Lokalisation und Funktion des Tumorsuppressors p53 in Neuroblastomzellen:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1
2
2.1
2
.
1.1
2
.
1.2
2.1.3
2.1.4
2.1.5
2
.
1.6
2.1.7
2.2
2
.
2.1
2
.
2.2
2.3
2.3.1
2.3.2
2.3.2.1
2.3.2.1.1
2.3.2.1.2
2.3.2.2
2.3.2.3
2.3.2.4
2.3.2.5
2.4
2.4.1
2.4.2
2.5
2.5.1
2.5.2
ALLGEMEINE EINFUEHRUNG.
.1
EINLEITUNG.2
DER TUMORSUPPRESSOR P53.2
DAS P53-GEN.2
DAS P5 3-PROTEIN. 2
P53 UND ZELLZYKLUSKONTROLLE.4
P53 UND APOPTOSE.6
P53 UND ONTOGENESE.8
P53 UND TUMORGENESE.8
MUTATIONEN DES P53-GENS.9
DER TUMORSUPPRESSOR P21
GEN- UND PROTEINSTRUKTUR VON P21
, WAFI/CIP1/SDI1
WAF1/CIP1/SDM
WAF1/CIP1/SD11
.10
.10
FUNKTIONEN VON
P2IW-'.11
DAS ONKOPROTEIN MDM2.11
GEN- UND PROTEINSTRUKTUR VON MDM2.11
ALLGEMEINE FUNKTIONEN VON MDM2.12
DIE KONTROLLE VON WT-P53 DURCH MDM2.12
DIE KONTROLLE VON WT-P53 DURCH MDM2 IN UNGESTRESSTEN ZELLEN.13
DIE KONTROLLE VON WT-P53 DURCH MDM2 IN GESTRESSTEN ZELLEN.14
DIE KONTROLLE VON MT-P53 DURCH MDM2.14
DIE KONTROLLE VON WT-P53 DURCH MUTIERTES MDM2.15
DIE KONTROLLE VON WT-P53 BEI UEBEREXPRESSION VON MDM2.16
DIE KONTROLLE VON KONSTITUTIV ZYTOPLASMATISCH AKKUMULIERTEM WT-P53.16
DAS NEUROBLASTOM.17
KLINISCHE ASPEKTE DES NEUROBLASTOMS.17
BESONDERHEITEN DES NEUROBLASTOMS BEZUEGLICH SEINES P53-STATUS.18
DAS MEDULLOBLASTOM.21
KLINISCHE ASPEKTE DES MEDULLOBLASTOMS.21
DAS MEDULLOBLASTOM UND SEIN P53-STATUS.22
GEGENSTAND DER ARBEIT.23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/961960582
INHALTSVERZEICHNIS
II
4 MATERIAL UND METHODEN.24
4.1 MATERIAL.24
4.1.1 ZELLLINIEN.24
4.1.1.1 NEUROBLASTOMZELLLINIEN.24
4.1.1.1.1 ZELLLINIE CHP134.24
4.1.1.1.2 ZELLLINIE LAN-5.25
4.1.1.1.3 ZELLLINIE SK-N-SH UND SUBLINIE YYAW-L".26
4.1.1.2 MEDULLOBLASTOMZELLLINIE D283 MED.27
4.1.1.3 KONTROLLZELLLINIE MCF7.28
4.1.2 ANTIKOERPER.28
4.1.2.1 GEGEN P53 GERICHTETE ERSTANTIKOERPER.28
4.1.2.1.1 DO-1 (AB-6).28
4.1.2.1.2 PABL801 (AB-2).~.29
4.1.2.1.3 PABL620.29
4.1.2.1.4 PAB240.30
4.1.2.1.5 PAB421 (AB-1).30
4.1.2.1.6 YYPOLY-P53D" (YYPAN-P53").31
4.1.2.1.7 YYPOLY-P53L" (CM-1).31
4.1.2.2 GEGEN P21 UND MDM2 GERICHTETE ERSTANTIKOERPER.31
4.1.2.2.1 WAF-1 (AB-1). 31
4.1.2.2.2 WAF-1 (SX118).32
4.1.2.2.3 MDM2 (AB-1).,.32
4.1.3 DAS ZYTOSTATIKUM MITOMYCIN C.32
4.2 METHODEN.33
4.2.1 ZELLKULTURARBEITEN.33
4.2.2 MYKOPLASMENTEST.-.34
