Mukosa-assoziierte Abwehrmechanismen bei der experimentellen murinen Yersiniose:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. EINLEITUNG
1.1.
Y. ENTEROCOLITICA 1
1.1.1. KLINISCHES BILD DER HUMANEN YERSINIOSE 1
1.1.2. PATHOGENITAETSFAKTOREN VON
Y. ENTEROCOLITICA 1
1.1.3. INFEKTIONSIMMUNOLOGIE DER MURINEN YERSINIOSE -
YY
5
1.2. CHEMOKINE 6
1.3. DAS MUKOSALE IMMUNSYSTEM 8
1.3.1. KOMPONENTEN DES MUKOSALEN IMMUNSYSTEMS 8
1.3.2. M-ZELLEN 9
1.3.3 SEKRETORISCHES IGA 9
1.4. KOLOSTRALE ANTIKOERPER 10
1.5. ZIELSETZUNG 12
2. MATERIAL UND METHODEN
2.1. MATERIAL 13
2.1.1. GERAETE 13
2.1.2. MATERIALIEN UND CHEMIKALIEN , 14
2.1.3. ANTIKOERPER UND ANTISEREN 14
2.1.4. SYNTHETISCHE OLIGONUKLEOTIDE 15
2.1.5. ELEKTROPHORESEMARKER 17
2.1.6. BAKTERIENSTAEMME 17
2.1.7. ZELLINIEN 17
2.1.8. VERSUCHSTIERE 17
2.1.9. MEDIEN UND NAEHRBOEDEN 18
2.1.10. PUFFER UND LOESUNGEN 19
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.2. METHODEN 22
2.2.1. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 22
2.2.1.1. RNA-ISOLIERUNG AUS GEWEBE MIT TRIZOL 22
2.2.1.2. REVERSE TRANSKRIPTION 22
2.2.1.3. AMPLIFIZIERUNG DER CDNA DURCH DIE POLYMERASEKETTENREAKTION 22
2.2.1.4. AGAROSE-GELELEKTROPHORESE ZUR DARSTELLUNG VON DNA-
FRAGMENTEN 23
2.2.2. ANALYSE VON PROTEINEN 23
2.2.2.1. SDS-POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE VON PROTEINEN 23
2.2.2.2. COOMASSIE BLUE-FAERBUNG VON PROTEINEN 24
2.2.2.3. IMMUNOBLOT ~ 24
2.2.2.4. REINIGUNG VON "
YERSINIA OUTER PROTEINS" (YOPS) 25
2.2.2.5. ANTIGEN-ELISA 25
2.2.2.6. IFN-Y, TNF-A UND IL-6 ELISA 25
2.2.3. MIKROBIOLOGISCHE METHODEN 26
2.2.3.1. MAUSPASSAGE VON BAKTERIEN 26
2.2.3.2. HERSTELLUNG VON HITZEGETOETETEN BAKTERIEN (HKY) 26
2.2.3.3. ANZUCHT VON BAKTERIEN FUER INFEKTIONSVERSUCHE 26
2.2.4. ZELLKULTURTECHNIKEN 27
2.2.4.1. EINFRIEREN VON ZELLEN 27
2.2.4.2. AUFTAUEN UND KULTIVIEREN VON ZELLEN 27
2.2.4.3. GEWINNUNG VON ZELLKULTURUEBERSTAENDEN 27
2.2.5. HERSTELLUNG MONOKLONALER IGA-ANTIKOERPER GEGEN
Y. ENTEROCOLITICA
SPEZIFISCHE ANTIGENE / 28
2.2.5.1. INFEKTION VON BALB/C-MAEUSEN UND ISOLIERUNG DER PEYERSCHEN
PLAQUES LYMPHOZYTEN 28
2.2.5.2. VORBEREITUNG DER P3X63-AG8/653 MAUS-MYELOMAZELLEN 28
2.2.5.3. FUSION UND SELEKTION 28
2.2.5.4. SUBKLONIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG 29
2.2.6. IGA-ANTIKOERPER 29
2.2.6.1. ISOLIERUNG VON ANTIKOERPERN AUS STUHL- UND DARMPROBEN 29
2.2.6.2. BESTIMMUNG DER IGA-KONZENTRATION MITTELS SANDWICH-ELISA 31
2.2.7. PHAENOTYPISIERUNG VON BLUTLYMPHOZYTEN MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE 31
2.2.8.
