Die CD40-Rezeptor-Signaltransduktion im Zervixkarzinom verschiebt das MMP-9/TIMP-1-Verhältnis zu Gunsten der Protease:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
DAS
ZERVIXKARZINOM
1
1.1.1.
AETIOLOGIE
UND
EPIDEMIOLOGIE
DES
ZERVIXKARZINOMS
1
1.1.2.
KLINIK
UND
DIAGNOSE
DES
ZERVIXKARZINOMS
2
1.2.
DIE
BASALMEMBRAN
3
1.3.
DIE
MATRIX-METALLOPROTEASEN
3
1.3.1.
DIE
FAMILIE
DER
MATRIX-METALLOPROTEASEN
3
1.3.2.
PHYSIOLOGISCHE
UND
PATHOLOGISCHE
FUNKTIONEN
DER
MMPS
5
1.3.3.
DIE
GELATINASEN
7
1.3.4.
SYNTHESE
UND
REGULATION
DER
GELATINASEN
MMP-2
UND
MMP-9
7
1.4.
DER
REZEPTOR
CD40
UND
SEIN
LIGAND
CD40L
10
1.5.
ZIELSETZUNG
12
2.
MATERIALIEN
13
2.1.
GERAETE
13
2.2.
LABORBEDARF
13
2.3.
REAGENZIEN
14
2.4.
LOESUNGEN
FUER
ZELLKULTUREN
15
2.5.
LOESUNGEN
UND
PUFFER
FUER
DIE
ZYMOGRAPHIE
16
2.6.
ANTIKOERPER
18
2.7.
ZELLEN
18
3.
METHODEN
20
3.1.
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
20
3.2.
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
20
3.3.
EINFRIEREN
VON
ZELLEN
21
3.4.
PARAFORMALDEHYD-FIXIERUNG
DER
BHK-ZELLEN
21
3.5.
STIMULATION
VON
ZELLEN
UND
GEWINNUNG
VON
ZELLUEBERSTAENDEN
22
3.5.1.
ZELLAUSSAAT
VON
SIHA-,
SW756-,
HELA
UND
HELACTWO-ZELLEN
IN
22
24-LOCH-PLATTEN
3.5.2.
STIMULATION
DER
SIHA-,
SW756-,
HELA
UND
HELACWO-ZELLEN
MIT
22
FIXIERTEN
BHK-ZELLEN
3.5.3.
ABERNTEN
DER
ZELLUEBERSTAENDE
23
3.6.
ABGEWANDELTE
STIMULATIONSPROTOKOLLE
23
3.6.1.
INHIBITION
DER
CD40L-AKTIVITAET
MIT
SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
23
3.6.2.
KINETIKVERSUCH
24
3.6.3.
VORSTIMULATION
VON
SW756
MIT
LNTERLEUKIN-10
24
3.6.4.
VORSTIMULATION
DER
ZELLEN
MIT
DEN
ANTIOXIDANTIEN
ACC,
BHA
UND
24
PDTC
3.6.5.
VORSTIMULATION
DER
ZELLEN
MIT
RETINOLSAEURE
25
3.7.
DURCHFUEHRUNG
DER
GELATINE-ZYMOGRAPHIE
25
3.8.
VITALFAERBUNG
26
3.9.
TRANSIENTE
TRANSFEKTIONEN
27
3.9.1.
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
DES
VEKTORS
CMV-EGFP
IN
27
SW756-ZELLEN
3.9.2.
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
NF
K
B
P65
IN
SW756
UND
28
SIHA-ZELLEN
3.10.
TIMP-1
ELISA
29
3.10.1.
PRAEPARATION
DER
REAGENZIEN
29
3.10.2.
DURCHFUEHRUNG
DES
TIMP-1
ELISAS
30
4.
ERGEBNISSE
31
4.1.
DIE
INTERAKTION
DES
REZEPTORS
CD40
MIT
DEM
CD40-LIGANDEN
31
INDUZIERT
IN
ZERVIXKARZINOMZELLEN
DIE
SEKRETION
DER
MMP-9
4.1.1.
INDUKTION
DER
MMP-9
IN
CD40
TRANSFIZIERTEN
HELA-ZELLEN
31
4.1.2.
INDUKTION
DER
MMP-9
IN
ZERVIXKARZINOMZELLEN,
DIE
33
NATUERLICHERWEISE
DEN
REZEPTOR
CD40
EXPRIMIEREN
4.1.3.
DIE
VORINKUBATION
DER
BHKCWOI-ZELLEN
MIT
EINEM
34
NEUTRALISIERENDEN
CD40L-ANTIKOERPER
VERHINDERT
DIE
MMP-9
INDUKTION
IN
SW756-ZELLEN
4.1.4.
INDUKTIONSKINETIK
DER
MMP-9
IN
SW756-ZELLEN
35
4.2.
ANALYSE
INTRAZELLULAERER
CD40-SIGNALE,
DIE
AN
DER
MMP-9
36
PRODUKTION
BETEILIGT
SIND
4.2.1.
DIE
ANTIOXIDANTIEN
ACC
UND
BHA
VERMINDERN
DIE
CD40
36
VERMITTELTE
INDUKTION
DER
MMP-9-SEKRETION
IN
SW756-ZELLEN
4.2.2.
RETINOLSAEURE
KANN
DIE
CD40-VERMITTELTE
MMP-9-SEKRETION
NICHT
39
EFFEKTIV
UNTERDRUECKEN
4.2.3.
LNTERLEUKIN-10
BEWIRKT
KEINE
VERMINDERUNG
DER
CD40
40
INDUZIERTEN
MMP-9-SEKRETION
4.3.
DIE
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
NF
K
B
P65
INDUZIERT
DIE
MMP-9
41
SEKRETION
IN
SIHA
UND
SW756-ZELLEN
4.4.
DIE
STIMULATION
DES
REZEPTORS
CD40
INDUZIERT
KEINE
ERHOEHTE
42
SEKRETION
DES
TISSUE
INHIBITORS
OF
METALLOPROTEINASES-1
5.
DISKUSSION
44
6.
ZUSAMMENFASSUNG
48
7.
LITERATURVERZEICHNIS
49 |
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