Differentielle Expression myokardialer Kaliumkanäle im humanen linksventrikulären Myokard:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS:
SEITE
1.
EINLEITUNG
1.1.
HERZINSUFFIZIENZ
1.1.1.
DEFINITION
8
1.1.2.
AETIOLOGIE
UND
INZIDENZ
8
1.1.3.
PATHOPHYSIOLOGIE
9
1.2.
DILATATIVE
KARDIOMYOPATHIE
1.2.1.
DEFINITION
10
1.2.2.
AETIOLOGIE
UND
INZIDENZ
10
1.2.3.
PATHOPHYSIOLOGIE
11
1.3.
VENTRIKULAERE
ARRHYTHMIE
1.3.1.
VENTRIKULAERE
ARRHYTHMIE
BEI
HERZINSUFFIZIENZ
12
1.3.2.
PATHOPHYSIOLOGIE
12
1.3.3.
REPOLARISATIONSSTOERUNG
BEI
HERZINSUFFIZIENZ
13
1.4.
DAS
KARDIALE
AKTIONSPOTENTIAL
1.4.1.
PHYSIOLOGIE
16
1.4.2.
PATHOPHYSIOLOGIE
18
1.5.
TRANSIENTER-CA++-UNABHAENGIGER
KALIUMAUSWAERTSSTROM
(I
LO
)
1.5.1.
PHYSIOLOGIE
UND
GENETISCHE
GRUNDLAGEN
18
1.5.2.
KANALSTRUKTUR
21
1.5.3.
TRANSIENTER
KALIUMAUSWAERTSSTROM
BEI
HYPERTROPHIE
21
1.5.4.
TRANSIENTER
KALIUMAUSWAERTSSTROM
BEI
HERZVERSAGEN
22
1.5.5.
TRANSIENTER
KALIUMAUSWAERTSSTROM
UND
METABOLISCHE
EINFLUESSE
24
1.5.6.
MECHANISMEN
DER
VERAENDERTEN
EXPRESSION
DES
I
TL
I
UND
ANDERER
LONENKANAELE
BEI
HERZVERSAGEN
1.5.6.1.
HUMORALE
PROZESSE
25
1.5.6.2.
FUNKTIONELLE
FOLGEN
EINER
VERAENDERTEN
EXPRESSION
DES
I
LT
I
UND
ANDERER
LONENKANAELE
BEI
HERZVERSAGEN
26
1.6.
KLINISCHE
RELEVANZ
27
2.
PROBLEMSTELLUNG
28
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
3.1.
BEZUGSQUELLEN
3.1.1.
CHEMIKALIEN
30
3.1.2.
TRANSKRIPTION
UND
ENZYME
30
3.1.3.
DNA-GENSEQUENZEN
31
3.1.4.
DNA-MULTIPLIKATION,
VEKTOREN
31
3.1.5.
RNA-POLYMERASEN
31
3.2.
GERAETE
UND
MATERIALIEN
31
3.3.
METHODEN
3.3.1.
UNTERSUCHUNGSMATERIALIEN
32
3.3.2.
UNTERSUCHUNGSRAHMEN
33
3.3.3.
KLINISCHE
DATEN
33
3.3.4.
INVASIVE
HAEMODYNAMIK
33
3.4.
ISOLIERUNG
VON
MRNA
AUS
DEM
GEWEBE
33
3.4.1.
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
DEM
GEWEBE
MIT
TRIZOL
33
2
3.4.2.
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
DEM
GEWEBE
MIT
PHENOL/CHLOROFORM
34
3.4.3.
MESSEN
DER
OPTISCHEN
DICHTE
35
3.4.4.
WIEDERHOLTE
FAELLUNG
VON
PROTEIN
35
3.4.5.
BERECHNUNG
DER
MRNA-MENGE
36
3.4.6.
UEBERPRUEFEN
DES
ISOLATS
AUF
EINEM
AGAROSE-TESTGEL
36
3.4.7.
STAMMLOESUNGEN
FUER
DIE
RNA-ISOLIERUNG
37
3.5.
