Extrazelluläre Invertasen in Höheren Pflanzen: essentielle Funktionen während der Pollenentwicklung und -keimung
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Taunusstein
Driesen
2001
|
| Schriftenreihe: | Driesen Edition Wissenschaft
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Regensburg, Univ., Diss., 2001 |
| Beschreibung: | 183 S. Ill. : 19 cm |
| ISBN: | 398073448X |
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INHALTSVERZEICHNIS
GELEITWORT
.
5
VORWORT
.
7
INHALTSVERZEICHNIS
.
9
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
15
ZUSAMMENFASSUNG
.
19
EINLEITUNG
.
21
1
EXTRAZELLULAERE
INVERTASEN:
FUNKTION
UND
REGULATION
IN
HOEHEREN
PFLANZEN
.
21
2
POLLENENTWICKLUNG
UND
MAENNLICHE
STERILITAET
.
27
3
BRASSINOSTEROIDE
.
33
4
ZIELSETZUNG
.
37
ERGEBNISSE
.
39
1
IDENTIFIZIERUNG
EINER
SPEZIFISCH
IN
TABAKBLUETEN
EXPRIMIERTEN
INVERTASE
UND
UNTERSUCHUNGEN
ZU
IHRER
FUNKTION
BEI
DER
POLLENENTWICKLUNG
UND
-KEIMUNG
.
39
1.1
CHARAKTERISIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
DES
GENOMISCHEN
INVERTASEKLONS
PNDG8
.
39
1.2
ANALYSE
DES
SPEZIFISCHEN
ZEITLICHEN
UND
RAEUMLICHEN
EXPRESSIONSMUSTERS
VON
NIN88
.
42
1.3
KLONIERUNG
DES
NIN88-PROMOTORS
UND
UEBERPRUEFUNG
DER
KORREKTEN
EXPRESSION
.
46
1.4
GEWEBESPEZIFISCHE
REDUZIERUNG
VON
NIN88-AKTIVITAET
DURCH
ANTISENSE
REPRESSION
ODER
EINEN
INVERTASE-INHIBITOR
VERURSACHT
MAENNLICHE
STERILITAET
.
47
1.4.1
GEWEBESPEZIFISCHE
ANTISENSE
REPRESSION
VON
NIN88
.
47
1.4.1.1
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTISENSE-PFLANZEN
.
48
1.4.1.2
MORPHOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTISENSE-POLLEN
.
51
1.4.1.3
SELEKTIVE
VERRINGERUNG
DER
INVERTASEAKTIVITAET
IM
TAPETUM
UND
IN
SICH
ENTWICKELNDEN
POLLEN
IN
DEN
ANTISENSE-PFLANZEN
.
52
1.4.1.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ENTWICKLUNG
DER
TRANSGENEN
POLLEN
.
55
1.4.2
GEWEBESPEZIFISCHE
REDUZIERUNG
DER
NIN88-AKTIVITAET
DURCH
EINEN
INVERTASE-INHIBITOR
.
58
1.4.2.1
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
INHIBITOR-PFLANZEN
.
59
1.4.2.2
MORPHOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
INHIBITOR-POLLEN
.
60
1.4.2.3
UNTERSUCHUNG
DER
INVERTASEAKTIVITAET
IN
SICH
ENTWICKELNDEN
POLLEN
IN
DEN
INHIBITOR-PFLANZEN
.
61
1.4.2.4
EXTRAZELLULAERE
INVERTASEAKTIVITAET
WAEHREND
DER
POLLENKEIMUNG
.
62
1.4.2.5
ZUCKERAUFNAHME
IN
WILDTYP-UND
INHIBITOR-POLLEN
.
63
1.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SAMENPRODUKTION
IN
DEN
ANTISENSE-PFLANZEN
.
65
1.5.1
FREMDBESTAEUBUNG
DER
ANTISENSE-PFLANZEN
MIT
WILDTYP-POLLEN
.
65
1.5.2
EXPRESSION
VON
NIN88
IN
FRUCHTKNOTEN
UND
POLLEN
.
68
1.6
ANTHERENSPEZIFISCHE
EXPRESSION
DES
NIN88-PROMOTORS
IN
ANDEREN
PFLANZEN
.
69
2
KLONIERUNG
VON
HEXOSETRANSPORTERN
AUS
TABAKANTHEREN
.
71
2.1
KLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
VON
HEXOSETRANSPORTERN
.
71
2.2
EXPRESSIONSANALYSE
DER
HEXOSETRANSPORTER
NT-HTPL
UND
NT-HTP2
.
72
3
GEWEBESPEZIFISCHE
INDUKTION
EINER
EXTRAZELLULAEREN
INVERTASE
AUS
TOMATEN
DURCH
BRASSINOSTEROIDE
.
73
3.1
DIE
EXTRAZELLULAERE
INVERTASEAKTIVITAET
IN
PHOTOAUTOTROPHEN
TOMATENSUSPENSIONSKULTUREN
WIRD
DURCH
BRASSINOSTEROIDE
ERHOEHT
.
