Modulation der interendothelialen Permeabilität an der BHS:
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2001
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I
INHALTSVERZEICHNS
1 VORWORT UND PROBLEMSTELLUNG.1
2 EINLEITUNG.3
2.1 CEREBRALE SCHRANKENSYSTEME.3
2.1.1 DIE BLUT-LIQUOR-SCHRANKE
.4
2.1.2 DIE BLUT-HIRN-SCHRANKE
.5
2.1.2.1 AUFBAU DER BLUT-HIRN-SCHRANKE. 5
2.1.2.2 AUFGABEN DER BLUT-HIRN-SCHRANKE.7
2.1.2.3
IN VITRO MODELLE DER BLUT-HIRN-SCHRANKE.10
2.1.2.4 INDUKTION DER BLUT-HIRN-SCHRANKE.11
2.2 ZELL-ZELL- UND ZELL-MATRIX-KONTAKTE.14
2.2.1 ZELL-ZELL-KONTAKTE
.15
2.2.1.1 TIGHT JUNCTION (ZONULA OCCLUDENS).15
2.2.1.2 ADHERENS JUNCTION.21
2.3 KINASEN UND PHOSPHATASEN. 23
2.4 HORMONE.29
2.
4.1 HORMONE DER NEBENNIERENRINDE (NNR).32
2.4.1.1 DIE GLUCOCORTICOIDE.34
2.4.1.2 DIE MINERALOCORTICOIDE.37
2.5 BLUT.38
2.5.1 LYSOPHOSPHATIDSAEURE (LPA)
.39
2.
J. 2 VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR (VEGF).42
3 METHODEN.
44
3.1 ZELLKULTURMETHODEN.
44
3.1.1 CEREBRALE KAPILLAERE ENDOTHELZELLEN AUS SCHWEINEHIRN (PBCEC)
.44
3.1.1.1 SUBKULTIVIERUNG.46
3.1.1.2 BESCHICHTUNG VON KULTURGEFAESSEN.47
3.1.1.3 EINFRIEREN UND AUFTAUEN.48
3.1.1.4 MEDIUMWECHSEL.49
3.1.2 CEREBRALE ASTROCYTEN AUS RATTE
.49
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/963017217
II
3.1.2.1 PRAEPARATION.
3.1.2.2 KULTIVIERUNG.
3.1.3 GEWINNUNG KONDITIONIERTER MEDIEN
.
3.1.4 PRAEPARATION VON RATTEMCHWANZCOLLAGEN
.
3.2
BESTIMMUNG DES GESAMTPROTEINGEHALTS MIT BICINCHONINSAEURE.
3.3
MIKROSKOPISCHE METHODEN.
3.3.1 FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
3.3.1.1 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ.
3.3.1.2 FLUORESZENZMARKIERUNG VON FILAMENTOESEM AKTIN.
3.3.1.3 LEBEND/TOD-TEST.
3.3.2 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE (REM).
3.3.3 TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE (TEM)
.
3.3.4 GEFRIERBRUCH (FREEZE FRACTURE).
3.4 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE).
3.5
WESTERN BLOT.
3.5.1 PONCEAU S-FAERBUNG
.
3.5.2 IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS VON PROTEINEN IM WESTERN BLOT
.
3.5.2.1 IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS VON TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNGEN IN
WESTERN BLOTS.
3.5.2.2 IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS VON SERIN-PHOSPHORYLIERUNGEN IN
WESTERN BLOTS.
3.5.3 STRIPPEN VON NITROCELLULOSE-MEMBRANEN
.
3.6 IMMUNPRAEZIPITATION.
3.6.1 HERSTELLUNG EINES ZELLYSATS UND DURCHFUEHRUNG DER
IMMUNPRAEZIPITATION
.
3.6.1.1 ISOLIERUNG EINES IMMUNPRAEZIPITATS MIT HILFE VON PROTEIN
A-SEPHAROSE
3.6.1.2 ISOLIERUNG EINES IMMUNPRAEZIPITATS MIT HILFE VON DYNABEADS .
3.7 PHOSPHATASE-ASSAY.
3.
