Mutationssuche im Prostate-Carcinoma-Tumor-Antigen-1-(PCTA-1)-Gen, einem Kandidatengen für das hereditäre Prostatakarzinom beim Mensch, lokalisiert auf dem PCaP Locus in 1q42.3-43:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.
LITERATURUEBERSICHT
2
1.1.
DAS
PROSTATAKARZINOM
2
1.1.1.
INZIDENZ
UND
AETIOLOGIE
2
1.1.2.
HISTOLOGIE,
KLINIK
UND
THERAPIE
3
1.1.3.
PROSTATAKARZINOM
IN
TUMORFAMILIEN
5
1.2.
GENETISCHE
PRAEDISPOSITION
FUER
DAS
PROSTATAKARZINOM
6
1.2.1.
EPIDEMIOLOGISCHE
STUDIEN
6
1.2.1.1.
FAMILIENSTUDIEN
6
1.2.1.2.
ZWILLINGSSTUDIEN
7
1.2.13.
FALL-KONTROLL-STUDIEN
7
1.2.1.4.
SEGREGATIONSANALYSEN
8
1.2.2.
SUCHE
NACH
KANDIDATENGENEN
9
1.2.2.1.
ASSOZIATIONSSTUDIEN
9
1.2.2.2.
MUTATIONSSUCHE
IN
BEKANNTEN
TUMORSUPRESSORGENEN
11
1.2.2.3.
LINKAGE
ANALYSEN
12
13.
DAS
HUMANE
GALECTIN-8
ALS
KANDIDATENGEN
FUER
DAS
HEREDITAERE
PROSTATAKARZINOM
17
1.3.1.
AUFBAU
UND
EINTEILUNG
DER
GALECTINE
17
1.3.2.
VERBREITUNG
UND
BIOLOGISCHE
FUNKTIONEN
18
1.3.3.
BETEILIGUNG
VON
GALECTINEN
AN
DER
TUMORGENESE
18
1.4.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
20
2.
PATIENTEN,
MATERIAL
UND
METHODEN
21
2.1.
PATIENTEN
21
2.1.1.
FAMILIEN
21
2.1.2.
PATIENTEN
MIT
SPORADISCHEM
PROSTATAKARZINOM
UND
KONTROLLEN
21
2.2.
DNA-EXTRAKTION
AUS
BLUT
22
23.
BESTIMMUNG
VON
DNA-KONZENTRATIONEN
22
2.3.1.
ABSCHAETZUNG
DER
DNA-KONZENTRATION
IM
AGAROSE-GEL
22
2.3.2.
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DER
DNA-KONZENTRATION
23
2.4.
DIE
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
23
2.4.1.
PRINZIP
23
2.4.2.
REAKTIONSANSATZ
24
II
2.4.3.
PRIMERAUSWAHL
UND
OPTIMIERUNG
DER
PCR-BEDINGUNGEN
25
2.5.
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
29
2.6.
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
MIT
ALFERPRESS
30
2.7.
ENZYMATISCHE
MUTATIONSDETEKTION
31
2.8.
KLONIERUNG
34
2.9.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
36
2.10.
SEQUENZANALYSE
NACH
SANGER
37
2.10.1.
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
38
2.10.2.
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMIDEN
38
2.10.3.
SEQUENZGEL
UND
LAUFBEDINGUNGEN
39
2.11.
RESTRIKTION
VON
DNA
40
3.
ERGEBNISSE
42
3.1.
KOPPLUNGSANALYSE
ZUR
AUSWAHL
DER
FAMILIEN
42
3.2.
ETABLIERUNG
DER
ENZYMATISCHEN
MUTATIONSETEKTION
(EMD)
45
3.2.1.
POSITIVKONTROLLE
DER
HERSTELLERFIRMA
46
3.2.2.
MUTATIONSSUCHE
IM
BRCA1
UND
BRCA2
GEN
47
3.2.3.
AUSWERTUNG
DER
ELEKTROPHEROGRAMME
49
33.
UNTERSUCHUNG
VON
PCTA-1
MIT
HILFE
DER
ENZYMATISCHEN
MUTATIONSDETEKTION
(EMD)
50
3.3.1.
GENOMISCHE
STRUKTUR
VON
PCTA
1
50
3.3.2.
UNTERSUCHUNG
VON
EXON
3
DES
PCTA-1
GEN
51
3.3.3.
UNTERSUCHUNG
VON
EXON
4
DES
PCTA-1
GENS
52
3.3.4.
UNTERSUCHUNG
VON
EXON
5
DES
PCTA-1
GENS
54
3.3.5.
UNTERSUCHUNG
VON
EXON
6
DES
PCTA-1
GENS
56
3.3.6.
UNTERSUCHUNG
VON
EXON
7
UND
EXON
8
DES
PCTA-1
GENS
59
3.3.7.
UNTERSUCHUNGVONEXON9DESPCTA-L
GENS
59
3.3.8.
UNTERSUCHUNG
VON
EXON
10
DES
PCTA-1
GENS
60
3.3.9.
UNTERSUCHUNG
VON
EXON
11
DES
PCTA-1
GENS
60
3.4.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
MIT
EMD
GEFUNDENEN
SEQUENZVARIANTEN
60
3.5.
VERGLEICH
DER
ERHALTENEN
DATEN
MIT
DER
EST-DATENBANK
61
3.6.
RESTRIKTIONSANALYSE
62
3.6.1.
RESTRIKTIONSANALYSE
DER
POLYMORPHISMEN
IN
EXON
4
62
3.6.2.
RESTRIKTIONSANALYSE
DES
POLYMORPHISMUS
IN
EXON
9
65
III
3.6.3.
ERGEBNISSE
DER
RESTRIKTIONSANALYSE
VON
EXON
4
UND
9
67
4.
DISKUSSION
69
5.
ZUSAMMENFASSUNG
77
6.
SUMMARY
79
7.
MATERIALLISTE
81
7.1.
CHEMIKALIEN
81
7.2.
ENZYME
81
73.
LANGENSTANDARDS
81
7.4.
PRIMER
82
73.
REAGENTIENSYSTEME
(KITS)
82
7.6.
LOESUNGEN,
PUFFER,
KULTURMEDIEN
82
7.7.
GERATE
UND
HILFSMITTEL:
83
73.
SOFTWARE
83
8.
LITERATURVERZEICHNIS
84
9.
DANKSAGUNG
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