALFAERBUNG
50
2. 18. NEKROSE FAERBUNG
50
2. 19. APOPTOSE NACHWEIS
51
2. 20. STATISTIK
51
3. ERGEBNISSE
_
52
3. 1. VITALITAETSMUSTER VON DU- 145 SPHAEROIDEN
52
3. 1. L DAS WACHSTUMSVERHALTEN VON DU- 145 MCS IN DER SPINNER FLASCHEN
KULTUR
52
3. 1.2. DIE EXPRESSION DES PROLIFERATIONSMARKERS KI- 67 IN DU- 145 MCS
54
3. 1.3. DIE EXPRESSION DES GI- PHASE MARKERS P27KIPL IN DU- 145 MCS 54
3. L 4. DIE VERTEILUNG DER ZELLEN MULTIZELLULAERER DU- 145 TUMORSPHAEROIDE
AUF DIE EINZELNEN
PHASEN DES ZELLZVKLUS 56
3. 1.
5.
DIE ENTSTEHUNG ZENTRALER NEKROTISCHER AREALE IN DU- 145 SPHAEROIDEN 59
3. 2. DIE ENDOGENE PRODUKTION VON ROI IN DU- 145 SPHAEROIDEN 61
3. 3. DIE EXPRESSION VON MULTI- DRUG TRANSPORTERN IN DU- 145 MCS
63
3. 3. 1. DIE EXPRESSION VON P- GP IN DU- 145 MCS
63
3. 3. 2. DIE EXPRESSION VON MRP IN DU- 145 MCS
64
3. 4. DIE REGULATION VON P- GP IN GROSSEN, RESISTENTEN DU- 145 MCS
66
3. 4. L DER EINFLUSS VON MDR- REVERTIERENDEN SUBSTANZEN AUF DEN P- GP
GEHALT IN GROSSEN,
RESISTENTEN DU- 145 MCS 66
3. 4. 2. FUNKTIONELLER NACHWEIS VON P- GP IN GROSSEN, RESISTENTEN DU- 145
MCS NACH DER
BEHANDLUNG MIT MDR- REVERTIERENDEN SUBSTANZEN 69
3. 4. 3. DER EINFLUSS MDR- REVERTIERENDER SUBSTANZEN AUF DIE ENDOGENE
PRODUKTIONSRATE VON
ROI IN GROSSEN, RESISTENTEN DU- 145 MCS 70
3. 4. 4. DER EINFLUSS ROI- GENERIERENDER SUBSTANZEN AUF DIE ENDOGENE
PRODUKTIONSRATE VON
ROI IN GROSSEN, RESISTENTEN DU- 145 MCS 72
3. 4. 5. DER EINFLUSS ROI- GENERIERENDER SUBSTANZEN AUF DEN P- GP GEHALT
IN GROSSEN,
RESISTENTEN DU- 145 MCS 74
3. 4.
6. FUNKTIONELLER NACHWEIS VON P- GP IN GROSSEN, RESISTENTEN DU- 145 MCS
NACH DER
BEHANDLUNG MIT ROI- GENERIERENDEN SUBSTANZEN 76
3. 4. 7. DER EINFLUSS ROI- GENERIERENDER SUBSTANZEN AUF DIE
MDR1
GENEXPRESSION IN GROSSEN,
RESISTENTEN DU- 145 MCS 77
INHALT
III
3. 5. MDR- REVERTIERENDE UND ROI- GENERIERENDE SUBSTANZEN STIMULIEREN
DAS WACHSTUM IN
GROSSEN DU- 145 MCS
78
3.
6. BEWEIS, DASS DIE VERWENDETEN KONZENTRATIONEN VON MDR- REVERTIERENDEN
UND ROI-
GENERIERENDEN SUBSTANZEN IN GROSSEN DU- 145 MCS NICHT TOXISCH WIRKEN 80
3. 7. MDR- REVERTIERENDE UND ROI- GENERIERENDE SUBSTANZEN ERHOEHEN DIE
SENSITIVITAET VON
GROSSEN DU- 145 MCS GEGENUEBER DEM ZYTOSTATIKUM DOXORUBICIN 83
3.
8. RADIKALFAENGER VERHINDERN DIE WIRKUNG MDR- REVERTIERENDER UND ROI-
GENERIERENDER
SUBSTANZEN AUF DEN P- GP GEHALT IN GROSSEN DU- 145 MCS 86
3. 9. ROI- GENERIERENDE SUBSTANZEN ERHOEHEN DEN GEHALT VON MRP IN GROSSEN,
RESISTENTEN DU-
145 MCS
89
3. 10. IST ES MOEGLICH ZELLPROLIFERATION UND REGULATION VON P- GP
VONEINANDER ZU TRENNEN ?