IN VIVO UNTERSUCHUNGEN 31
2.2.8.1. INFEKTION VON MAEUSEN 31
2.2.8.2. GEWINNUNG VON SERUM, STUHLPROBEN UND MUKOSALEN SEKRETEN 31
2.2.8.3. BESTIMMUNG DER KEIMZAHL NACH INFEKTION 32
2.2.8.4. IGA "BACKPACK" TUMORMODELL ' 33
2.2.9. HISTOLOGISCHE METHODEN 33
2.2.9.1. AMINOALKYLSILAN-BESCHICHTUNG VON OBJEKTTRAEGERN 33
2.2.9.2. HE-FAERBUNG 33
2.2.10. STATISTISCHE BEWERTUNG DER ERGEBNISSE 34
3. ERGEBNISSE
3.1. DAS INTESTINALE MAUSINFEKTIONSMODELL 35
3.1.1. BESIEDELUNG DER ORGANE UND MORPHOLOGISCHE VERAENDERUNG DER
PEYERSCHEN PLAQUES 35
3.1.2. ZYTOKIN MRNA-EXPRESSION IN DEN PEYERSCHEN PLAQUES NACH
OROGASTRALER INFEKTION MIT
Y. ENTEROCOLITICA SPP. 37
3.1.3. ZYTOKINPRODUKTION IN DEN PEYERSCHEN PLAQUES NACH OROGASTRALER
INFEKTION MIT
Y. ENTEROCOLITICA 03 108-P 40
3.1.4. ANTIKOERPERANTWORT NACH P.O.-INFEKTION MIT
Y. ENTEROCOLITICA SPP. 42
3.1.4.1. KINETIK DER ANTIKOERPERANTWORT NACH P.O.-INFEKTION MIT
Y ENTEROCOLITICA
08 WA-P 42
3.1.4.2. KINETIK DER ANTIKOERPERANTWORT NACH P.O.-INFEKTION MIT
Y. ENTEROCOLITICA
03 108-P / 43
3.2. IMMUNITAET GEGEN EINE
Y. ENTEROCOLITICA-LNFEKTION 46
3.2.1. ORALE IMMUNISIERUNG MIT
Y. ENTEROCOLITICA SPP. 46
3.2.2. DREIMALIGE IMMUNISIERUNG MIT
Y. ENTEROCOLITICA 03 108-P 48
3.2.2.1. ANTIKOERPERGEHALT IN SERUM UND FAEZES 51
3.2.2.2. DREIMALIGE IMMUNISIERUNG MIT
Y. ENTEROCOLITICA 03 108-P UND
ANSCHLIESSENDE
IN VIVO DEPLETION VON CD4+ T-ZELLEN 53
3.3. IMMUNSCHUTZ GEGEN EINE INTESTINALE
Y. ENTEROCOLITICA-LNFEKTION
DURCH SPEZIFISCHE MONOKLONALE ANTIKOERPER 54
3.3.1. DAS HYBRIDOMA "BACKPACK" TUMORMODELL 54
3.3.2. MONOKLONALER IGA-ANTIKOERPER GEGEN YADA 5 5
3.3.3. ANTI-YADA "BACKPACK'TUMOR 56
3.3.4. NACHWEIS DER SPEZIFISCHEN IGA-ANTIKOERPER IN SERUM UND DARM
LUMEN NACH DER INDUKTION EINES ANTI-YADA "BACKPACK" TUMORS 57
3.3.5. SCHUTZ NACH INTESTINALER
Y. ENTEROCOLITICA 08 WA-P INFEKTION 58
3.3.6. SCHUTZ NACH PARENTERALER
Y. ENTEROCOLITICA 08 WA-P INFEKTION 59
3.4. KOLOSTRALE ANTIKOERPER 60
3.4.1. VERGLEICH ZWISCHEN STANDARDKOLOSTRUM UND HYPERIMMUN
KOLOSTRUM 61
3.4.2. IMMUNISIERUNGSSTRATEGIE 62
3.4.3. GESUNDHEITLICHE BEURTEILUNG DER KUEHE NACH DEN IMPFUNGEN 63
3.4.4. ELISA VON SEREN UND KOLOSTREN 65
4. DISKUSSION
4.1. DAS INTESTINALE MAUSINFEKTIONSMODELL 70
4.1.1. ZYTOKIN UND CHEMOKIN MRNA-EXPRESSION IN DEN PEYERSCHEN
PLAQUES 70
4.1.2. KINETIK DER ANTIKOERPERANTWORT 74
4.2. IMMUNISIERUNG MIT
Y. ENTEROCOLITICA 03 76
4.3. HYBRIDOMA "BACKPACK" TUMORMODELL 79
4.4. KOLOSTRALE ANTIKOERPER 81
4.5. AUSBLICK 85
5. ZUSAMMENFASSUNG / 87
6. LITERATURVERZEICHNIS 91
7. ABKUERZUNGEN 104
8. ANHANG
106 |
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