Qualitative und quantitative Analyse eines "Fibroblast growth factor"-bindenden Proteins (FGF-BP) in Hirntumoren und Prostatakarzinomen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Marburg
Görich & Weiershäuser
2001
|
| Schriftenreihe: | Wissenschaft in Dissertationen
631 |
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| Beschreibung: | Marburg, Univ., Diss., 2001 |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
ALLGEMEINER
TEIL
.
1
1.1.1.
DIE
GEFAESSNEUBILDUNG
(ANGIOGENESE)
.
2
1.1.2.
DIE
HEMMUNG
DER
GEFAESSNEUBIIDUNG
(ANTI-ANGIOGENESE)
.
4
1.2.
SPEZIELLER
TEIL
.
6
1.2.1.
FIBROBLASTEN-WACHSTUMS-FAKTOREN
(FIBROBLAST
GROWTH
FACTORS,
FGF'S)
.
6
1.2.1.1.
MECHANISMEN
DER
BIOAKTIVIERUNG
VON
FGF-2
.
9
1.2.2.
DASFGF-BP
.
10
1.2.2.1.
REKOMBINANTES
FGF-BP
.
13
1.2.3.
ALLGEMEINE
BEDEUTUNG
VON
TUMORMARKERN
.
14
1.2.4.
TUMORE
DES
ZNS
(ZENTRAL-NERVEN-SYSTEMS)
.
15
1.2.4.1.
TUMORE
DER
GLIAZELLEN
.
16
1.2.4.2.
MENINGEOME
.
16
1.2.4.3.
EINFLUSS
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
AUF
DAS
GLIOM
UND
MENINGEOM-WACHSTUM
.
16
1.2.5.
DAS
PROSTATAKARZINOM
.
18
1.2.5.1.
DER
EINFLUSS
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
AUF
DAS
PROSTATAKARZINOM
.
18
1.3.
ARBEITSHYPOTHESEN
UND
ZIELE
.
20
2.
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.
21
2.1.
MATERIALIEN
UND
LABORGERAETE
.
21
2.1.1.
MATERIALIEN
.
21
2.1.2.
LABORGERAETE
.
22
2.2.
PROTEINCHEMISCHE
VERFAHREN
.
23
2.2.1.
BESTIMMUNG
VON
PROTEINKONZENTRATIONEN
.
23
2.2.1.1.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
UEBER
MESSUNG
DER
UV
ABSORPTION
.
23
2.2.1.2.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
MITTELS
BIO-RAD-ASSAY
.
24
2.2.1.3.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
MITTELS
BCA-ASSAY
.
24
2.2.2.
KONZENTRIERUNG
VON
PROTEINLOESUNGEN
.
26
INHALTSVERZEICHNIS
I)
2.2.3.
DIALYSE
VON
PROTEINLOESUNGEN
.
26
2.2.4.
GELANALYSE
VON
PROTEINEN
.
27
2.2.4.1.
HERSTELLUNG
VON
GELEN
FUER
DIE
SDS-POLYACRYTAMID
PLATTENGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
28
2.2.4.2.
GELELEKTROPHORETISCHE
TRENNUNG
DER
PROTEINE
.
29
2.2.4.3.
COOMASSIE
BRILLANT
BLUE-FAERBUNG
VON
GELEN
.
30
2.2.4.4.
SILBER-FAERBUNG
VON
GELEN
.
31
2.3.
IMMUNCHEMISCHE
VERFAHREN
.
32
2.3.1.
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
VON
FGF-BP
MITTELS
ELISA
.
32
2.3.1.1.
DURCHFUEHRUNG
DES
SANDWICH-ELISA
ZUR
BESTIMMUNG
VON
FGF-BP
.
33
2.3.2.
LOKALISIERUNG
VON
FGF-BP
MITTELS
IMMUNHISTOCHEMIE
.
35
2.3.2.1.
IMMUNENZYMATISCHE
NACHWEIS-VERFAHREN
.
35
2.3.2.2.
DURCHFUEHRUNG
DER
IMMUNFAERBUNG
.
37
2.3.3.
QUALITATIVE
BESTIMMUNG
FGF-BP
MITTELS
WESTERN
BLOT
.
39
2.3.3.1.
ELEKTROPHORETISCHER
TRANSFER
.
39
2.3.3.2.
SPEZIFISCHER
PROTEINNACHWEIS
.
40
2.3.4.
REINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
.
42
2.3.4.1.
REINIGUNG
VON
ANTL-(BP-T)
IGG
.
43
2.S.4.2.
DURCHFUEHRUNG
EINES
DOT
BLOTS
.
45
2.3.4.3.
TEILREINIGUNG
VON
IGYAUS
HUEHNEREIGELB
(IGY
FUERYYYOLK
IGG")
.
46
2.3.4.4.
ABTRENNUNG
DER
LIPOPROTEINE
VON
DER
IGY-LOESUNG
.
46
2.3.5.
REINIGUNG
VON
FGF-BP
.
47
2.3.5.
1.
REINIGUNG
VON
FGF-BP
AUS
KONDITIONIERTEN
MEDIEN
MITTELS
HEPARIN-AFFINITAETS-CHROMATOGRAPHIE
.
