Stabilität hoher Fluorchinolonresistenz bei Enterobakterien ohne Selektionsdruck:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2001
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| Beschreibung: | Bonn, Univ., Diss., 2001 (Nicht für den Austausch) |
| Beschreibung: | 109 Bl. Ill., graph. Darst. : 30 cm |
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ANGEFERTIGT MIT GENEHMIGUNG DER MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHEN
FAKULTAET
DER RHEINISCHEN FRIEDNCH-WILHELMS-UNIVERSITAET BONN
1. REFERENT: PROF. DR. RER. NAT. B. WIEDEMANN
2. REFERENT: PROF. DR. RER. NAT. P. HEISIG
TAG DER PROMOTION: ^ /. O FOOEA
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS 1
INHALT
1 EINLEITUNG 4
1.1 BAKTERIENFITNESS 5
1.2 TYP 1 FIMBRIEN 7
1.3 ENTEROBACTERIACEAE 9
1.4 FLUORCHINOLONE 10
1.4.1 WIRKMECHANISMUS DER FLUORCHINOLONE 11
1.4.2 DNA-SUPERSPIRALISIERUNG 12
1.4.3 CHINOLONRESISTENZ 14
1.5 ZIELSETZUNG 17
2 MATERIAL UND METHODEN 18
2.1 MATERIAL 18
2.1.1 BAKTERIENSTAEMME 18
2.1.2 EUKARYONTENZELLEN 19
2.1.3 VEKTOREN 19
2.1.4 OLIGONUKLEOTIDE 20
2.1.5 DNA-GROESSENMARKER 22
2.1.6 NAEHRMEDIEN 22
2.1.7 CHEMOTHERAPEUTIKA 22
2.1.8 CHEMIKALIEN 23
2.1.9 ENZYME 24
2.1.10 PUFFER UND LOESUNGEN 25
2.1.11 GERAETE UND MATERIAL 26
2.2 METHODEN 27
2.2.1 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN 27
2.2.2 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION 27
2.2.3 PCR DES REGULATORISCHEN BEREICHS DER TYP1 FIMBRIEN 29
2.2.4 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA 30
2.2.5 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 31
2.2.6 AUFREINIGUNG DER DNA MIT DEM QIAQUICK-PCR PURIFICATION KIT 32
2.2.7 SPEKTRALPHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON DNA 32
2.2.8 SEQUENZIERUNG VON DNA 33
2.2.9 ENZYMATISCHE MODIFIKATION VON DNA 34
2.2.10 HERSTELLUNG KOMPETENTER BAKTERIEN UND TRANSFORMATION 35
2.2.11 KONJUGATION 35
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS 2
2.2.12 IDENTIFIZIERUNG DER BAKTERIEN DURCH MIKRONAUT E 36
2.2.13 BESTIMMUNG DER MINIMALEN HEMMKONZENTRATION 37
2.2.14 AUFNAHME VON CIPROFLOXACIN IN DIE BAKTERIENZELLEN 37
2.2.15 KEIMZAHLBESTIMMUNG 39
2.2.16 BESTIMMUNG DER GENERATIONSZEIT 39
2.2.17 FITNESS-KOMPENSATIONSEXPERIMENT 40
2.2.18 DIREKTER WACHSTUMSVERGLEICH IN EINER KULTUR 40
2.2.19 MANNOSE-SENSIBLE SACCHAROMYCES CEREVISIAE AGGLUTINATION 41
2.2.20 PRAEPARATION DER SS-LAKTAMASE 41
2.2.21 BESTIMMUNG DER SPEZIFISCHEN SS-LAKTAMASE-AKTIVITAET 42