73
3.2
BRASSINOSTEROIDE
INDUZIEREN
SPEZIFISCH
DIE
MRNA
DES
EXTRAZELLULAEREN
INVERTASEISOENZYMS
LIN6
.
74
IO
3.3
DIE
ZUCKERAUFNAHME
IN
SUSPENSIONSKULTURZELLEN
WIRD
DURCH
BRASSINOSTEROIDE
STIMULIERT
.
76
3.4
DAS
LOKALISIERTE,
BRASSINOSTEROIDABHAENGIGE
HYPOKOTYL
WACHSTUM
VON
TOMATENKEIMLINGEN
KORRELIERT
MIT
EINER
GEWEBESPEZIFISCHEN
INDUKTION
DER
LIN6
MRNA
.
79
4
ETABLIERUNG
EINER
SCHNELLEN
UND
EINFACHEN
METHODE
ZUR
DETEKTION
NICHT
KOVALENT
GEBUNDENER
PFLANZENZELLWAND-PROTEINE
.
82
DISKUSSION
.
85
1
ANALYSE
DER
REGULATION
UND
FUNKTION
DER
EXTRAZELLULAEREN
INVERTASE
NIN88
.
85
1.1
KLONIERUNG
DER
EXTRAZELLULAEREN
INVERTASE
NIN88
UND
IHRES
PROMOTORS
AUS
NICOTIANA
TABACUM
.
85
1.2
NIN88
BESITZT
EIN
SPEZIFISCHES
ZEITLICHES
UND
RAEUMLICHES
EXPRESSIONSMUSTER
.
87
1.3
ERZEUGUNG
MAENNLICH
STERILER
PFLANZEN
DURCH
REDUZIERUNG
DER
NIN88-AKTIVITAET
IN
POLLEN
.
88
2
SPEZIFISCHE
INDUKTION
DER
EXTRAZELLULAEREN
INVERTASE
LIN6
DURCH
BRASSINOSTEROIDE
.
94
3
AUSBLICK
.
97
MATERIAL
UND
METHODEN
.
101
1
MATERIAL
.
101
1.1
VERWENDETE
ORGANISMEN
.
101
1.1.1
SUSPENSIONSZELLKULTUREN
.
101
1.1.2
PFLANZEN
.
101
1.1.3
ESCHERICHIA
COLI-STAEMME
UND
AGROBAKTERIUMSTAMM
.
102
1.2
VEKTOREN
UND
KLONE
.
102
1.3
ANTIKOERPER
.
103
1.4
OLIGONUKLEOTIDE
.
103
1.5
CHEMIKALIEN,
ENZYME
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
108
1.6
LABORGERAETE
UND
COMPUTERSOFTWARE
.
111
1.7
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
114
1.7.1
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
114
1.7.2
AGROBAKTERIENMINIPREPS
.
115
1.7.3
BRADFORD-PROTEINBESTIMMUNGSTEST
.
115
11
1.7.4
DN
A-MINIPREPS
.
115
1.7.5
GENOMISCHE
DNA-ISOLIERUNG
AUS
PFLANZEN
.
116
1.7.6
INVERTASETESTS
.
116
1.7.7
POLLENUNTERSUCHUNGSMETHODEN
.
116
1.7.8
RNA-ISOLIERUNG
UND
NORTHEMBLOTANALYSEN
.
118
1.7.8.1
RNA-ISOLIERUNG
.
118
1.7.8.2
RNA-GELE,
BLOTTING
UND
NORTHERN-HYBRIDISIERUNG
.
118
1.7.9
SDS-PROTEINGELE
UND
WESTERNBLOTANALYSEN
.
119
1.7.9.1
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
SDS-PROTEINGELEN
.
119
1.7.9.2
SDS-GELE
.
120
1.7.9.3
WESTEMBLOT
.
120
1.8
MEDIEN
.
121
1.8.1
PFLANZENTRANSFORMATIONEN
.
121
2
METHODEN.
124
2.1
ANZUCHT
DER
PFLANZEN,
BEHANDLUNG
UND
ERNTE
DES
VERWENDETEN
PFLANZENMATERIALS
.
124
2.1.1
ANZUCHT
DER
PFLANZEN
.
124
2.1.2
ANZUCHT
DER
SUSPENSIONSKULTUREN
.
125
2.1.3
ERNTE
VON
PFLANZENMATERIAL
.
125
2.1.4
BEHANDLUNG
DER
SUSPENSIONSZELLEN
MIT
TESTSUBSTANZEN
.
126
2.1.5
HYPOKOTYL
WACHSTUMSTEST
MIT
BRASSINOSTEROIDEN
.
126
2.2
PFLANZENTRANSFORMATIONEN
.
127
2.2.1
TRANSFORMATION
VON
NICOTIANA
TABACUM
.
127
2.2.2
TRANSFORMATION
VON
LYCOPERSICON
PERUVIANUM
.
128
2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
129
2.3.1
AGROBAKTERIEN
.
129
2.3.1.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
AGROBAKTERIEN
.
129
2.3.1.2
TRANSFORMATION
VON
AGROBAKTERIEN
.
