Vergleichende Untersuchungen zur Etablierung einer Langzeitkonservierungsmethode für flüssigkonserviertes Pferdesperma unter besonderer Berücksichtigung verschiedener Verdünnerzusätze, Lagerungstemperaturen und Lagerungsformen:
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| adam_text | Titel: Vergleichende Untersuchungen zur Etablierung einer Langzeitkonservierungsmethode für flüssigkonser
Autor: Hinrichs, Vera
Jahr: 2001
INHALTSVERZEICHNIS
Seite
EINLEITUNG
LTTERATURÜBERSICHT
10
2.1 2.1.1 Das Spermatozoon Stoffwechsel und Energieversorgung der Spermien 10 10
2.1.2 Spennienmotilität und Hyperaktivierung 12
2.1.3 Kapazitation 14
2.1.4 Akrosomreaktion 16
2.1.5 Lipidperoxidation 18
2.2 Grundlagen der Flüssigsamenkonservierung 20
2.2.1 Anforderungen an einen Frischsamenverdünner 20
2.2.1.1 Osmolaritat 21
2.2.1.2 pH-Wert 22
2.3 Bestandteile eines Frischsamenverdünners 22
2.3.1 Milch und Milchprodukte als Verdünnergrundlage 23
2.3.1.1 Native Phosphocaseinate als Milchersatz 26
2.3.2 Eigelb 27
2.3.2.1 Caprogen 30
2.3.3 Verdünner auf der Grundlage von Sahne und Gelantine
(„cream-gel extender ) 31
2.3.4 Verdünner ohne Zusatz tierischer Fremdproteine 32
2.3.4.1 Pflanzliches Lecithin und synthetisch erzeugte Lecithin-
komponenten als Eigelb-Ersatz 33
2.3.5 Zucker aJs Energiequelle 34
2.3.6 Puffer 34
2.3.7 Elektrolyte 36
2.3.8 Antibiotika 37
2.3.9 Membranprotektiva und Antioxidantien 39
2.3.9.1 Bovines Serumalbumin (BSA) 39
2.3.9.2 Polyvinylalkohol (PVA) und Phenylmethansulfonyl-
fluorid(PMSF) 40
2.3.9.3 Antioxidantien 41
2.3.9.3.1 Antioxidativ wirkende Enzymsysteme 41
2.3.9.3.1.1 Superoxiddismutase 41
2.3.9.3.1.2 Katalase 43
2.3.9.3.1.3 Glutathion-Peroxidase/ -Reduktase 44
2.3.9.3.2 Niedermolekulare natürliche Antioxidantien 45
2.3.9.3.2.1 Ascorbinsäure 45
2.3.9.3.2.2 Vitamin E 46
2.3.9.3.2.3 Xanthurensäure 47
2.3.9.3.2.4 Taurin und Hypotaurin 47
2.3.10 Methylxanthin-Derivate 48
2.4 Umgebungsbedingte Einflüsse auf die Frischspennakonservierung 49
2.4.1 Kühliaten 49
2.4.2 Lagerungstemperaturen 50
2.4.3 Lagerungsfonnen und Sauerstoflverfügbaikeit 52
2.5 Langzeitlagerung von flüssigkonserviertem Pferdesperma 54
3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN 55
3.1 Material und Methoden 55
3.1.1 Versuchstiere 55
3.1.2 Samengewinnung 55
3.1.3 Samenuntersuchung 56
3.1.4 Versuchskonzeption 56
3.1.4.1 Aufbereitung des Spermas für Versuch I 57
3.1.4.2 Aufbereitung des Spermas für Versuch II 59
3.1.4.3 Versuch HI - Verdünnervergleich 62
3.1.4.4 Versuch IV - Lagerungsfonnen 64
3.1.4.5 Besamungsversuch und Kontrolle der Besamungsergebnisse 66
3.1.5 Untersuchungsparameter 67
3.1.5.1 Computervideomikrographische Motilitätsanalyse 67
3.1.5.2 Fluoreszenzfärbungen 68
3.1.5.3 Hypoosmotischer Schwellungstest mittels CASY®1 73
3.2 Statistische Auswertung 75
4 ERGEBNISSE 76
4.1 Einfluß verschiedener Puffer, Antioxidantien und des Eigelb-
Zusatzes auf die Spermienmotilität 76
4.1.1 Einfluß verschiedener Puffer 76
4.1.2 Einfluß des Zusatzes von Eigelb 79
4.1.3 Einfluß von Ascorbinsäure und Xanthurensäure in einem mit NaHCOi
gepufferten Magermilchverdünner 82
4.2 Einfluß der Lagerungstemperatur und der Sauerstoffverfügbarkeit auf die
Spermienmotilität über eine Lagerungsdauer von 7 Tagen 85
4.2.1 Verdünnung mit SKMGBA 86
4.2.2 Verdünnung mit Caprogen 88
4.2.3 Verdünnung mit Kenney 89
4.2.4 Vergleich der drei Verdünner untereinander 91
4.3 Versuch III: Verdünnervergleiche 92
4.3.1 Einfluß verschiedener Verdünnungsmedien auf die Motilitat 93
4.3.2 Einfluß verschiedener Verdünnungsmedien auf die Linearität der
Bewegung und die Spermiengeschwindigkeit 95
4.3.3 Morphologie 97
4.3.3.1 Beeinflussung der Membranintegrität (CFDA-PI Färbung) 97
4.3.3.2 Beeinflussung des Kapazitationsstatus (CTC Färbung) 98
4.3.4 Hypoosmotische Belastbarkeit 100
4.4 Versuch IV: Verschiedene Lagerungsformen bei 5°C und 15°C 102
4.4.1 Einfluß der Lagerungsformen auf die Motilität 102
4.4.2 Einfluß der Lagerungsformen auf die Linearität und die Spermien-
geschwindigkeit 104
4.4.3 Morphologie 107
4.4.3.1 Beeinflussung der Membranintegrität (CFDA-PI Färbung) 107
4.4.3.2 Beeinflussung des Kapazitationsstatus (CTC Färbung) 109
4.4.4 Hypoosmotische Belastbarkeit 111
4.5 Ergebnis des Besamungsversuchs 113
5 DISKUSSION 115
5.1 Untersuchungsmethoden 115
5.2 Einfluß verschiedener Puffer, Antioxidantien und des Eigelb-Zusatzes
auf die Spermienmotilität 116
5.3 Einfluß der Lagerungstemperatur, der SauerstoffVerfugbarkeit und der
Lagerungsfonnen 121
5.4 Verdünnervergleich 126
5.5 Schlußbetrachtung 132
6 ZUSAMMENFASSUNG 133
7 SUMMARY 136
8 LITERATURVERZEICHNIS 139
9 ANHANG 164
10 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS 165
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