4.2.3 ZYTOTOXIZITAETSERMITTLUNG VON MITOMYCIN C NACH DER MTT-METHODE.35
4.2.4 IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS ZELLULAERER ANTIGENE.36
4.2.5 NACHWEIS DER DNS-BINDEFAEHIGKEIT VON PROTEINEN MITTELS EMSA.39
4.2.5.1 HERSTELLUNG VON ZELLLYSATEN FUER DEN EMSA.40
4.2.5.2 HERSTELLUNG DES EMSA-GELS.41
4.2.5.3 VORBEREITUNG DER PROBEN UND EMSA-DURCHFUEHRUNG.42
4.2.6 NACHWEIS ZELLULAERER ANTIGENE MITTELS WESTEM-BLOT-ANALYSE.44
4.2.6.1 HERSTELLUNG VON ZELLLYSATEN FTIR DEN WESTERN-BLOT.44
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.2.6.2 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE).45
4.2.OE.3 WESTEM-BLOTTING.48
4.2.6.4 IMMUNOLOGISCHE WESTEM-BLOT-ANALYSE.49
5 ERGEBNISSE.52
5.1 ERMITTLUNG DER ZYTOSTATIKA-SUSZEPTIBILITAET VON NEURO- UND
MEDULLOBLASTOMZELLEN.52
5.2 ERGEBNISSE DER INDIREKTEN IMMUNFLUORESZENZEN:.54
5.2.1 ABHAENGIGKEIT DER P53-AKKUMULATION VON DER
ZYTOSTATIKAKONZENTRATION.54
5.2.2 ABHAENGIGKEIT DER P53-AKKUMULATION VON DER DAUER DER
ZYTOSTATIKAEXPOSITION.58
5.2.3 LOKALISATION VON P53, P21 UND MDM2 IN ZELLEN SECHS VERSCHIEDENER
ZELLLINIEN.62
5.3 ERGEBNISSE DES EMSA.:.68
5.4 ERGEBNISSE DER WESTERN-BLOT-ANALYSEN.70
5.4.1 P53-, P21- UND MDM2-STATUS DER KONTROLLZELLLINIE MCF7.70
5.4.2 P53-, P21- UND MDM2-STATUS DER MEDULLOBLASTOMZELLLINIE D283 MED.70
5.4.3 P53-, P21- UND MDM2-STATUS DER NEUROBLASTOMZELLLINIE SK-N-SH.72
5.4.4 P53-, P21- UND MDM2-STATUS DER NEUROBLASTOMZELLLINIE LAN-5.72
5.4.5 P53-, P21- UND MDM2-STATUS DER NEUROBLASTOMZELLLINIE CHP 134.74
6 DISKUSSION.75
6.1 DIE ZUR ZYTOTOXIZITAETSERMITTLUNG VON MITOMYCIN C VERWENDETE
MTT-METHODE.'.75
6.2 LOKALISATION UND FUNKTION DES TUMORSUPPRESSORS P53.77
6.2.1 LOKALISATION UND FUNKTION DES TUMORSUPPRESSORS P53 IN
MCF7-ZELLEN.77
6.2.2 LOKALISATION UND FUNKTION DES TUMORSUPPRESSORS P53 IN
NEUROBLASTOMZELLEN.78
6.2.3 LOKALISATION UND FUNKTION DES TUMORSUPPRESSORS P53 IN
MEDULLOBLASTOMZELLEN.79
6.3 BEURTEILUNG DER P53-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPER.80
6.3.1 DO-1 (AB-6).81
6.3.2 PAB240.
82
6.3.3 PAB421 (AB-1).83
6.3.4 PAM620.84
6.3.5 PABL801 (AB-2).85
INHALTSVERZEICHNIS
IV
6.3.6 YYPOLY-P53L" (CM-1).88
6.3.7 YYPOLY-P53D" (YYPAN-P53").89
6.4 AUSBLICK.89
7 ZUSAMMENFASSUNG.91
8 LITERATURVERZEICHNIS.92 |
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