Isolierung und Charakterisierung rekombinanter antiidiotypischer Antikörperfragmente gegen den Kohlenhydrat-erkennenden monoklonalen Antikörper HNK-1:
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| Format: | Buch |
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2001
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V
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
X
1
EINLEITUNG
1
1.1
DAS
HNK-1-KOHLENHYDRAT
1
1.1.1
STRUKTUR
DES
HNK-1-KOHLENHYDRATES
1
1.1.2
BIOSYNTHESE
DES
HNK-1-KOHLENHYDRATES
2
1.1.3
VORKOMMEN
DES
HNK-1-KOHLENHYDRATES
4
1.1.4
MOEGLICHE
FUNKTIONEN
DES
HNK-1-KOHLENHYDRATES
IM
NERVENSYSTEM
4
1.1.5
DAS
HNK-1-KOHLENHYDRAT
UND
AUTOIMMUNE
ERKRANKUNGEN
DES
PERIPHEREN
NERVENSYSTEMS
8
1.2
DAS
HNK-1-KOHLENHYDRAT
IM
EXPERIMENT
9
1.2.1
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
DAS
HNK-1-KOHLENHYDRAT
9
1.2.2
SYNTHESE
UND
ISOLIERUNG
DES
HNK-1-KOHLENHYDRATES
10
1.3
DIE
PHAGE-DISPLAY-TECHNLK
ZUR
ISOLIERUNG
REKOMBINANTER
ANTIKOERPER
10
1.3.1
KURZE
BESCHREIBUNG
DER
VERWENDETEN
ANTIKOERPERBIBLIOTHEK
11
1.3.2
PRINZIP
DER
PHAGE-DISPLAY-TECHNLK
11
1.3.2.1
KONSTRUKTION
DER
ANTIKOERPERBIBLIOTHEK
11
1.3.2.2
PRAESENTATION
VON
ANTIKOERPERFRAGMENTEN
AUF
DER
OBERFLAECHE
VON
PHAGEN
12
1.3.2.3
AFFINITAETSSELEKTION
UND
PRODUKTION
VON
LOESLICHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTEN
12
1.4
ANTIIDIOTYPISCHE
ANTIKOERPER
13
1.4.1
ANTIIDIOTYPISCHE
ANTIKOERPER
ALS
INNERES
ABBILD
VON
EPITOPEN
13
1.4.2
ANTIIDIOTYPISCHE
ANTIKOERPER
ALS
INNERES
ABBILD
VON
KOHLENHYDRATEPITOPEN
14
1.4.3
REKOMBLNANTE
ANTIIDIOTYPISCHE
ANTIKOERPERFRAGMENTE
15
1.5
ZIEL
DIESER
ARBEIT
16
INHALTSVERZEICHNIS
VI
2
MATERIAL
17
2.1
ZELLEN
17
2.1.1
PRIMAERZELLEN
17
2.1.2
ZELLLINIEN
17
2.2
ANTIKOERPERBIBLIOTHEK
17
2.3
BAKTERIENSTAEMME
UND
BAKTERIOPHAGEN
18
2.3.1
BAKTERIENSTAEMME
18
2.3.2
BAKTERIOPHAGEN
18
2.4
EINWEGGEFAESSE
FUER
DIE
ZELL
UND
BAKTERIENKULTUR
18
2.5
ANTIKOERPER
19
2.5.1
PRIMAERE
ANTIKOERPER
19
2.5.2
SEKUNDAERE
ANTIKOERPER
19
2.6
VERSCHIEDENE
BIOLOGISCHE
SUBSTANZEN
20
2.7
CHEMIKALIEN
21
2.8
ALLGEMEINE
STAMMLOESUNGEN
UND
PUFFER
21
2.9
SOFTWARE
22
3
METHODEN
23
3.1
REINIGUNG
VON
MAK
412
23
3.1.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
23
3.1.2
PUFFERWECHSEL
UND
KONZENTRIERUNG
24
3.2
PRODUKTION
UND
REINIGUNG
VON
MAK
HNK-1
25
3.2.1
KULTUR
VON
HYBRIDOMZELLEN
25
3.2.1.1
PRAEPARATION
VON
YYFEEDER
"
-ZELLEN
AUS
DER
MAUS
25
3.2.1.2
KULTUR
UND
REKLONIERUNG
DER
HYBRIDOMZELLEN
ZUR
PRODUKTION
VON
MAK
HNK-1
26
3.2.1.3
TESTEN
DER
HYBRIDOMZELLKLONE
IM
ELISA
26
3.2.1.4
ANTIKOERPERPRODUKTION
27
3.2.2
AUFBEREITUNG
DES
HYBRIDOMZELLKULTURUEBERSTANDES
FUER
DIE
CHROMATOGRAPHIE
27
3.2.3
KATIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
28
3.2.3.1
UEBERPRUEFUNG
DER
SAEULE
MITTELS
PROTEIN-TEST-STANDARDS
28
INHALTSVERZEICHNIS
VIII
4
ERGEBNISSE
48
4.1
REINIGUNG
