Direkte kardioprotektive Wirkung von Östrogenen: funktionelle Untersuchungen zum Mechanismus der schnellen Inhibition des L-Typ-Kalziumstromes von Kardiomyozyten durch 17-beta-Östradiol ; elektrophysiologische Untersuchung an Ventrikelmyozyten aus weiblichen Meerschweinchen unter Verwendung der Patch-Clamp-Technik
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2001
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5
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
8
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
11
2.1
PRAEPARATION
UND
GEWINNUNG
VON
ISOLIERTEN
EINZELZELLEN
.
11
2.1.1
VENTRIKELMYOZYTEN
VON
MEERSCHWEINCHEN
.
11
2.1.2
GEWINNUNG
VON
EINZELZELLEN
.
11
2.2
ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
MESSUNGEN
.
12
2.2.1
PATCH-CLAMP-TECHNIK
.
12
2.2.2
KLEMMSPANNUNGSPROTOKOLLE
.
13
2.2.2.1
PULSPROTOKOLL
ZUR
BESTIMMUNG
DER
MEMBRANKAPAZITAET
.
13
2.2.2.2
RECHTECKFOERMIGE
SPANNUNGSKLEMMEN
ZUR
BESTIMMUNG
DES
LC
A
,I
.
13
2.2.2.3
BESTIMMUNG
DER
STROM-SPANNUNGS-BEZIEHUNG
UND
DER
GAT/NG-PARAMETER
IM
STEADY-STATE
.
14
2.3
VERSUCHSTAND
.
15
2.3.1
GEMEINSAME
KOMPONENTEN
DER
VERSUCHSAUFBAUTEN
.
15
2.3.2
VERSUCHSAUFBAUTEN
DER
LANGSAMEN
UND
SCHNELLEN
PERFUSION
.
15
2.3.2.1
LANGSAME
PERFUSION
.
16
2.3.2.2
SCHNELLE
PERFUSION
.
16
2.3.2.2.1
KOMPONENTEN
DES
VERSUCHSAUFBAUS
UND
DURCHFUEHRUNG
.
16
2.3.2.2.2
PRINZIP
DES
ABSTEIGENDEN
TEMPERATURGRADIENTEN
.
18
2.3.2.2.3
VOR
UND
NACHTEILE
DER
SCHNELLEN
PERFUSION
.
18
2.3.2.2.4
METHODISCHE
UNTERSUCHUNG
ZUR
SCHNELLEN
PERFUSION
.
19
2.4
AUSWERTUNG
DER
EXPERIMENTE
UND
IHRE
MATHEMATISCHE
AUFARBEITUNG
.
21
2.4.1
MEMBRAN-KAPAZITAET
.
21
2.4.2
DER
L
CA
,L
.
21
2.4.3
KONZENTRATIONS-WIRKUNGS-BEZIEHUNG
.
22
2.4.4
STROM-SPANNUNG-BEZIEHUNG
UND
GAF/NG-PARAMETER
.
23
2.4.5
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
DATEN
.
24
2.5
LOESUNGEN
UND
CHEMIKALIEN
.
25
2.5.1
STANDARD-TYRODE
.
25
6
2.5.2
PRAEPARATION
UND
ZELLISOLIERUNG
.
25
2.5.3
LOESUNGEN
ZUR
BESTIMMUNG
DES
LCA,T
.
25
2.5.4
ZUSAETZE
ZU
DEN
TESTLOESUNGEN
.
26
2.5.5
SONSTIGE
CHEMIKALIEN
.
26
3
ERGEBNISSE
.
27
3.1
ALLGEMEINE
DATEN
.
27
3.2
WIRKUNG
VON
E
2
AUF
DEN
L
C
A.L
.
27
3.2.1
SCHNELLE
INHIBITION
DES
ICA.L
DURCH
E
2
.
27
3.2.2
DIE
REDUKTION
DES
LC
A
,I
IST
KONZENTRATIONSABHAENGIG
UND
REVERSIBEL
.
27
3.3
STROM-SPANNUNGS-BEZIEHUNG
UND
GAT/NG-PARAMETER
UNTER
E
2
.
30
3.3.1
STROM-SPANNUNGS-BEZIEHUNG
.
30
3.3.2
GAT/NG-PARAMETER
.
32
3.4
VERGLEICH
DER
LOESUNGSMITTEL
ETHANOL
UND
DMSO
.
33
3.5
UNTERSUCHUNGEN
ZU
EINEM
MEMBRANSTAENDIGEN
E
2
-REZEPTOR
.
35
3.5.1
EXTRAZELLULAERE
APPLIKATION
VON
E
2
-BSA
.
35
3.5.2
VARIATION
DER
PRAEPARATIONSMETHODE
.
36
3.5.2.1
PRAEPARATION
OHNE
TRYPSIN
.
36
3.5.2.2
PRAEPARATION
OHNE
TRYPSIN
UNTER
VARIATION
DER
VERDAUZEIT
VON
COLLAGENASE
.
37
3.5.3
KURZZEITKULTUR
.
39
3.6
MODIFIKATION
DER
E
2
-WIRKUNG
DURCH
ZUGABE
ANDERER
SUBSTANZEN
.
40
3.6.1
GLEICHZEITIGE
APPLIKATION
VON
FOETALEM
KAELBERSERUM
UND
E
2
.
40
3.6.2
VORSTIMULATION
DES
ICA.L
DURCH
ISOPRENALIN
.
41
4
DISKUSSION
.
43
4.1
KALZIUM-ANTAGONISTISCHE
WIRKUNG
VON
E
2
.
43
4.1.1
STROM-SPANNUNGS-BEZIEHUNG
UND
GAT/NG-PARAMETER
UNTER
E
2
-EINFLUSS.
43
4.1.2
EXTRAZELLULAERE,
MEMBRANSTAENDIGE
BINDUNGSSTELLEN
FUER
E
2
.
44
4.2
PHYSIOLOGISCHE
RELEVANZ
DER
SCHNELLEN
MODULATION
DES
LC
A
,L
DURCH
E
2
.
46
4.2.1
SPEZIFITAET
DER
E
2
-WIRKUNG
.
46
4.2.2
KONZENTRATIONSBEREICH
.
46
7
4.2.3
GESCHLECHTSUNTERSCHIEDE
IN
DER
E
2
-SENSITIVITAET
.
50
4.2.4
AUSMASS
DER
WIRKUNG
.
52
4.2.5
GESCHWINDIGKEIT
DES
WIRKUNGSEINTRITTS
.
52
4.3
SCHLUSSFOLGERUNG
.
53
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
57
6
ANHANG
.
58
KLEMMSPANNUNGSPROTOKOLLE
.
59
SCHEMA
1:
AUFBAU
DER
LANGSAMEN
PERFUSION
.
60
SCHEMA
2:
AUFBAU
DER
SCHNELLEN
PERFUSION
.
61
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
62
8
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
71
9
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
72
10
DANKSAGUNG
.
73
11
LEBENSLAUF
.
74 |
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