Der Experimentator: Molekularbiologie, Genomics:
Gespeichert in:
| Vorheriger Titel: | Mülhardt, Cornel Der Experimentator Molekularbiologie |
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| 1. Verfasser: | |
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Heidelberg [u.a.]
Spektrum Akad. Verl.
2002
|
| Ausgabe: | 3. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Der Experimentator
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XII, 267 S. Ill., graph. Darst. |
| ISBN: | 3827411920 |
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| adam_text | Inhalt
1 Was ist denn „Molekularbiologie , bitteschön? 1
1.1 Das Substrat der Molekularbiologie, oder: Molli World für Anfänger 2
1.2 Was brauche ich zum Arbeiten? 7
1.3 Sicherheit im Labor 8
2 Einige grundlegenden Methoden 12
2.1 Nucleinsäure ist gleich Nucleinsäure und auch wieder nicht 12
2.2 Vom Fällen und Konzentrieren von Nucleinsäuren 14
2.2.1 Alkohol Fällung 14
2.2.2 Konzentratoren 17
2.2.3 Speed vac 18
2.2.4 „Aussalzen 19
2.3 Die Reinigung von Nucleinsäuren 19
2.3.1 Phenol Chloroform Extraktion 19
2.3.2 Fällung mit PEG 21
2.3.3 Proteinbindende Filtermembranen 21
2.3.4 Anionenaustauschersäulen 21
2.3.5 Glasmilch 23
2.3.6 Cäsiumchlorid Dichtegradient 23
2.3.7 Dialyse 24
2.4 Konzentrationsbestimmung von Nucleinsäurelösungen 25
2.5 Methoden zur DNA Präparation 29
2.5.1 Präparation von Plasmid DNA im kleinen Maßstab
(Minipräparationen) 29
2.5.2 Präparation von Plasmid DNA im großen Maßstab
(Maxipräparationen) 31
2.5.3 Bakterienmedien 33
2.5.4 Präparation von Phagen DNA 35
2.5.5 Präparation einzelsträngiger DNA mittels Helferphagen 38
2.5.6 Präparation von genomischer DNA 39
3 Das Werkzeug 41
3.1 Restriktionsenzyme 41
3.2 Gele 49
3.2.1 Agarosegele 50
3.2.2 DNA Fragmente aus Agarosegelen isolieren 55
3.2.3 Polyacrylamidgele (PA Gele) 59
3.2.4 DNA Fragmente aus PA Gelen isolieren 61
3.2.5 Pulsfeldgelelektrophorese (PFGE) 62
3.2.6 Kapillarelektrophorese 63
3.3 Blotten 63
X • Inhalt 3.3.1 Southern Blot 63
3.3.2 Northern Blot 67
3.3.3 Dot und Slot Blot 69
4 Die Polymerase Kettenreaktion (PCR) 71
4.1 Die Standard PCR 71
4.2 Tips zur Verbesserung der PCR 81
4.2.1 NestedPCR 83
4.2.2 Multiplex PCR 84
4.2.3 Amplifikation langer DNA Fragmente ( 5kb) 85
4.3 PCR Anwendungen 86
4.3.1 Reverse Transkription Polymerasekettenreaktion (RT PCR) 86
4.3.2 Rapid amplification of cDNA ends (RACE) 87
4.3.3 Amplifikation zufälliger Produkte 89
4.3.4 Klassische quantitative PCR 90
4.3.5 Real time quantitative PCR 93
4.3.6 Inverse PCR 99
4.3.7 Biotin RAGE und Supported PCR 100
4.3.8 Mutagenese mit modifizierten Primern 100
4.3.9 ARMS (amplification refractory mutation System) 101
4.3.10 in situ PCR 102
4.3.11 Cycle Sequencing 103
4.3.12 cDNA Synthese 103
4.3.13 Einzelzell PCR 103