LONENKANAL-DNA
UND
MULTIPLIKATION
3.5.1.
PLASMIDE
41
3.5.2.
TRANSFORMATION
DER
DNA
IN
KOMPETENTE
ESCHERICHIA
COLI
BAKTERIEN
41
3.5.3.
PLASMID-ISOLIERUNG
AUS
ESCHERICHIA
COLI
BAKTERIEN
(MINI-PREP)
43
3.5.4.
PLASMID-ISOLIERUNG
AUS
ESCHERICHIA
COLI
BAKTERIEN
(MAXI-PREP)
45
3.6.
RIBONUCLEASE
PROTECTION
ASSAY
46
3.6.1.
RIBONUCLEASE
PROTECTION
ASSAY
MIT
SENSE-TRANSKRIPTION
3.6.1.1.
TRANSKRIPTION
47
3.6.I.2.
RNA-POLYMERASEN
FUER
DEN
SENSE-TRANSKRIPTIONSANSATZ
48
3.6.1.3.
REINIGUNG
48
3.6.1.4.
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
ANHAND
DER
RADIOAKTIVITAETSINTENSITAET
48
3.6.1.5.
ERSTELLUNG
VON
STANDARDKURVEN
ANHAND
SPEZIFISCHER
MRNA
SENSE-TRANSKRIPTE
49
3.6.2.
RIBONUCLEASE
PROTECTION
ASSAY
MIT
ANTISENSE-TRANSKRIPTION
3.6.2.1.
TRANSKRIPTION
50
3.6.2.2.
RNA-POLYMERASEN
FUER
DEN
ANTISENSE-TRANSKRIPTIONSANSATZ
51
3.6.2.3.
HYBRIDISIERUNG
51
3.6.2.4.
POLYACRYLAMID-GEL
51
3.6.2.5.
WEITERE
BEARBEITUNG
DER
PROBEN
52
3.6.2.6.
STAMMLOESUNGEN
FUER
DEN
RIBONUCLEASE
PROTECTION
ASSAY
52
4.
ERGEBNISSE
4.1.
PATIENTENDATEN
3
4
4.1.1.
PATIENTEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
DARAUS
RESULTIERENDEM
HERZVERSAGEN
ZUM
ZEITPUNKT
DER
TRANSPLANTATION
54
4.1.2.
ORGANSPENDER
ZUM
ZEITPUNKT
DER
EXPLANTATION
56
4.2.
RIBONUCLEASE
PROTECTION
ASSAY
4.2.1.
RIBONUCLEASE
PROTECTION
ASSAY
MIT
SENSE-TRANSKRIPTION
57
4.3.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
SPEZIFISCHER
MRNA
IN
TRANSVENTRIKULAEREN
(GESAMT)
MYOKARDPROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIO
MYOPATHIE
UND
VON
HERZEN
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
4.3.1.
HKV4.3-MRNA
BEI
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
IN
MYOKARD
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
60
4.3.2.
HKVL.4-MRNA
BEI
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
IN
MYOKARD
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
61
4.3.3.
HERG-MRNA
BEI
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
IN
MYOKARD
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
61
4.4.
STANDARDISIERUNG
UND
INTERNE
KONTROLLEN
4.4.1.
HHL
NA-KANAL-MRNA
BEI
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
IN
MYOKARD
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
62
4.4.2.
BETA-MYOSIN-HEAVY-CHAIN-MRNA
BEI
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
IN
MYOKARD
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
63
4.4.3.
HHL
ALS
INTERNER
STANDARD
4.4.3.1.
NORMALISIERUNG
VON
HKV4.3
MIT
HHL
64
4.4.3.2.
NORMALISIERUNG
VON
HKVL.4
MIT
HHL
65
44.3.3.
NORMALISIERUNG
VON
HERG
MIT
HHL
66
4.4.34.
BESTIMMUNG
VON
HHL-MRNA
ALS
MASS
FUER
DIE
REPRODUZIERBARKEIT
DER
VERSUCHE
66
4.4
4.
SS-MHC
ALS
INTERNER
STANDARD
4.4.4
1.