VON
MAK
412
48
4.1.1
AFFLNRTAETSCHROMATOGRAPHIE
VON
MAK412
48
4.1.2
PROTEINANTEILE
DER
VERSCHIEDENEN
MAK-4
1
2-REINIGUNGSFRAKTIONEN
49
4.1.3
BESTIMMUNG
DER
REINHEIT
DES
GEREINIGTEN
MAK
412
49
4.1.4
ANTIGENBINDUNG
DES
GEREINIGTEN
MAK
412
50
4.2
REINIGUNG
VON
MAK
HNK-1
52
4.2.1
KATIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
VON
MAK
HNK-1
52
4.2.1.1
UEBERPRUEFUNG
DER
SAEULE
MITTELS
PROTEIN-TEST-STANDARDS
52
4.2.1.2
KATIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
53
4.2.2
PROTEINANTEILE
DER
VERSCHIEDENEN
MAK-HNK-1
-REINIGUNGSFRAKTIONEN
55
4.2.3
BESTIMMUNG
DER
REINHEIT
DES
GEREINIGTEN
MAK
HNK-1
56
4.2.4
ANTIGENBINDUNG
DES
GEREINIGTEN
MAK
HNK-1
57
4.3
ISOLIERUNG
VON
REKOMBINANTEN
ANTIIDIOTYPISCHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTEN
58
4.3.1
NACHWEIS
SPEZIFISCH
BINDENDER
ANTIKOERPERPHAGEN
59
4.3.1.1
ANREICHERUNG
VON
ANTIKOERPERPHAGEN
59
4.3.1.2
ANTIGENBINDUNG
DER
.POLYKLONALEN
"
ANTI-MAK-HNK-1
-ANTIKOERPERPHAGEN
60
4.3.2
NACHWEIS
SPEZIFISCH
BINDENDER
MONOKLONALER
LOESLICHER
ANTI-MAK-HNK-1
-
ANTIKOERPERFRAGMENTE
61
4.4
STRUKTURELLE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTI-MAK-HNK-1-ANTIKOERPERFRAGMENTE
62
4.4.1
SEQUENZEN
DER
ANTI-MAK-HNK-1-ANTIKOERPERFRAGMENTE
62
4.4.2
PRIMAERSTRUKTUR
DER
V
H
-DOMAENEN
DER
ANTI-MAK-HNK-1
-ANTIKOERPERFRAGMENTE
62
4.4.3
AUSWAHL
VON
ANTIKOERPERFRAGMENTEN
FUER
WEITERE
EXPERIMENTE
64
4.5
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTI-MAK-HNK-1
-ANTIKOERPERFRAGMENTE
65
4.5.1
AFFINITAET
DER
ANTI-MAK-HNK-1-ANTIKOERPERFRAGMENTE
65
4.5.2
SPEZIFITAET
DER
ANTI-MAK-HNK-1-ANTIKOERPERFRAGMENTE
67
4.5.2.1
BINDUNG
DER
ANTI-MAK-HNK-1-ANTIKOERPERFRAGMENTE
AN
VERSCHIEDENE
ANTIGENE
67
4.5.2.2
INHIBITIONSEXPERIMENTE
68
4.6
EINSATZ
DER
ANTI-MAK-HNK-1
-ANTIKOERPERFRAGMENTE
AN
GEWEBE
MIT
POTENTIELLEN
BINDUNGSPARTNEM
71
4.6.1
BINDUNG
DER
ANTI-MAK-HNK-1-ANTIKOERPERFFAGMENTE
AN
SUBZELLULAERE
FRAKTIONEN
AUS
MAUSHIM
71
VII
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.3.2
REINIGUNG
VON
MAK
HNK-1
DURCH
KATIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
29
3.2.4
HERSTELLUNG
DER
IGM-FRAKTION
29
3.3
ISOLIERUNG
VON
REKOMBINANTEN
ANTIIDIOTYPISCHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTEN
30
3.3.1
DURCHFUEHRUNG
DER
SELEKTIONSRUNDEN
30
3.3.2
HERSTELLUNG
VON
MONOKLONALEN
LOESLICHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTEN
32
3.4
PLASMID-DNA-ISOLIERUNG
UND
-SEQUENZIERUNG
33
3.4.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
33
3.4.2
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID-DNA
33
3.5
BIA-BINDUNGSSTUDIEN
34
3.5.1
DURCHFUEHRUNG
DER
BINDUNGSEXPERIMENTE
34
3.5.2
ANALYSE
DER
MESSDATEN
34
3.6
ELISA
35
3.6.1
ELISA
FUER
DIE
ANTIKOERPERPRODUKTION
UND
-REINIGUNG
35
3.6.2
ELISA
FUER
DIE
ANTIKOERPERPHAGEN
UND
-FRAGMENTE
36
3.6.3
INHIBITIONS-ELISA
36
3.6.4