5 RNA 105
5.1 Methoden der RNA Isolierung 106
5.2 Methoden der mRNA Isolierung 108
5.3 Reverse Transkription (cDNA Synthese) 109
5.4 In vitro Transkription(RNA Synthese) 111
6 Die Klonierung von DNA Fragmenten . 114
6.1 Die Grundlagen des Klonierens 114
6.1.1 Klonieren von PCR Produkten 120
6.1.2 Klonieren mit Rekombinase Systemen 123
6.2 Mit welchen Vektoren klonieren? 126
6.2.1 Plasmide 126
6.2.2 Phagen 129
6.2.3 Cosmide 131
6.2.4 PACs und BACs 131
6.2.5 YACs 132
6.3 Welche Bakterien? 133
6.4 Herstellen kompetenter Zellen und Transformation 134
Inhalt • XI
6.5 Probleme beim Klonieren 139
6.6 Die Lagerung von Klonen 140
7 Wie man DNA aufspürt 142
7.1 Herstellung von Sonden 142
7.1.1 Methoden zur Herstellung markierter Sonden 144
7.2 Hybridisierung 148
7.3 Nachweis der markierten DNA 150
7.3.1 Autoradiographie 150
7.3.2 Nicht radioaktive Nachweismethoden 152
7.4 Screenen von rekombinanten DNA Banken 155
7.5 Two hybrid System 159
8 DNA Analyse 164
8.1 Sequenzierung 164
8.1.1 Radioaktive Sequenzierung 166
8.1.2 Nicht radioaktive Sequenzierung und automatische
Sequenziergeräte 168
8.1.3 Kurioses zum Thema Sequenzieren: Octamere 170
8.2 Methoden zur Analyse von DNA auf Mutationen 171
8.2.1 Restriktionsfragment Längenpolymorphismus(RFLP) 171
8.2.2 Single Strand conformation polymorphism (SSCP) 172
8.2.3 Denaturierende Gradientengelelektrophorese (DGGE) 174
8.2.4 Temporal temperature gradient electrophoresis (TTGE) 176
8.2.5 Heteroduplexanalyse (HA) 177
8.2.6 ARMS 177
8.2.7 Enzymatische Spaltung von Fehlpaarungen (enzyme mismatch
cleavage, EMC) 177
8.2.8 Protein truncation test (PTT) 179
9 Untersuchung der Funktion von DNA Sequenzen 181
9.1 Untersuchung der Transkription in Geweben 182
9.1.1 Ribonuclease protection assay (RPA) 182
9.1.2 Real time quantitative PCR (RTQ PCR) 183
9.1.3 in situ Hybridisierung 183
9.1.4 Chromosomale Lokalisierung eines Gens (FISH) 186
9.1.5 in situ PCR 188
9.1.6 Microarrays 188
9.2 Mutagenese 194
9.3 in vitro Translation 203
9.4 Expressionssysteme 205
9.4.1 Bakterielle Expressionssysteme 205
9.4.2 Baculovirus Expressionssysteme 206
Xn • Inhalt 9.4.3 Heterologe Expression in Säugerzellen 208
9.4.4 Weitere Expressionssysteme 210
9.4.5 Transfektionsmethoden 211
9.4.6 Kotransfektion mehrerer Gene 219
9.4.7 Transiente und stabile Transfektionen 219
9.4.8 Reportergene 221
9.5 Transgene Mäuse 227
9.5.1 Methoden des Gentransfers 228
9.6 Regulation der Transgenexpression 234
9.6.1 Das Tet System 234
9.6.2 Das Ecdyson System 235
9.7 Gentherapie 236
9.8 Genomik 238
10 Der Computer und Du 242
11 Zu guter Letzt 247
12 Anhang 249
12.1 Nützliche Tabellen 249
12.2 Standardlösungen 250
12.3 Glossar 252
13 Wer, was, wo? 256
13.1 Lieferanten / Adressen 256
13.2 Literatur 260
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