Nachweis der Nestin-spezifischen Induktion des grün fluoreszierenden Proteins (GFP) in neuralen Vorläuferzellen nach Differenzierung aus einer ES-Zellinie:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
_
1
2
MATERIAL
UND
METHODIK
_
12
2.1
V
EKTOR
19
2.2
T
RANSFEKTION
19
2.3
K
ULTIVIERUNG
DER
S
TAMMZELLEN
20
2.4
D
IFFERENZIERUNGSPROTOKOLLE
22
2.5
F
LUORESCENCE
ACTIVATED
CELL
SORTING
(FACS)
26
2.6
IMMUNZYTOCHEMIE
27
2.7
M
URINE
B
LASTOZYSTEN
UND
E
MBRYONEN
29
2.8
O
RGANOTYPISCHE
S
LICE
-K
ULTUR
UND
K
OKULTIVIERUNG
30
2.9
S
TEREOTAKTISCHE
INTRAZEREBRALE
T
RANSPLANTATION
31
3
ERGEBNISSE
35
3.1
G
RUENFLUORESZENZ
UND
N
ESTIN
-E
XPRESSION
IN
UNDIFFERENZIERTEN
ES-Z
ELLEN
35
3.2
N
ESTIN
-E
XPRESSION
IN
MURINEN
B
LASTOZYSTEN
UND
E
MBRYONEN
40
3.3
F
LUORESZENZMIKROSKOPISCHE
U
NTERSUCHUNG
DER
GFP-E
XPRESSION
IM
R
AHMEN
DER
NEURALEN
D
IFFERENZIERUNG
NACH
DEM
ITSF
N
-P
ROTOKOLL
43
3.4
E
MBRYONALE
M
USKELZELLEN
UND
G
RUENFLUORESZENZ
50
3.5
I
MMUNZYTOCHEMISCHER
N
ACHWEIS
DER
N
ESTIN
-
UND
HNK-1
-E
XPRESSION
IM
V
ERLAUF
DER
NEURALEN
D
IFFERENZIERUNG
NACH
DEM
ITSF
N
-P
ROTOKOLL
52
3.6
G
LIOGENESE
IM
R
AHMEN
DER
D
IFFERENZIERUNG
NACH
DEM
ITSF
N
-P
ROTOKOLL
61
3.7
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
S
PEZIFITAET
DES
ITSF
N
-D
IFFERENZIERUNGSPROTOKOLLS
FUER
NEURALE
VORLAEUFERZELLEN
63
3.8
V
ORKOMMEN
VON
UNDIFFERENZIERTEN
ES-Z
ELLEN
ZU
EINEM
FORTGESCHRITTENEN
ZEITPUNKT
DER
DIFFERENZIERUNG
NACH
DEM
ITSF
N
-P
ROTOKOLL
63
3.9
U
NTERSUCHUNG
ZUR
MITOSEAKTIVITAET
N
ESTIN
-
POSITIVER
Z
ELLEN
MIT
DEM
P
ROLIFERATIONSMARKER
K
I
-67
64
3.10
DER
BASIC
FIBROBLASTICGROWTH
FACTOR
(
B
FGF)
ALS
P
ROLIFERATIONSFOERDERER
DER
NACH
DEM
ITSF
N
-P
ROTOKOLL
DIFFERENZIERTEN
NEURALEN
V
ORLAEUFERZELLEN
66
3.11
D
IFFERENZIERUNGSKAPAZITAET
DER
SELEKTIONIERTEN
NEURALEN
V
ORLAEUFERZELLEN
IN
B27-M
EDIUM
68
3.12
N
ACHWEIS
DER
S
YNAPSENBILDUNG
IN
NACH
DEM
ITSF
N
-P
ROTOKOLL
DIFFERENZIERTEN
EB
S
74
3.13
FLUORESCENCE
ACTIVATED
CELL
SORTING
(FACS)
76
3.14
O
RGANOTYPISCHE
S
LICE
-K
ULTUR
82
3.15
S
TEREOTAKTISCHE
INTRAZEREBRALE
T
RANSPLANTATION
DER
GFP
MARKIERTEN
NEURALEN
V
ORLAEUFERZELLEN
87
4
DISKUSSION
92
4.1
Z
IELSETZUNG
92
4.2
K
RITIK
DER
M
ETHODE
97
4.3
D
ISKUSSION
DER
E
RGEBNISSE
103
4.3.1
N
ESTIN
-E
XPRESSION
DER
UNDIFFERENZIERTEN
ES-Z
ELLEN
,
DER
MURINEN
B
LASTOZYSTEN
UND
E
MBR
YONEN
103
4.3.2
N
EURALE
D
IFFERENZIERUNG
DER
ES-Z
ELLEN
NACH
DEM
ITSF
N
-P
ROTOKOLL
106
4.3.3
F
LUORESCENCEACTIVATEDCELLSORTING
(FACS)
HO
4.3.4
ORGANOTYPISCHE
SLICE-KUL
TUR
UND
INTRAZEREBRALE
STEREOTAKTISCHE
T
RANSPLANTATION
112
4.4
S
CHLUSSFOLGERNDE
B
ETRACHTUNG
UND
A
USBLICK
115
5
ZUSAMMENFASSUNG
116
6
SUMMARY
118
7
LITERATURVERZEICHNIS
_
120 |
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