STATISTIK
37
3.7
PRAEPARATION
VON
SUBZELLULAEREN
FRAKTIONEN
AUS
MAUSHIM
37
3.8
PRIMAERZELLKULTUR
VON
CEREBELLUMZELLEN
AUS
DER
MAUS
39
3.9
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
40
3.9.1
IMMUNZYTOCHEMIE
40
3.9.1.1
IMMUNZYTOCHEMIE
MIT
PERMEABILISIERUNG
41
3.9.1.2
IMMUNZYTOCHEMIE
OHNE
PERMEABILISIERUNG
41
3.9.2
IMMUNHISTOCHEMIE
42
3.9.2.1
GEHIMSCHNITTE
42
3.9.2
2
GEFRIERSCHNITTE
VON
FEMORALISNERVEN
43
3.10
ALLGEMEINE
METHODEN
43
3.10.1
PROTEINBESTIMMUNG
43
3.10.2
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
44
3.10.2.1
COOMASSIEFAERBUNG
45
3.10.2.2
SILBERFAERBUNG
46
3.10.3
IMMUNOBLOT
46
3.10.3.1
TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
EINE
MEMBRAN
47
3.10.3.2
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
AN
MEMBRANEN
47
IX
INHALTSVERZEICHNIS
4.6.1.1
ELISA
72
4.6.1.2
IMMUNOBLOT
73
4.6.2
BINDUNG
DER
ANTI-MAK-HNK-1
-ANTIKOERPERFRAGMENTE
AN
CEREBELLUMZELLEN
AUS
DER
MAUS
75
4.6.3
BINDUNG
DERANTI-MAK-HNK-1-ANTIKOERPERFRAGMENTE
AN
GEWEBESCHNITTE
77
4.6.3.1
BINDUNG
DER
ANTI-MAK-HNK-1-ANTIKOERPERFRAGMENTE
AN
GEHIMSCHNITTE
AUS
DER
ADULTEN
MAUS
IM
BEREICH
DES
CEREBRALEN
CORTEX
UND
DES
HIPPOCAMPUS
77
4.6.3.2
BINDUNG
DER
ANTI-MAK-HNK-1
-ANTIKOERPERFRAGMENTE
AN
GEFRIERSCHNITTE
VON
POSTNATALEN
FEMORALISNERVEN
AUS
DER
MAUS
80
6
DISKUSSION
82
5.1
ISOLIERUNG
VON
ANTIIDIOTYPISCHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTEN
82
5.2
STRUKTURELLE
EIGENSCHAFTEN
DER
ANTIIDIOTYPISCHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTE
83
5.3
AFFINITAET
DER
ANTIIDIOTYPISCHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTE
85
5.4
SPEZIFITAET
DER
ANTIIDIOTYPISCHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTE
85
5.5
BINDUNG
DER
ANTIIDIOTYPISCHEN
ANTIKOERPERFRAGMENTE
AN
GEWEBE
MIT
POTENTIELLEN
BINDUNGSPARTNEM
89
5.6
SCHLUSSFOLGERUNG
UND
AUSBLICK
92
6
ZUSAMMENFASSUNG
/
SUMMSRY
94
6.1
ZUSAMMENFASSUNG
94
6.2
SUMMARY
96
7
LITERATUR
98
8
ANHANG
110 |
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| spelling | Albert, Eva Martine Verfasser aut Isolierung und Charakterisierung rekombinanter antiidiotypischer Antikörperfragmente gegen den Kohlenhydrat-erkennenden monoklonalen Antikörper HNK-1 von Eva Martine Albert 2001 XI, 116 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Hohenheim, Univ., Diss., 2001 Hochschulschrift gtt Anti-idiotypischer Antikörper (DE-588)4224874-7 gnd rswk-swf Kohlenhydrate (DE-588)4164517-0 gnd rswk-swf Monoklonaler Antikörper (DE-588)4040094-3 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Anti-idiotypischer Antikörper (DE-588)4224874-7 s Monoklonaler Antikörper (DE-588)4040094-3 s Kohlenhydrate (DE-588)4164517-0 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=009572151&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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