129
2.3.1.3
AGROBAKTERIEN
MINIPREPS
.
129
2.3.2
CARRIER-DNA
.
130
2.3.3
DNA-AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
131
2.3.4
DNA-DEPHOSPHORYLIERUNG
MIT
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
.
131
12
2.3.5
DNA-FRAGMENTISOLIERUNG
AUS
LMP-GELEN
.
131
2.3.6
DNA-LIGATION
.
132
2.3.7
DNA-PLASMID-MIDIPREPS
.
132
2.3.8
DNA-PLASMID-MINIPREPS
UND
RESTRIKTIONS
ENZYMVERDAUE
.
133
2.3.9
DNA-SEQUENZIERUNG
.
133
2.3.10
GENOMISCHE
DNA-ISOLIERUNG
AUS
PFLANZEN
.
134
2.3.11
GEWINNUNG
VON
ANTISEREN
GEGEN
EXTRAZELLULAERE
INVERTASEN
.
135
2.3.11.1
KLONIERUNG
DER
EXPRESSIONSVEKTOREN
.
135
2.3.11.2
EXPRESSION
UND
ANREICHERUNG
DER
FUSIONSPROTEINE
.
135
2.3.11.3
IMMUNISIERUNG
VON
KANINCHEN
UND
GEWINNUNG
VON
ANTISEREN
.
136
2.3.12
HERSTELLUNG
DER
DNA-STANDARDS
FUER
DIE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
137
2.3.13
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.
COLI-ZELLEN
UND
TRANSFORMATION
.
137
2.3.14
NORTHEMBLOT-ANALYSEN
.
138
2.3.14.1
RNA-ISOLIERUNG
.
138
2.3.14.2
RNA-FORMALDEHYDGELELEKTROPHORESE
.
139
2.3.14.3
NORTHERN-BLOT
.
139
2.3.14.4
HYBRIDISIERUNG
.
140
2.3.15
POLLENUNTERSUCHUNGSMETHODEN
.
140
2.3.15.1
D
API-FAERBUNG
.
140
2.3.15.2
HISTOCHEMISCHE
GUS-FAERBUNGEN
.
141
2.3.15.3
IN
VITRO
POLLENKEIMUNGSTEST
.
141
2.3.15.4
IN
VITRO
POLLENREIFUNG
.
141
2.3.15.5
STAERKEFAERBUNG
MIT
I
2
/KI-LOESUNG
.
141
2.3.15.6
VITALITAETSTEST
.
142
2.3.16
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.
142
2.3.17
PRIMER-ANNEALING
.
142
2.3.18
REVERSE-TRANSKRIPTION
.
143
2.3.19
RNA-IN
SITU
HYBRIDISIERUNGEN
UND
NIN88
IMMUNOLOKALISATION
.
143
13
2.3.20
ZUCKERAUFNAHMEMESSUNGEN
.
144
2.4
BIOCHEMISCHE
UND
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
146
2.4.1
AUFNAHMEN
MIT
DEM
ELEKTRONENMIKROSKOP
.
146
2.4.2
BRADFORD-PROTEINBESTIMMUNGSTEST
.
146
2.4.3
HERSTELLUNG
VON
INVERTASEEXTRAKTEN
.
146
2.4.4
INVERTASEAKTIVITAETSTEST
.
147
2.4.5
SDS-PROTEINGELELEKTROPHORESE
UND
WESTEMBLOT
.
147
2.4.5.1
SDS-PAGE
.
147
2.4.5.2
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
SDS-PROTEINGELEN
.
148
2.4.5.3
WESTERN-BLOT
.
148
ANHANG
.
149
1
SEQUENZ
DES
NIN88-PROMOTORS
UND
IDENTIFIZIERTE
REGULATORISCHE
ELEMENTE
.
149
2
GENOMISCHE
SEQUENZ
VON
NIN88
MIT
DER
IDENTIFIZIERTEN
EXON-INTRON-STRUKTUR
.
153
3
NUKLEOTID
UND
ABGELEITETE
AMINOSAEURESEQUENZ
DER
EXONS
1
-
IV
VON
NIN88
.
156
4
GESAMTSEQUENZ
DES
GENOMISCHEN
INVERTASEKLONS
PNDG8
.
158
5
TEILSEQUENZEN
VON
EXTRAZELLULAEREN
INVERTASEN,
DIE
FUER
DIE
KONSTRUKTION
DER
ANTISENSE
KONSTRUKTE
VERWENDET
WURDEN
.
166
5.1
TEILSEQUENZ
AUS
NIN88
.
166
5.2
TEILSEQUENZ
AUS
NT-SSFRUCL
.
166
5.3
TEILSEQUENZ
AUS
CINL
.
167
6
NUKLEOTID
UND
ABGELEITETE
AMINOSAEURESEQUENZEN
DER
KLONIERTEN
HEXOSETRANSPORTER
AUS
TABAKANTHEREN
.
169
6.1
SEQUENZEN
VON
NT-HTPL
.
169
6.2
SEQUENZEN
VON
NT-HTP2
.
170
LITERATURVERZEICHNIS
.
173
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