7.1 HERSTELLUNG DES ROHZELLEXTRAKTS FUER DEN PHOSPHATASE-ASSAY.
3.
7.2 ENTFERNUNG VON ENDOGENEM FREIEN PHOSPHAT.
3.
7.3 DURCHFUEHRUNG DES PHOSPHATASE-A SSAYS.
3.8
UNTERSUCHUNG DER GESAMT-PHOSPHORYLIERUNG DURCH EINBAU VON P.
3.9
MESSUNG DES ELEKTRISCHEN WIDERSTANDS AN KULTIVIERTEN PBCEC.
3.9.1 MESSSYSTEME
.
3.9.1.1 MESSKAMMERN MIT INDIUM-ZINN-OXID (ITO) ALS KULTURSUBSTRAT.
49
50
51
51
51
52
52
52
54
,54
55
56
. 58
.59
.62
.
62
. 63
YY64
.64
.
65
.66
.
67
.61
.68
YY.69
.
69
. 70
. 71
.12
.73
.
73
.74
III
3.9.2 IMPEDANZSPEKTROSKOPIE (IS).74
3.9.3 A USWERTUNG DER IMPEDANZMESSUNGEN
. 78
3.10 FRAKTIONIERUNG VON SERUM.80
3.10.1 GELFILTRATION
.80
3.10.2 ULTRAZENTRIFUGATION
.80
4
ERGEBNISSE. 81
4.1 CHARAKTERISIERUNG DER EINGESETZTEN ZELLTYPEN.81
4.1.1 PRIMAERKULTIVIERTE CEREBRALE KAPILLAERE ENDOTHELZELLEN
.81
4.1.2 ASTROCYTEN.81
4.2 ERGEBNISSE DER IMPEDANZSPEKTROSKOPISCHEN UNTERSUCHUNGEN.83
4.2.1 EINFLUSS VON GLUCOCORTICOIDEN UND MINERALOCORTICOIDEN AUF DIE
DIFFERENZIERUNG VON BCEC
.83
4.2.1.1 EINFLUSS VON GLUCOCORTICOIDEN.83
4.2.1.2 EINFLUSS VON MINERALOCORTICOIDEN.86
4.2.1.3 INHIBITION DES HYDROCORTISON-INDUZIERTEN ANSTIEGS DES TEER VON
BCEC-MONOLAYERN.87
4.2.1.4 EINFLUSS VON CYCLISCHEM ADENOSIN-3',5'-MONOPHOSPHAT (CAMP).88
4.2.1.5 EINFLUSS VON PROTEIN-PHOSPHATASEN. 89
4.2.1.6 EINFLUSS DER MYOSIN-LEICHTKETTENKINASE.95
4.2.2 EINFLUSS VON SERUM UND POTENTIELLEN MODULATOREN AUS SERUM AUF
BCEC.97
4.2.2.1 EINFLUSS VON SERUM.97
4.2.2.2 EINFLUSS POTENTIELLER MODULATOREN AUS SERUM. 104
4.2.3 EINFLUSS KONDITIONIERTER MEDIEN
.114
4.3 HYDROCORTISON-EFFEKTE AUF BCEC.119
4.3.1 EINFLUSS VON HYDROCORTISON UND SERUM AUF DIE LOKALISIERUNG UND
EXPRESSION VON TIGHT JUNCTION PROTEINEN
.119
4.3.2 EINFLUSS VON HYDROCORTISON UND SERUM AUF DIE LOKALISIERUNG UND
EXPRESSION
VON ADHERENS JUNCTION PROTEINEN UND DER FOKALEN ADHAESIONS-KINASE
(FAK). 124
4.3.3 EINFLUSS VON HYDROCORTISON UND SERUM AUF DIE MORPHOLOGIE DER BCEC
.129
4.3.3.1 PHASENKONTRAST-AUFNAHMEN. 129
4.3.3.2 ACTINCYTOSKELETT(PHALLOIDIN-ANFAERBUNG).131
4.3.3.3 REM- UND TEM-AUFNAHMEN.134
4.3.3.4 GEFRIERBRUCH(FREEZE FRACTURE)-AUFNAHMEN. 138
IV
4.3.4 EINFLUSS VON HYDROCORTISON AUF DIE PHOSPHORYLIERUNG VON PROTEINEN
DER
TIGHT JUNCTIONS UND ADHERENS JUNCTIONS
.141
4.3.4.1 TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNG.141
4.3.4.2 SERIN/THREONIN-PHOSPHORYLIERUNGEN.145
4.3.4.3 UNTERSUCHUNG DES GESAMT-PHOSPHORYLIERUNGSGRADS.149
5 DISKUSSION.151
5.1 EINGESETZTE ZELLTYPEN.151
5.
