Der Einfluss des humanen Cytomegalovirus auf die Expression von Oberflächenproteinen bei Endothelzellen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2001
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
II.
EINLEITUNG
.
2
III.
FRAGESTELLUNG
.
8
IV.
MATERIAL
.
9
1.
BIOLOGISCHES
MATERIAL
.
9
2.
OLIGONUKLEOTIDE
.
9
3.
VEKTORSYSTEME
.
10
4.
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
.
11
5.
ENZYME
.
12
6.
REAGENZIEN
UND
PUFFER
.
13
7.
MEDIEN
FUER
ZELLKULTUR
.
14
V.
METHODEN
.
15
1.
ZELLKULTURVERFAHREN
.
15
1.1
KULTIVIERUNG
VON
HUMANEN
VORHAUTFIBROBLASTEN
.
15
1.2
ISOLIERUNG
UND
KULTIVIERUNG
VON
HUMANEN
ENDOTHELZELLEN
.
15
2.
VERMEHRUNG,
ISOLIERUNG
UND
INFEKTION
VON
HCMV
.
16
2.1
VERMEHRUNG
UND
ISOLIERUNG
VON
HCMV
.
16
2.2
INFEKTION
VON
PRIMAEREN
ZELLEN
MIT
HCMV
.
16
3.
ANREICHERUNG,
INAKTIVIERUNG
UND
NEUTRALISATION
VON
HCMV-VIRIONEN
.
17
3.1
ANREICHERUNG
VON
VIRIONEN
.
17
3.2
UV-INAKTIVIERUNG
.
17
3.3
NEUTRALISIERUNG
VON
VIRIONEN
MITTELS
HUMANER
ANTIKOERPER
.
17
4.
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
VIREN
.
18
4.1
TRANSFEKTION
VON
FIBROBLASTEN
.
18
4.2
ELEKTROPORATION
.
18
4.3
PLAQUEREINIGUNG
UND
ENDVERDIINNUNGSMETHODE
.
18
5.
ANALYSE
VON
DNA
UND
RNA
.
19
5.1
DNA-SPALTUNG
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
.
19
5.2
POLYMERASEKETTENREAKTION
.
19
5.3
RNA-ISOLIERUNG
UND
RT-POLYMERASEKETTENREAKTION
.
20
5.4
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
INFIZIERTEN
ZELLEN
.
20
5.5
SOUTHEMBLOT
.
20
6.
PROTEINANALYSEN
UND
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
21
6.1
IMMUNOBLOT
.
21
6.2
COOMASSIE-BLAU-FAERBUNG
.
22
6.3
QUANTITATIVE
PROTEINBESTIMMUNG
.
22
6.4
N-GLYKOSIDASEBEHANDLUNG
VON
ZELLEN
.
22
6.5
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZANALYSE
.
23
INHALTSVERZEICHNIS
6.6
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)
.
23
6.7
ZELLSEPARATION
MITTELS
POSITIVER
SELEKTION
.
24
6.8
EXPRESSION
UND
REINIGUNG
VON
REKOMBINANTEM
CD154-PROTEIN
.
YY.
24
VI.
ERGEBNISSE
.
25
1.
HERSTELLUNG
EINES
REKOMBINANTEN
VIRUS
MIT
GFP-GENINSERTION
ZWISCHEN
DEN
LESERAHMEN
US9
UND
US
10
.
25
2.
ANALYSE
DER
EXPRESSION
VON
VERSCHIEDENEN
OBERFLAECHENPROTEINEN
AUF
HUVEC
UND
HFF
NACH
INFEKTION
MIT
HCMV
.
31
2.1
VERGLEICH
DER
CD40-OBERFLAECHENEXPRESSION
AUF
HUVEC
UND
HFF
NACH
INFEKTION
MIT
HCMV
.
31
2.2
ANALYSE
DER
OBERFLAECHENEXPRESSION
VON
ICAM-1,
MHC-I
UND
MHC-II
NACH
INFEKTION
MIT
HCMV
.
36
3.
BINDUNG
VON
CD154
AN
DEN
CD40-REZEPTOR
.
38
3.1
EXPRESSION
UND
REINIGUNG
VON
LOESLICHEM
REKCDL
54
.
38
3.2
BINDUNG
VON
LOESLICHEM
REKCD154
AN
DEN
CD40-REZEPTOR
VON
INFIZIERTEN
HUVEC
.
40
4.
EINFLUSS
VON
ADSORPTION
UND
PENETRATION
VON
HCMV-VIRIONEN
AUF
DIE
CD40-EXPRESSION
.
42
5.
EINFLUSS
VON
CYCLOHEXIMID
UND
GANCICLOVIR
AUF
DIE
EXPRESSIONSKINETIK
VON
CD40
NACH
INFEKTION
VON
ENDOTHELZELLEN
.
44
6.
EINFLUSS
DES
IE2-PROTEINS
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
CD40
BEI
ENDOTHELZELLEN
.
44
7.
IMMUNOBLOTANALYSE
DER
CD40-EXPRESSION
IM
ZEITVERLAUF
NACH
INFEKTION
MIT
HCMV
.
46
8.
EXPRESSIONSKINETIK
DER
CD40
MRNA
UND
ICAM-1
MRNA
NACH
INFEKTION
VON
HUVEC
.
52
9.
CD40-EXPRESSION
IN
HCMV
INFIZIERTEN
ENDOTHELZELLEN
IN
VIVO
.
54
VII.
DISKUSSION
.
56
VIII.
ABKUERZUNGEN
.
65
IX.
LITERATURVERZEICHNIS
.
66 |
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