2.2.22 PROTEINBESTIMMUNG NACH LOWRY 43
2.2.23 BESTIMMUNG DES DNA-SUPERSPIRALISIERUNGSGRADS UEBER SS-LAKTAMASE-
EXPRESSION 43
2.2.24 BESTIMMUNG DES DNA-SUPERSPIRALISIERUNGSGRADS UEBER CHLOROQUINGELE.
45
2.2.25 PROTEOMANALYSE MITTELS 2D-ELEKTROPHORESE 46
2.2.25.1 PROBENVORBEREITUNG 46
2.2.25.2 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 46
2.2.25.3 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 47
2.2.25.4 COOMASSIEFAERBUNG 48
2.2.25.5 SILBERFAERBUNG 49
2.2.25.6 BILDAUSWERTUNG DER 2D-ELEKTROPHORESEGELE 49
2.2.25.7 PEPTIDE MASS FINGERPRINTING ANALYSE MIT MALDI-MS 50
3 ERGEBNISSE 51
3.1 FITNESSKOMPENSATION 51
3.1.1 BESTIMMUNG DER GENERATIONSZEIT AUSGEWAEHLTER STAEMME 51
3.1.2 FITNESS-KOMPENSATIONSEXPERIMENT 53
3.1.3 GENERATIONSZEITBESTIMMUNG ALS BERECHNUNGSGRUNDLAGE 54
3.2 CHARAKTERISIERUNG DER MUTANTEN NACH 300 GENERATIONEN 54
3.2.1 IDENTIFIZIERUNG DER KEIME MITTELS MICRONAUT-E-SYSTEM 54
3.2.2 BESTIMMUNG DER GENERATIONSZEIT 55
3.2.3 DIREKTER WACHSTUMSVERGLEICH IN EINER KULTUR UEBER 10,5 TAGE 56
3.2.4 MHK-BESTIMMUNG DER MUTANTEN NACH 300 GENERATIONEN 60
3.2.5 MHK-BESTIMMUNG MITTELS MICRONAUT-S-SYSTEM 61
3.2.6 BESTIMMUNG DER RESISTENZMUTATIONEN IM VERGLEICH ZU DEN
ELTERNZELLEN 62
3.3 MULTIPLE ANTIBIOTIKA-RESISTENZ 63
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
3.3.1 BESTIMMUNG DES MAR-PHAENOTYP 63
3.3.2 MESSUNG DES CIPROFLOXACINGEHALTES IN DER BAKTERIENZELLE 64
3.3.3 SEQUENZVERGLEICH DES MARCORAB-LOCUS 66
3.4 UNTERSUCHUNG DER ADHAERENZEIGENSCHAFTEN DER E. CO//-LSOLATE 67
3.4.1 MANNOSE-SENSIBLE SACCHAROMYCES CEREVISIAE AGGLUTINATION (MSSA)....
67
3.4.2 PCR DES REGULATORISCHEN BEREICHSDER TYP 1 FIMBRIEN 68
3.5 UNTERSUCHUNG DES DNA-SUPERSPIRALISIERUNGSGRADS 70
3.5.1 UNTERSUCHUNG DES DNA-SUPERSPIRALISIERUNGSGRADS MITTELS EXPRESSION
DER
SS-LAKTAMASE 70
3.5.2 UNTERSUCHUNG DES SUPERSPIRALISIERUNGSGRADS MIT CHLOROQUINGELEN 72
3.5.3 DNA-SEQUENZANALYSE DER TOPOISOMERASEN UND DNA-BINDEPROTEINE.... 73
3.5.4 UEBERPRUEFUNG DER MUTATION IN GYRA AN POSITION 678 74
3.6 PROTEOMANALYSE MITTELS 2D-ELEKTROPHORESE 74
3.6.1 PROTEINEXPRESSIONS-UNTERSCHIEDE DER MUTANTEN 75
3.6.2 SEQUENZANALYSE DES PROTEIN-CODIERENDEN GENS (YQGE) 77
3.6.3 SEQUENZANALYSE DES TRANSKRIPTIONSAKTIVATORS FADR 77
4 DISKUSSION 78
5 ZUSAMMENFASSUNG 95
6 LITERATURVERZEICHNIS 97
7 ANHANG 106
7.1 LEBENSLAUF 106
7.2 DANKSAGUNGEN 107
7.3 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 108
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