90
3. 10. 1. DIE WACHSTUMS INHIBITION DURCH ZELLZVKLUS INHIBITOREN IN
KLEINEN, PROLIFERATIVEN
DU- 145 MCS 90
3. 10. 2. DER EINFLUSS VON ZELLZVKLUS INHIBITOREN AUF DIE EXPRESSION
SPEZIFISCHER
ZELLZYKLUSMARKER IN KLEINEN DU- 145 MCS 91
3. 10. 3. ZELLULAERE VERTEILUNG KLEINER DU- 145 MCS AUF DIE VERSCHIEDENEN
ZELLZYKLUSPHASEN
NACH BEHANDLUNG MIT ZELLZVKLUS INHIBITOREN 94
3. 10. 4. ZELLZVKLUS INHIBITOREN HABEN KEINEN EINFLUSS AUF DIE ENDOGENE
ROI PRODUKTION IN
KLEINEN DU- 145 MCS 96
3. 10. 5. DER EINFLUSS EINER ZELLZVKLUS INHIBITION AUF DIE EXPRESSION VON
P- GP IN KLEINEN. DU-
145 MCS 97
3. 10.
6. EINE INHIBITION DES ZELLZVKLUS WIRKT NICHT TOXISCH AUF KLEINE DU- 145
MCS 97
3. 10. 7. DIE INHIBITION DES ZELLZVKLUS INDUZIERT KEINE APOPTOSE IN
KLEINEN DU- 145 MCS 99
3. 11. DER EFFEKT VON WACHSTUMSFAKTOREN AUF DIE EXPRESSION VON P- GP IN
RESISTENTEN DU-
145 MCS 101
3. 11. 1. DIE EXPRESSION DES EGF- R IN DU- 145 MCS AENDERT SICH
GROESSENABHAENGIG
102
3. 11.2. DER EINFLUSS VON STIMULATION UND INHIBITION DES EGF- R AUF DIE
EXPRESSION VON P-
GP IN GROSSEN DU- 145 MCS 102
3. 12. WELCHE KOMPONENTEN SIND AN DER REGULATION VON P- GP BETEILIGT ?
105
3. 12. 1. DIE EXPRESSION DER VERSCHIEDENEN REGULATORISCHEN PKA
UNTEREINHEITEN IN DU- 145
MCS 105
3. 12, 2. DER EINFLUSS VON PKA STIMULATOREN UND INHIBITOREN AUF DIE P- GP
EXPRESSION IN
GROSSEN DU- 145 MCS 106
3. 12. 3. DAS WACHSTUMSVERHALTEN GROSSER DU- 145 MCS UNTER DEM EINFLUSS
VON PKA
MODULATOREN BLEIBT UNVERAENDERT 108
4. DISKUSSION
110
4, 1. VITALITAETSMUSTER IN MCS
111
4. 2. DIE EXPRESSION VON MULTI- DRUG TRANSPORTERN UND IHRE REGULATION
113
4, 3. DIE INHIBITION DES ZELLZVKLUS 116
4. 4. EINFLUSS VON ZELLZVKLUS INHIBITOREN AUF DIE ENDOGENE ROI PRODUKTION
KLEINER MCS
120
4, 5, APOPTOSE 120
4.
6. DER EINFLUSS VON ZELLZVKLUS INHIBITOREN AUF DIE P- GP EXPRESSION IN
KLEINEN MCS 121
4. 7. DER EINFLUSS VON EGF 123
4.
8. DIE ROLLE DER PKA 125
4, 9. AUSBLICK
128
5. ZUSAMMENFASSUNG
_129
INHALT
IV
6. LITERATURVERZEICHNIS
_130
7. ANHANG
_144
7. 1. FIRMEN
144
1.2.
GERAETE 145
7. 3. DATEN DER DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN ANALYSE PROPIDIUM- IODID-
GEFAERBTER DNA
145
8. ERKLAERUNG
_149
9. IM RAHMEN DER VORLIEGENDEN DISSERTATION VEROEFFENTLICHTE
ARBEITEN_150
9. 1. PUBLIKATIONEN
150
9. 2. TAGUNGSBEITRAEGE
150
10. LEBENSLAUF
_151 |
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