Die Auswirkung von Hypothermie auf die Expression von Apoptose-assoziierten Proteinen nach inkompletter cerebraler Ischämie bei der Ratte:
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München
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2001
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 5
2. Schrifttum 7
2.1 Das Gehirn 7
2.1.1 Stoffwechsel und Blutversorgung des Gehirns 7
2.1.2 Der Hippocampus 8
2.2 Cerebrale Ischämie 10
2.2.1 Definition der cerebralen Ischämie 10
2.2.2 Formen der cerebralen Ischämie 10
2.2.3 Mechanismen und Folgen des ischämischen Zellschadens 11
2.2.3.1 Nekrose 11
2.2.3.2 Apoptose 14
2.2.3.3 Apoptose assoziierte Proteine 16
2.3 Hypothermie 19
2.3.1 Neuroprotektive Wirkung der Hypothermie 20
2.3.2 Nebenwirkungen der Hypothermie 20
2.3.3 Hypothermie und cerebrale Ischämie 22
3. Eigene Untersuchungen 27
3.1 Zielvorstellungen / Aufgabenstellung 27
3.2 Material und Methodik 28
3.2.1 Versuchstiere 28
3.2.2 Versuchsplan 29
3.2.3 Narkose und maschinelle Beatmung 32
3.2.4 Präparation der Gefäßzugänge 34
3.2.5 Narkose Monitoring 35
3.2.6 Das Ischämiemodell 38
3.2.6.1 Versuchsdurchführung 38
3.2.6.2 Resektion und Verarbeitung des Gehirngewebes 40
3.2.6.2.1 Dekapitierung 40
3.2.6.2.2 Präparation, Entnahme und Einfrieren des Gehirns 40
3.2.6.2.3 Schneiden des Gehirns 41
3.2.7 Untersuchung des Gehirns 43
3.2.7.1 Hämatoxylin Eosin (H E ) Färbung 43
3.2.7.1.1 Färbung der Gehirnschnitte 43
3.2.7.1.2 Mikroskopische Untersuchung 44
3.2.7.1.3 Auswertung 44
3.2.7.2 Immunfluoreszenz Färbung 44
3.2.7.2.1 Färbung der Gehirnschnitte 45
3.2.7.2.2 Untersuchung mit dem konfokalen Laserscan Mikroskop 49
3.2.7.2.3 Auswertung 51
3.2.7.3 Western Blot Analyse 52
3.2.7.3.1 Aufbereitung des Probenmaterials 52
3.2.7.3.2 Polyacrylamid Gelelektrophorese(SDS PAGE) 53
3.2.7.3.3 Elektrotransfer von Proteinen 54
3.2.7.3.4 Immunoblot 55
3.2.7.3.5 Entwicklung 56
3.2.7.3.6 Auswertung 57
3.2.8 Geräte, Antikörper, Chemikalien, Verbrauchsmaterialien und Lösungen für die
histologischen Untersuchungen 58
3.2.9 Statistische Bewertung der Befunde 64
3.3 Ergebnisse 65
3.3.1 Erhobene Parameter während des Versuchs 66
3.3.2 Gehimuntersuchung 79
3.3.2.1 H E Färbung 79
3.3.2.2 Immunfluoreszenz Färbung 81
3.3.2.3 Westem Blot Analyse 89
4. Diskussion 97
4.1 Diskussion der Ergebnisse 99
4.1.1 Messparameter 99
4.1.2 H E Färbung 102
4.1.3 Immunfluoreszenz Färbung 103
4.1.4 Westem Blot Analyse 106
4.2 Diskussion der Methoden 108
4.2.1 Ischämiemodell 108
4.2.2 Bestimmung des Zellschadens nach H E Färbung 111
4.2.3 Semiquantitative Bestimmung und räumliche Verteilung der Proteine nach
Immunfluoreszenz Färbung 112
4.2.4 Bestimmung der Proteinkonzentration durch Westem Blot Analyse 113
4.3 Abschließende Betrachtung und Ausblick 115
5. Zusammenfassung 116
6. Summary 117
8. Literaturverzeichnis 120
9. Danksagungen 129
10. Lebenslauf 130
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