NORMALISIERUNG
VON
HKV4.3
MIT
SS-MHC
67
4.4.42.
NORMALISIERUNG
VON
HKVL.4
MIT
SS-MHC
67
4.4.43.
NORMALISIERUNG
VON
HERG
MIT
SS-MHC
68
4.4.4.4.
BESTIMMUNG
VON
SS-MHC-MRNA
ALS
MASS
FUER
DIE
REPRODUZIERBARKEIT
DER
VERSUCHE
68
5
4.5.
TRANSVENTRIKULAERE
VERTEILUNG
4.5.1.
TRANSVENTRIKULAERE
VERTEILUNG
IN
HERZEN
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
4.5.1.1.
BESTIMMUNG
VON
HKV4.3-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDOKARDIALEN
UND
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
69
4.5.12.
BESTIMMUNG
VON
HKVL
,4-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDOKARDIALEN
UND
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
70
4.5.1.3.
BESTIMMUNG
VON
HHL
UND
BETA-MHC-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDO
KARDIALEN
UND
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
71
4.5.2.
TRANSVENTRIKULAERE
VERTEILUNG
IN
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
4.5.2.1.
BESTIMMUNG
VON
HKV4.3-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDOKARDIALEN
UND
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
71
4.5.2.2.
BESTIMMUNG
VON
HKVL
,4-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDOKARDIALEN
UND
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
72
4.5.23.
BESTIMMUNG
VON
HHL
UND
BETA-MHC-MRNA-
KONZENTRATIONEN
IN
ENDOKARDIALEN
UND
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
72
4.5.3.
TRANSVENTRIKULAERE
VERTEILUNG
IN
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIO
MYOPATHIE
VERGLICHEN
MIT
HERZEN
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
4.5.3.1.
BESTIMMUNG
VON
HKV4.3-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDO
KARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
73
4.5.3.2.
BESTIMMUNG
VON
HKV4.3-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
73
4.5.3.3.
BESTIMMUNG
VON
HKVL.4-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDOKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
74
4.5.3.4.
BESTIMMUNG
VON
HKVL.4-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
74
4.5.3.5.
BESTIMMUNG
VON
HHL-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDOKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
75
4.5.3.6.
BESTIMMUNG
VON
HHL-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
75
4.5.3.7.
BESTIMMUNG
VON
SS-MHC-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
ENDOKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
76
4.5.3.8.
BESTIMMUNG
VON
SS-MHC-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
EPIKARDIALEN
PROBEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
STRUKTURELLE
HERZERKRANKUNG
76
5.
DISKUSSION
5.1.1.
ANALYSE
VON
HKV4.3
UND
HKVL
,4-MRNA
IN
TRANSVENTRIKULAEREN
PRAEPARATIONEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
OHNE
VORBESTEHENDE
ERKRANKUNG
77
5.1.2.
ANALYSE
VON
HKV4.3-UND
HKVL
,4-MRNA
IN
EPIKARDIALEN
UND
ENDOKARDIALEN
PRAEPARATIONEN
VON
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
HERZEN
OHNE
VORBESTEHENDE
HERZERKRANKUNG
81
5.1.3.
ANALYSE
VON
HERG-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
IM
VERGLEICH
ZU
NICHT
ERKRANKTEN
HERZEN
83
5.2.
NATRIUMSTROM
I
N
.
UND
ANALYSE
VON
HHL-MRNA-KONZENTRATIONEN
IN
HERZEN
MIT
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
GESUNDEN
HERZEN
84
5.3.
ANALYSE
VON
BETA-MYOSIN-HEAVY-CHAIN-MRNA
BEI
DILATATIVER
KARDIOMYOPATHIE
UND
GEWEBE
OHNE
VORERKRANKUNG
85
5.4.
KRITISCHE
DISKUSSION
UNSERER
ERGEBNISSE
UND
VERGLEICH
MIT
DEM
BISHERIGEN
KENNTNISSTAND
86
6
6.
ZUSAMMENFASSUNG
91
7.
LITERATUR
93
8.
DANKSAGUNG
102
9.
LEBENSLAUF
103
7 |
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