47
2.3.5.2.
REINIGUNG
VON
REKOMBINANTEN
FGF-BP
AUS
INSEKTENZELLEN
(BV-BP)
.
48
2.4.
MIKROBIOLOGISCHE
VERFAHREN
.
50
2.4.1.
KULTIVIERUNG
VON
BAKTERIEN
.
50
2.4.1.1.
MEDIEN
ZUR
KULTIVIERUNG
VON
BAKTERIEN
.
50
2.4.1.2.
PLATTEN-VORKULTUREN
.
50
2.4.1.3.
PLATTENKULTUREN
.
51
2.4.1.3.
FLUESSIGKULTUREN
.
51
INHALTSVERZEICHNIS
III
2.4.2.
AUFBEREITUNG
VON
BAKTERIENRASEN
FUER
DIE
UNTERSUCHUNG
MITTELS
WESTERN
BLOT
.
52
2.4.3.
HERSTELLUNG
VON
BAKTERIENLYSATEN
.
52
2.4.4.
AUFBEREITUNG
VON
BAKTERIENSEDIMENT
FUER
DIE
REINIGUNG
MITTELS
HEPARINSEPHAROSE
.
52
3.
ERGEBNISSE
.
53
3.1.
VORVERSUCHE
.
53
3.1.1.
OPTIMIERUNG
DES
ELISA
.
53
3.1.2.
REINIGUNG
VON
IGY
.
55
3.1.2.1.
TITERBESTIMMUNG
.
55
3.1.2.2.
ERHOEHUNG
DER
REINHEIT
DER
IGY-FRAKTION
.
56
3.1.2.3.
ERMITTLUNG
DER
OPTIMALEN
VERDUENNUNG
FUER
ELISA
.
59
3.1.3.
OPTIMIERUNG
DER
IMMUNFAERBUNG
.
60
3.1.4.
OPTIMIERUNG
DES
WESTERN
BLOT
.
60
3.1.5.
UEBERPRUEFUNG
DER
SPEZIFITAET
DES
FGF-BP-DETEKTIONSANTIKOERPERS
.
61
3.2.
BESTIMMUNG
DES
EXTINKTIONSKOEFFIZIENTEN
VON
FGF-BP
.
64
3.3.
EINFLUSS
VON
FGF-BP
AUF
DAS
WACHSTUM
VON
HIRNTUMOREN
.
64
3.3.1.
ERMITTLUNG
DER
ABSOLUT-MENGE
AN
FGF-BP
IN
MENINGEOMEN
.
65
3.3.2.
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
VON
FGF-BP
MITTELS
ELISA
.
67
3.3.3.
LOKALISIERUNG
VON
FGF-BP
MITTELS
IMMUNHISTOCHEMIE
.
74
3.3.4.
QUALITATIVE
BESTIMMUNG
VON
FGF-BP
MITTELS
WESTERN
BLOT
.
78
3.3.4.1.
NACHWEIS
DES
FGF-2/FGF-BP-KOMPLEXES
IN
VERSCHIEDENEN
GEWEBSLYSATEN
DER
RATTE
.
81
3.4.
EXPRESSIONSPROFIL
VON
FGF-BP
IN
PROSTATAKARZINOMEN
.
83
3.4.1.
LOKALISIERUNG
VON
FGF-BP
MITTELS
IMMUNHISTOCHEMIE
.
83
3.4.2.
UNTERSUCHUNG
VON
PROSTATAKARZINOM-ZELLLINIEN
MITTELS
WESTERN
BLOT
.
86
3.4.3.
UNTERSUCHUNG
VON
PROSTATAKARZINOM-ZELLLINIEN
MITTELS
ELISA
.
87
3.5.
UNTERSUCHUNG
VON
URINPROBEN
VON
KARZINOMPATIENTEN
AUF
FGF-BP
88
3.5.1.
UNTERSUCHUNG
DES
URINS
MITTELS
ELISA
.
88
3.5.2.
UNTERSUCHUNG
DES
URINS
MITTELS
WESTERN
BLOT
.
89
3.5.2.1.
KULTIVIERUNG
VON
BAKTERIEN
AUS
DEM
URIN
.
91
3.5.2.2.
ANREICHERUNG
VON
FGF-BP
UEBER
HEPARIN-SEPHAROSE-SAEULEN
.
93
INHALTSVERZEICHNIS
IV
4.
DISKUSSIONUNDAUSBLICK
.
96
4.1.
ALLGEMEINES
.
96
4.2.
EINFLUSS
VON
FGF-BP
AUF
INTRAKRANIELLE
WACHSTUMSVORGAENGE
.
96
4.3.
DIE
FGF-BP-EXPRESSION
IM
PROSTATAKARZINOM
.
99
4.4.
UNTERSUCHUNG
VON
ZELLMEDIEN
AUF
IHREN
GEHALT
AN
FGF-BP
.
101
4.5.
DER
FGF-BP
/
FGF-2-KOMPLEX
.
103
4.6.
NACHWEIS
FGF-BP-POSITIVER
BAKTERIEN
IM
URIN
VON
KARZINOMPATIENTEN
.
104
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
106
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
108
7.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
118 |
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