Entwicklung eines automatisierten Testverfahrens zur molekularbiologischen Diagnostik der APC-Resistenz:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
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| Veröffentlicht: |
2001
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1.1
EINFUEHRUNG
1
1.2
DIE
BLUTGERINNUNG
UND
FAKTOR
V
2
1.2.1
DAS
PROTEIN
C-SYSTEM
3
1.2.2
CHARAKTERISTIKA
VON
FAKTOR
V
4
1.3
APC-RESISTENZ
5
1.3.1
MOLEKULARGENETISCHE
URSACHE
DER
APC-RESISTENZ
6
1.3.2
EPIDEMIOLOGIE
DER
APC-RESISTENZ
9
1.4
TESTVERFAHREN
ZUR
DIAGNOSTIK
DER
APC-RESISTENZ
11
2
AUFGABENSTELLUNG
13
3
MATERIAL
UND
METHODEN
3.1
DNA-ISOLIERUNG
14
3.2
AUFARBEITUNG
DER
OLIGONUKLEOTIDE
17
3.3
POLYMERASE-KETTENREAKTION
18
3.3.1
PRAEVENTION
VON
KONTAMINATIONEN
20
3.4
DNA-DETEKTION
21
3.5
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
23
3.6
SEQUENZIERUNG
DER
GENOTYPEN
25
3.6.1
AMPLIFIZIERTES
FRAGMENT
25
3.6.2
AUFREINIGUNG
DER
PCR-PRODUKTE
26
ZUR
DYE-TERMINATOR
SEQUENZIERUNG
3.6.3
CYCLE
SEQUENZING
27
4.
ERGEBNISSE
4.1
ENTWICKLUNG
DES
TESTSYSTEMS
29
4.1.1
AUSWAHL
DER
DNA-ISOLATIONSMETHODE
30
4.1.2
PRIMERDESIGN
UND
POSITIONIERUNG
30
4.1.2.1
OPTIMIERUNG
DER
ANNEALINGTEMPERATUR
32
UND
DER
PRIMERKONZENTRATION
4.1.2.2
OPTIMIERUNG
WEITERER
REAKTIONSPARAMETER
35
4.1.3
INKUBATION
MIT
DER
RESTRIKTIONSENDONUKLEASE
MNLL
36
INHALTSVERZEICHNIS
4.1.4
DNA-DETEKTION
UND
BESTIMMUNG
DES
GENOTYPS
38
4.1.4.1
DAS
PRINZIP
38
4.1.4.2
DNA
MARKIERUNG
38
4.1.4.3
DNA
QUANTIFIZIERUNG
39
4.1.4.4
THEORETISCH
ERWARTETE
ERGEBNISSE
40
4.2
DNA-KONZENTRATION
UND
EXTINKTION
42
4.3
VALIDITAET
DER
METHODE
44
4.4
IMPRAEZISION
DER
ANALYSE
46
4.4.1
IMPRAEZISION
DER
EINZELNEN
ARBEITSSCHRITTE
46
DES
TESTVERFAHRENS
(DNA-ISOLIERUNG,
DNA-AMPLIFIKATION,
RESTRIKTIONSVERDAU)
4.4.2
INTRAASSAY
UND
INTERASSAY
IMPRAEZISION
49
4.5
KLINISCHE
ERPROBUNG
DES
TESTVERFAHRENS
51
4.5.1
ERGEBNISSE
DER
EINZELNEN
GENOTYPEN
51
4.5.2
WEITERE
PATIENTENGRUPPEN
53
4.5.2.1
DIE
LEIDEN
MUTATION
BEI
PATIENTEN
MIT
HERZINFARKT
53
4.5.2.2
DIE
LEIDEN
MUTATION
BEI
PATIENTEN
54
MIT
ISCHAEMISCHEN
HIMINFARKT
4.6
KOSTEN
DES
TESTVERFAHRENS
56
5
DISKUSSION
5.1
DIAGNOSTIK
DER
APC-RESISTENZ
57
5.2
DIE
ENTWICKLUNG
DES
TESTVERFAHRENS
57
5.2.1
ROUTINEFAEHIGE,
MOLEKULARGENETISCHE
DETEKTION
58
DER
FAKTOR
V
LEIDEN
MUTATION
5.2.2
AKZEPTANZ
DES
INKOMPLETTEN
RESTRIKTIONSVERDAUS
59
5.3
VOR
UND
NACHTEILE
DES
TESTVERFAHRENS
60
6
ZUSAMMENFASSUNG
DER
DISSERTATIONSSCHRIFT
62
7
LITERATURVERZEICHNIS
63
8
ANHANG
74
9
LEBENSLAUF
75 |
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