1.1 CEREBRALE KAPILLAERE ENDOTHELZELLEN (BCEC). 151
5.1.2 CEREBRALE ASTROCYTEN
.152
5.2 EINFLUSS
VON GLUCOCORTICOIDEN UND MINERALOCORTICOIDEN AUF DEN TEER. 152
5.3 EINFLUSS
VON SERUM AUF DEN TEER.156
5.4 EINFLUSS
VON KONDITIONIERTEN MEDIEN AUF DEN TEER.168
5.5 EINFLUSS
DER MYOSIN-LEICHTKETTENKINASE AUF DEN TEER.171
5.6 EINFLUSS
VON HYDROCORTISON AUF DIE BCEC-DIFFERENZIERUNG.173
5.
6.1 EINFLUSS VON HYDROCORTISON UND SERUM AUF DIE BCEC-MORPHOLOGIE. 175
5.6.2 EINFLUSS VON HYDROCORTISON UND SERUM AUF DIE LOKALISATION UND
PHOSPHORYLIERUNG DER FOKALEN ADHAESIONS-KINASE
. / 78
5.6.3 EINFLUSS VON HYDROCORTISON AUF DIE LOKALISATION UND
PHOSPHORYLIERUNG
VON TIGHT JUNCTION PROTEINEN
. 181
5.6.4 EINFLUSS VON HYDROCORTISON AUF DIE LOKALISATION UND
PHOSPHORYLIERUNG
VON ADHERENS JUNCTION PROTEINEN
.190
6
ZUSAMMENFASSUNG. 194
7 LITERATURVERZEICHNIS. 197
8 ANHANG.,.220
8.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.220
8.2 MATERIALIEN.223
8.2.1 GERAETE
.223
8.2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN
.224
8.2.3 ERST- UND ZWEIT-ANLIKOERPER
.226
V
8.2.4 ZELLKULTURMATERIALIEN
.
8.2.5 KITS
.
8.2.6 CHEMIKALIEN
.
8.3 FORMELN ZUR AUSWERTUNG DER IMPEDANZSPEKTREN
,
228
. 229
. 229
.231 |
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spelling | Nitz, Thorsten 1971- Verfasser (DE-588)123312345 aut Modulation der interendothelialen Permeabilität an der BHS vorgelegt von Thorsten Nitz 2001 V, 231 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Münster, Univ., Diss., 2001 Gehirn - Kapillarendothel - Blut-Hirn-Schranke - Permeabilität - Hydrocortison - Serum Gehirn (DE-588)4019752-9 gnd rswk-swf Kapillarendothel (DE-588)4300179-8 gnd rswk-swf Serum (DE-588)4463411-0 gnd rswk-swf Permeabilität (DE-588)4173828-7 gnd rswk-swf Blut-Hirn-Schranke (DE-588)4007279-4 gnd rswk-swf Hydrocortison (DE-588)4160902-5 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Gehirn (DE-588)4019752-9 s Kapillarendothel (DE-588)4300179-8 s Blut-Hirn-Schranke (DE-588)4007279-4 s Permeabilität (DE-588)4173828-7 s Hydrocortison (DE-588)4160902-5 s Serum (DE-588)4463411-0 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=009540423&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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