Untersuchungen zur Insertion von mitochondrialen Innenmembranproteinen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1999
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Freiburg (Breisgau), Univ., Diss., 2001 (Nur beschränkt für den Austausch) |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 MITOCHONDRIEN 1
1.2 PROTEINTRANPORT DURCH ODER IN DIE AUSSENMEMBRAN 5
1.3 PROTEINTRANSPORT DURCH ODER IN DIE INNENMEMBRAN 8
1.4 ZIELSETZUNG 12
2 MATERIALIEN UND METHODEN 13
2.1 CHEMIKALIEN UND GERAETE 13
2.1.1 CHEMIKALIEN 13
2.1.2 GERAETE 14
2.1.3 VERWENDETE STAEMME VON
S. CEREVISIAE UND E. COLI: 15
2.1.4 VERWENDETE VORSTUFENPROTEINE ~ 16
2.1.5 VERWENDETE ANTISEREN 17
2.1.6 VERWENDETE NAEHRMEDIEN 17
2.2 ALLGEMEINE PROTEINCHEMISCHE METHODEN 18
2.2.1 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 18
2.2.2 FAELLUNG VON PROTEINEN 18
2.2.3 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON PROTEINEN 19
2.2.4 TRANSFER VON PROTEINEN AUS POLYACRYLAMIDGELEN AUF MEMBRANEN 23
2.2.5 AUTORADIOGRAPHIE VON POLYACRYLAMIDGELEN UND MEMBRANEN 24
2.2.6 SYNTHESE RADIOAKTIV MARKIERTER VORSTUFENPROTEINE 24
2.3 IMMUNOLOGISCHE METHODEN 25
2.3.1 IMMUNOCHEMISCHER ANTIGENNACHWEIS NACH ELEKTROTRANSFER 25
2.3.2 KOIMMUNPRAEZIPITATION 26
2.4 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN / 27
2.4.1 ISOLIERUNG VON MITOCHONDRIEN AUS DER HEFE
S. CEREVISIAE 27
2.4.2 SUBFFAKTIONIERUNG VON MITOCHONDRIEN 28
2.4.3 ABSCHAETZUNG DES MITOCHONDRIALEN INNENMEMBRANPOTENTIALS A\|/ 29
2.5 IMPORT VON VORSTUFENPROTEINEN IN ISOLIERTE MITOCHONDRIEN 30
2.5.1 PROTEASE-VORBEHANDLUNG VON MITOCHONDRIEN 30
2.5.2 IMPORT AUS RETIKULOZYTENLYSAT 30
2.5.3 UNTERSUCHUNG DER ATP-ABHAENGIGKEIT 31
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
II
2.5.4 NACHBEHANDLUNG VON MITOCHONDRIEN 33
2.6 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 33
2.6.1 PCR-AMPLIFIZIERUNG VON DNA 33
2.6.2 HORIZONTALE GELELEKTROPHORESE VON DNA 34
2.6.3 REINIGUNG UND KONZENTRIERUNG VON DNA 34
2.6.4 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON DNA 35
2.6.5 /-VZYRO-TRANSKRIPTION 35
3 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 37
3.1 TRANSPORT DURCH DIE AUSSENMEMBRAN 37
3.1.1 NACHWEIS VON PROTEINKOMPLEXEN DURCH BN-PAGE 37
3.1.2 IMPORT DER VORSTUFENPROTEINE VON TIM22 UND VON TIM54 40
3.1.3 REZEPTORABHAENGIGKEIT DES IMPORTES 44
3.1.4 ATP-ABHAENGIGKEIT DES IMPORTS ~ 48
3.1.5 TRANSPORT DURCH DIE MITOCHONDRIALE AUSSENMEMBRAN 50
3.2 TRANSPORT IN DIE INNENMEMBRAN 55
3.2.1 TRANSPORT IN DIE MITOCHONDRIALE INNENMEMBRAN 55
3.2.2 EINFLUSS VON MTHSP70 AUF DIE TRANSLOKATION 63
3.2.3 EINFLUSS DER AMINOTERMINALEN POSITIV GELADENEN REGION
DES VORSTUFENPROTEINS VON TIM54 67
3.3 DIE KLEINEN TIM-PROTEINE 73
3.3.1 IMPORT VON TIM 10 UND TIM 12 73
3.3.2 REZEPTORABHAENGIGKEIT DES IMPORTES VON TIMLO UND TIML2 75
3.4 MTHSP70 UND DIE TRANSLOKATION UEBER DEN TIM22-TIM54-KOMPLEX 79
3.4.1 DIE TRANSLOKATION DES ADP/ATP-CARRIERS 79
3.4.2 DER IMPORTDEFEKT IN MTHSP70-MUTANTEN MITOCHONDRIEN 85
3.4.3 KOIMMUNPRAEZIPITATION 91
3.4.4 LOKALISATION DES IMPORTDEFEKTES 92
3.4.5 EINFLUSS DES MEMBRANPOTENTIALS 97
3.4.6 DIE AN DER TRANSLOKATION BETEILIGTEN KOMPONENTEN 100
3.4.7 UNTERSUCHUNG ZUR STABILITAET DER AUSSENMEMBRAN 102
3.4.8 IMPORT AUF STUFE III UND STUFE V DER CARRIER-TRANSLOKATION 104
3.5 EIN ERWEITERTES MODELL DER TRANSLOKATION MITOCHONDRIALER PROTEINE
107
4 ZUSAMMENFASSUNG 112
5 LITERATUR 113 |
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