Charakterisierung der Endothelin-1-vermittelten Wirkung auf die intrazelluläre Calciumkonzentration hepatischer Sternzellen während deren Transformation vom ruhenden zum myofibroblast-ähnlichen Phänotyp:
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2001
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INHALTSV EI'ZEICFAMS
1. EINLEITUNG 9
2. GRUNDLAGEN 10
2.1 HEPATISCHE STEMZELLEN: BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG UND FUNKTIONEN
10
2.2 ENDOTHELINE: STRUKTUR, REZEPTOREN UND WIRKUNGEN 13
2.3 BEDEUTUNG DER INTRAZELLULAEREN CALCIUMKONZENTRATION FUER DIE
ZELLFUNKTION 16
2.4 FRAGESTELLUNG 19
3. MATERIALIEN UND METHODEN 20
3.1 ZELLISOLIERUNG UND KULTIVIERUNG 20
3.2 MESSUNG DER INTRAZELLULAEREN CALCIUMKONZENTRATION MIT
FURA-2 21
3.3 MESSUNG DER INTRAZELLULAEREN CALCIUMKONZENTRATION MIT
OREGON GREEN 488-
BAPTA-1 24
3.4 FLUORESZENZOPTISCHE INTRAZELLULAERE CALCIUMMESSUNGEN AN EINZELZELLEN
26
3.5 VERAENDERUNGEN DER INTRAZELLULAEREN CALCIUM-HOMOEOSTASE: AGONISTEN,
HEMMSTOFFE, ENTLEERUNG INTRAZELLULAERER CALCIUMSPEICHER UND
DEPOLARISATION 28
3.6 IMMUNZYTOCHEMISCHE FAERBUNG DES AI-AKTINS UND DES ET-A-REZEPTORS 30
3.7 QUANTIFIZIERUNG DER AI-AKTIN-MENGE IM WESTERN-BLOT 32
3.8 STATISTISCHE AUSWERTUNG 33
4. ERGEBNISSE 36
4.1 MORPHOLOGISCHE UND FLUORESZENZOPTISCHE CHARAKTERISIERUNG DER
HEPATISCHEN
STEMZELLEN, PARENCHYMZELLEN, KUPFFER-ZELLEN UND SINUSENDOTHELZELLEN 36
4.2 WIRKUNG VON ENDOTHELIN-1, ENDOTHELIN-3, SARAFOTOXIN S6C,
PHENYLEPHRIN UND
UTP AUF DIE INTRAZELLULAERE CALCIUMKONZENTRATION HEPATISCHER STEMZELLEN
IM
VERGLEICH ZU PARENCHYMZELLEN, KUPFFER-ZELLEN UND SINUSENDOTHELZELLEN 39
4.3 SENSITIVITAETSZUNAHME HEPATISCHER STEMZELLEN WAEHREND DES
AKTIVIERUNGS
PROZESSES GEGENUEBER ENDOTHELIN-1, NICHT ABER GEGENUEBER UTP ODER
PHENYLEPHRIN 46
4.4 CHARAKTERISIERUNG DER DURCH ENDOTHELIN-1, UTP UND PHENYLEPHRIN
MOBILISIERBAREN INTRAZELLULAEREN CALCIUMSPEICHER 52
6
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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4.5
DE
OVO-EXPRESSION SPANNUNGSABHAENGIGER L-TYP CALCIUM-KANAELE AKTIVIERTER
HEPATISCHER STEMZELLEN 54
4.6 HEMMUNG DER SENSITIVITAETSZUNAHME HEPATISCHER STEMZELLEN DURCH CAMP
59
4.7 OSZILLATIONEN DER INTRAZELLULAEREN CALCIUMKONZENTRATION HERVORGERUFEN
DURCH
ENDOTHELIN-1, UTP UND PHENYLEPHRIN 62
\
4.8 . EXPRESSION VON AI-AKTIN IST ABHAENGIG VON DER KULTURDAUER 63
4.9 BESCHLEUNIGUNG DER AKTIVIERUNG HEPATISCHER STEMZELLEN DURCH
ENDOTHELIN-1:
REZEPTOREN UND WECHSELWIRKUNGEN MIT CAMP 66
5. DISKUSSION 68
5.1 AENDERUNGEN DER INTRAZELLULAEREN CALCIUMKONZENTRATION PARENCHYMALER
UND
NICHT-PARENCHYMALER ZELLEN DER RATTENLEBER DURCH ENDOTHELIN-1, UTP UND
PHENYLEPHRIN 68
5.2 ENDOTHELIN-A-REZEPTOR-SPEZIFISCHE SENSITIVITAETSZUNAHME DER
HEPATISCHEN
STEMZELLEN IN KULTUR 69
5.3 INTRAZELLULAERE CALCIUMSPEICHER HEPATISCHER STEMZELLEN 74
5.4
DE
OVO-EXPRESSION SPANNUNGSABHAENGIGER CALCIUM-KAENALE VOM L-TYP DER
AKTIVIERTEN HEPATISCHEN STEMZELLEN 74
5.5 AUSLOESUNG VON OSZILLATIONEN DER INTRAZELLULAEREN CALCIUMKONZENTRATION
DURCH
ENDOTHELIN-1, UTP UND PHENYLEPHRIN 7 5
5.6 BESCHLEUNIGUNG DER AKTIVIERUNG HEPATISCHER STEMZELLEN IN KULTUR
DURCH
ENDOTHELIN-1 UEBER DEN ET-A-REZEPTOR 77
5.7 MODELLVORSTELLUNG DER ET-A- UND ET-B-REZEPTOR-SIGNALTRANSDUKTION UND
SIGNALINTERAKTION 80
6. ZUSAMMENFASSUNG 81
7. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 83
8. LITERATURVERZEICHNIS 84
7 |
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