Interaktionen und Kompartimentierungen von Signal-Transduktionsvorgängen: experimentelle Untersuchungen an Myokard und Endothel
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Herdecke
GCA-Verl.
2001
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| Ausgabe: | Als Ms. gedr. |
| Schriftenreihe: | Forschen und Wissen - Medizin
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Düsseldorf, Heinrich-Heine-Univ., Habil.-Schr., 2000 |
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I. Einleitung 1
1. Grundlagen der Signal-Transduktion im kardiovaskulären System 1
2. Komplexität von Signal-Transduktionsvorgängen 5
3. Fragestellungen 7
3.1. Kompartimentierung von Adenosinbindungsstellen 7
3.2. Extra- und intrazelluläre Kompartimente endothelialer Proteinkinasen 8
3.3. Kompartimentierung von Proteinkinase C Substraten des
Kardiomyozyten 8
3.4. Interaktionen zwischen ar und ß-adrenerger Signaltransduktion des
Kardiomyozyten 9
II. Methodik 10
1. Isoliert perfundiertes Herz 10
2. Isolation von Kardiomyozyten 10
3. Isolierung und Kultur von Endothel 12
4. Proteinphosphorylierung 14
4.1. Intrazelluläre Proteinphosphorylierung von intakten Kardiomyozyten 14
4.2. Nachweis endothelialer Ektoproteinkinasen 15
5. Nachweis phosphorylierter Proteine 17
6. Rezeptorbindungsstudien 17
7. cAMP-Bestimmung mittels Proteinbindungsassay 18
8. Analytische Methoden 19
8.1. Bestimmung von ATPase-Aktivitäten 19
8.2. LDH-Freisetzung von Endothelzellen 20
8.3. Trypan Blau Ausschluß 20
9. Statistik 20
I
III. Ergebnisse 21
1. Kompartimentierung von Adenosinbindungsstellen 21
1.1. Funktionelle Bedeutung extra- bzw. intrazellulärer Adenosinbindungs¬
stellen am nicht adrenerg stimulierten Herz 21
1.2. Funktionelle Bedeutung extra- und intrazellulärer Adenosinbindungs¬
stellen am Isoproterenol-stimulierten Herz 22
1.3. Der koronarvenöse cAMP-Efflux als Maß der Adenylatzyklaseaktivität 25
1.4. Einfluß von Adenosin und 2 ,5 -Dideoxyadenosin auf den koronar-
venösen cAMP-Efflux 26
1.5. Einfluß von 2 ,5 -Dideoxyadenosin auf den koronarvenösen cAMP-
Efflux am Isoproterenol-stimulierten Herzen 28
1.6. Einfluß einer Blockade extrazellulärer Adenosinrezeptoren auf die
kardialen Effekte von Adenosin und 2 ,5 -Dideoxyadenosin 28
2. Extra- und intrazelluläre Kompartimente endothelialer Proteinkinasen 32
2.1. Zeiloberflächenproteine als Substrate der endothelialen
Ektoproteinkinase 32
2.2. Serumproteine als Substrate der endothelialen Ektoproteinkinase 34
2.3. Einfluß zyklischer Nukleotide auf die endotheliale extrazelluläre
Proteinphosphorylierung 36
2.4. Phosvitin als Substrat der endothelialen Ektoproteinkinase 36
2.5. Zelluntergang als mögliche Ursache der Freisetzung von Proteinkinase-
aktivität 39
2.6. Extrazellulärer ATP-Abbau durch Endothelzellen 41
3. Kompartimentierung von Proteinkinase C Substraten des Kardiomyozyten 43
3.1. Proteinphosphorylierungsmuster bei Stimulation intakter Kardiomyozy¬
ten mit Isoproterenol, Methoxamin bzw. Tetradecanoylphorbolacetat 43
3.2. Zelluläre Lokalisation des 15 kDa Proteins 50
4. Interaktion zwischen ar und ß-adrenerger Signaltransduktion des Kardio-
myozyten 52
4.1. Einfluß einer di-adrenergen Stimulation aud den Isoproterenol-
induzierten Anstieg der myokardialen Kontraktilität 52
4.2. Einfluß von Methoxamin auf den Glukagon-induzierten Kontrak-
tilitätsanstieg 55
4.3. Einfluß von Methoxamin auf die Herzfrequenz unter Basalbedin-
gungen bzw. bei Isoproterenol-Stimulation 56
4.4. Bindungseigenschaften von Methoxamin an kardialen
ß-Adrenozeptoren 57
4.5. Einfluß einer aradrenergen Stimulation auf das Isoproterenol-
induzierte Phosphorylierungsmuster 58
IV. Diskussion 62
1. Kompartimentierung von Adenosinbindungsstellen 62
2. Extra- und intrazelluläre Kompartimente endothelialer Proteinkinasen 65
3. Kompartimentierung von Proteinkinase C Substraten des Kardiomyozyten 69
4. Interaktion zwischen ar und ß-adrenerger Signal-Transduktion des
Kardiomyozyten 72
V. Zusammenfassung 77
VI. Literatur 83
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